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Principles of Bacterial Community DNA Extraction

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Bacterial Community DNA Extraction

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Summary

박테리아 콜로니에서 군집 DNA 추출

출처: 이안 페퍼 박사와 찰스 게르바 박사의 연구소 - 애리조나 대학교
데모 저자: 루이사 이크너

토양 내의 미생물 지역 사회에 대한 전통적인 분석 방법은 일반적으로 선택적 및 차동 매체 또는 직접 카운트 분석에 희석 및 도금 방법론을 활용하는 문화적 분석과 관련이 있습니다. 직접 카운트는 존재하는 박테리아의 총 수에 대한 정보를 제공하지만, 지역 사회 내에 존재하는 인구의 수 또는 다양성에 대한 정보를 제공하지 않습니다. 판 수는 총 문화 또는 선택 된 문화 인구의 열거를 허용하고, 따라서 존재하는 다른 인구에 대한 정보를 제공합니다. 그러나 토양 박테리아의 1% 미만이 쉽게 배율로 나오기 때문에 문화 정보는 그림의 한 조각만 제공합니다. 문화가 될 수 있는 공동체의 실제 분수는 문화적 수에 따라 선택된 매체에 따라 달라집니다. 단일 매체는 특정 매체에 가장 적합한 채우기를 선택합니다.

최근 몇 년 동안, 토양 샘플에서 추출 된 지역 사회 DNA를 연구의 장점이 명백해지고있다. 이 비문화 기반 접근 방식은 문화 기반 접근 방식보다 존재하는 실제 커뮤니티를 보다 더 대표하는 것으로 생각됩니다. 존재하는 인구의 모형에 관하여 정보를 제공하는 것 이외에, 이 접근은 또한 그들의 유전 잠재력에 관하여 정보를 제공할 수 있습니다. 다른 기술과 마찬가지로 DNA 추출로 얻을 수 있는 데이터에는 한계가 있습니다. 따라서 많은 연구자들은 현재 직접 및 문화적 수와 함께 DNA 추출을 사용하여 환경 샘플에서 얻은 데이터를 최대화합니다.

1. 세균 성 지역 사회 DNA 추출

  1. 절차를 시작하려면 체질 토양 100 g의 무게를 측정합니다. 폴리 프로필렌 용기에 이것을 추가하고, 토양 매트릭스에서 박테리아의 방출을 촉진하기 위해 EDTA로 개정 된 트리스 버퍼로 구성된 추출 버퍼 100 mL을 추가 한 다음 손으로 흔들어.
  2. 다음으로, 유리 구슬 의 100 g의 무게, 믹싱 용기에 추가합니다. 15분 동안 비드 구타 장치 또는 기계식 손목 동작 셰?...

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배양 된 식민지에서 또는 토양에서 추출 된 지역 사회 DNA는 샘플 내에서 원래 박테리아의 특성화를 허용하는 생물 정보학 및 "omic"접근 방식을 받을 수 있습니다. omic 접근은 metagenomics를 포함합니다 – 16S rRNA 시퀀싱을 통해 지역 사회 내의 "누구"의 결정. 이것은 지역 사회 내의 다양성에 대한 추정을 제공합니다.

원래 토양 샘플에서 세균 세포의 수를 계산할 수도 있다. 지역 ?...

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