JoVE Logo

Sign In

תקנים פנימיים

Overview

מקור: המעבדה של ד"ר .B ג'יל וטון - אוניברסיטת וירג'יניה

המטרה של ניתוחים כימיים רבים היא ניתוח כמותי, שבו נקבעת כמות החומר במדגם. על מנת לחשב במדויק את הריכוז של לא ידוע מדגם, הכנת מדגם זהיר הוא המפתח. בכל פעם שדגימה מטופלת או מועברת, חלק מהדגימה עלולה ללכת לאיבוד. עם זאת, ישנן אסטרטגיות למזעור אובדן מדגם. ישנן גם אסטרטגיות להתמודדות עם אובדן מדגם ועדיין לבצע מדידות מדויקות של ריכוז.

כדי למזער אובדן מדגם, האידיאל הוא למזער את מספר שלבי הטיפול וההעברה לדוגמה. לדוגמה, עיסוי מדגם מוצק ישירות לתוך בקבוקון שפתרון ייעשה בהפחתת שלב העברה. אם יש צורך לעבור מבקבוקון אחד למשנהו ודילול נעשה, אז שטיפה משולשת של כלי הזכוכית מסייעת להבטיח את כל המדגם מועבר. אסטרטגיות אחרות ספציפיות יותר לדגימה. לדוגמה, דגימות כי ספיחות לזכוכית, כגון חלבונים, עשוי להיות מטופל טוב יותר צינורות חד פעמיים פוליפרופילן. הצינורות אינם הידרופיליים, כך שאם יש להזרים כמות קטנה של דגימה במים, עדיף שכבר הוסיפו את המים לצינור, כך שניתן יהיה להזרים את הדגימה ישירות לממס. זה יכול להיות טוב יותר להתרכז, ולא יבש לחלוטין מדגם, עקב הפסדים של אי-מסיסות לאחר rehydration.

מקור נוסף לאובדן מדגם הוא באמצעות מניפולציות מדגם לא שלמות. לדוגמה, אם נעשה שימוש בהליך נגזרת והנגזרת אינה שלמה, לא נצפתה כמות הדגימה המלאה. שגיאות כגון זו הן שגיאות שיטתיות, וניתן לפתור אותן על-ידי תיקון הבעיה, כגון שינוי הליך ההפקה. סיבה נוספת לשגיאה שיטתית במדידות היא אפקטי מטריצה. אלה יכולים להפריע למדידה של חומרים מסוימים וביצוע כיולים באותה מטריצה כמו המדגם יכול להפחית את האפקט הזה.

ניתוח כמותי מתבצע בדרך כלל באמצעות תקנים חיצוניים או פנימיים. עבור סטנדרטים חיצוניים, עקומת כיול נעשית על ידי מדידת ריכוזים ידועים שונים של ניתוח העניין. לאחר מכן, המדגם מופעל בנפרד מהתקן. עבור סטנדרטים פנימיים, התקן נמצא באותה מדגם כמו ניתוח העניין, ומאפשר את המדידה להילקח בו זמנית. בדרך כלל, מינים שונים מתווספים הנקראים התקן הפנימי והיחס בין התגובה עבור תקן פנימי זה לבין הניתוח מחושב. הרעיון הוא שהיחס בין התגובה, הנקרא גורם התגובה, הוא פרופורציונלי לריכוז שלהם. בעוד שהשיטה חייבת להיות מסוגלת להבחין בין ניתוח העניין לבין התקן הפנימי, כל הפסדי מדגם המתרחשים לאחר הוספת התקן הפנימי צריכים להיות דומים עבור שני החומרים ולכן היחס של התגובה נשאר זהה. מקרה מיוחד של שימוש בתקנים פנימיים הוא השיטה של תוספות סטנדרטיות, שבה כמויות הולכות וגדלות של הניתוח מתווספות לפתרון והכמות המקורית של הניתוח מחושבת לאחור. תקנים פנימיים יכולים לשמש כרומטוגרפיה, אלקטרוכימיה, ספקטרוסקופיה.

Procedure

1. טיפול נכון בדוגמיות: יצירת פתרון

  1. קח נקייה מסה את הכמות הנכונה של מדגם לתוכו. הקלט את המסה בפועל בשימוש. בדוגמה זו, פתרון של אדנין נעשה בקבוק נפחי לשימוש כסטנדרט פנימי לניתוח הבא. המסה של אדנין היא 100 מ"ג. אין להמיס ישירות לתוך בקבוק נפחי מכיוון שיש לו צוואר ארוך ולא ניתן להוסיף או להסיר...

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Application and Summary

תקנים פנימיים משמשים בתחומים רבים, כולל ספקטרוסקופיה וכרומטוגרפיה. בספקטרוסקופיה, תקנים פנימיים יכולים לעזור לתקן שגיאות אקראיות עקב שינויים בעוצמת מקור האור. אם מנורה או מקור אור אחר יש כוח משתנה, זה ישפיע על הספיגה וכתוצאה מכך, פליטה של מדגם. עם זאת, היחס בין תקן פנימי לאנתח יישאר קבוע, ג?...

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Tags
Internal StandardSample LossConcentrationAccurate CalculationsCareful Sample PreparationSample HandlingTransfer StepsSystematic ErrorsMatrix EffectsAnalytic ProcedureSpecies SimilarCompound Of InterestKnown ConcentrationSample LossesInternal StandardLab TechniqueUnknown ConcentrationChromatographySpectroscopySignal RatioResponse Factor

Skip to...

0:00

Overview

1:14

Principles of Internal Standards

3:38

Preparation of an Internal Standard Calibration Curve

5:13

Preparation of a Real Sample with an Internal Standard

7:05

Applications

8:54

Summary

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved