Name: preparation of single-cell suspensions from mouse spleen with the gentlemacs dissociator
Uploaded: 2008-12-11T00:00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator at JoVE.com

<p class="jove_step"> 장비 소개 </p><ol><li> 조직은 가능한 단일 셀 suspensions에 보라색 C 튜브를 사용하여 부드럽게 dissociated 있습니다. </li><li> PBS / BSA EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) 버퍼는 세포를 떼어 놓다하는 데 사용됩니다. 버퍼는 EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산)를 포함하는 솔루션을 Rinsing autoMACS 20 부분 BSA 주식 솔루션 1 부분을 추가하여 준비가되어 있습니다. </li><li> 맥 사전 분리 필터는 성공적인 맥 분리 및 후속 분석을 추진, dissociated 조직 샘플은 모든 세포 대단히 짧은 시간 무료 수 있도록하는 데 사용됩니다. </li></ol><p class="jove_step"> 비장 세포를 Dissociating </p><ol><li> 전체 spleens은 gentleMACS의 Dissociator를 사용 splenocytes의 단일 셀 suspensions에 disscociated 있습니다. </li><li> 절차를 시작하려면 spleens의 질량에 따라 버퍼의 볼륨 C 튜브를로드합니다. 젊은 성인 여성의 BALB / C 마우스의 건강한 비장은 80-120에 대한 MG 무게. 이 질량의 모든 1-2 spleens 버퍼 3 ML이 필요합니다. 감염과 오래된 동물이나 동물에서 Spleens는 종종 큰되며 버퍼에 무게해야합니다. 버퍼 볼륨 따라 크기를 조정해야합니다. 10 ML 총 버퍼 량을 초과하지 마십시오. </li><li> 버퍼 3 ML를 포함하는 C 튜브로 해부하는 비장을 추가합니다. </li><li> C 튜브 뚜껑이 꽉 있는지 확인하고 아래 뚜껑으로 dissociator에 C 튜브를 연결합니다. </li><li> dissociator 최대 전력. 1-2 spleens 들어, 프로그램 m_spleen_01을 선택합니다. 이 프로그램은 완료 56초를 취할 것입니다. spleens의 수가 큰 경우, 프로그램 m_spleen_04을 사용하여,이 프로그램은 비장 조직의 720 밀리그램을 위해 사용할 수 있습니다. </li><li> 프로그램의 완성 후에 기본 비장 조직 splenocyte 현탁액에 dissociated 있습니다. </li><li> 약 30 초에 대한 상온에서 300xg에서 전체 세포 현탁액을 스핀. 이것은 로터와 스테 이터가 C 튜브의 하단에 수집된 모든 세포의 해제되어 있는지 확인합니다. </li><li> 1000 microliter의 pipetter를 사용하여 C 튜브 캡의 심장 - 봉인 개방을 통해 샘플을 제거합니다. </li></ol><p class="jove_step"> 여과 단계 </p><ol><li> 여과 단계를 시작하려면 사전 분리 필터 30 μm의 기공 크기가 셀 스트레이너에 dissociated 조직을 적용합니다. 스트레이너는 2 개 이상 spleens 1-2 spleens 또는 50 ML 튜브에 대한 15 ML 튜브에 맞게해야합니다. </li><li> 세포 현탁액이 통과하자. 그렇다면 버퍼의 5 ML을 적용하여 필터를 세척. </li><li> 자, 비장 세포 펠렛의 모든 splenocytes를 수집하는 10 분 동안 상온에서 300xg에서 세포 현탁액으로 튜브를 원심 분리기. </li><li> 이제 우리는 dissociated splenocytes의 펠렛을 가지고, 우리는 뜨는을 기음과 버퍼의 적절한 금액 세포 펠렛을 resuspend한다. </li></ol><p class="jove_content"> gentleMACS의 Dissociator를 사용하여 비장의 분리는 MACSQuant 분석기를 사용 유동세포계측법으로 증명 가능한 splenocytes의 높은 비율을 얻을 것입니다. 죽은 세포는 propidium 요오드화물의로 물들어있다. 제공된 예제에서는 앞으로 사이드 분산형 점 줄거리는 준비된 splenocytes를 보여줍니다. </p>

모든 프로토콜 및 데이터 시트는에서 구할 수 있습니다<a href="http://www.miltenyibiotec.com"&gt; http://www.miltenyibiotec.com.</a&gt;.

<p> 지루하고 고통스러운 종종 수동 dissociations를 방지하려면 gentleMACS의 Dissociator 하나는 제어하고 재현성 조건 하에서 매우 효율적으로 조직을 떼어 놓다 수 있습니다. 조직 분리 절차는 높은 생존 속도로 세포 수율 세포 suspensions에 부드러운 있습니다. C 튜브와 함께 gentleMACS의 Dissociator 다양한 조직에서 단일 셀 suspensions의 준비를 위해 설계되었습니다. 악기는 마우스 비장, 간, 폐, 또는 신경 조직을 떼어 놓다로 사전 설정된 프로그램의 숫자를 갖추고 있습니다. 프로그램 및 프로토콜의 범위는 지속적으로 추가 조직을 포함하도록 확장됩니다. </p>

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>gentleMACS&#x2122; Starting Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>130-093-235</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>C Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-093-237</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>13 mL Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-596</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>autoMACS&#x2122; Rinsing Solution </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-222</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>MACS&#174; BSA Stock Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-376</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Pre-Separation Filters </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-041-407</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>MACSQuant Analyzer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-092-197</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Propidium Iodide Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>130-093-233</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx</a></td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

preparation of single-cell suspensions from mouse spleen with the gentlemacs dissociator

<p class="jove_content">단일 셀 suspensions는 세포 분리, 세포 분석 및 세포 배양 실험에 꼭 필요합니다. 지루하고 고통스러운 종종 수동 dissociations을 피하기 위해 gentleMACS의 Dissociator 하나는 제어하고 재현성 조건 하에서 매우 효율적으로 조직을 떼어 놓다 수 있습니다. gentleMACS의 Dissociator는 최적의 사용자 안전을 절약해주는 및 표준화를 결합, 마우스 비장을 떼어 놓다 수 있습니다. 이 동영상은 gentleMACS Dissociator, 기계적으로 생균 suspensions을 생산하기 위해 특수 튜브를 사용하여 조직을 중단 수있는 자동화된 벤치 - 탑 장치를 사용 마우스 spleens을 떼어 놓다하는 방법에 대해 설명합니다. 분리 후, spleens는 여과 centrifuged, 추가적인 애플 리케이션을위한 resuspended 있습니다.</p>

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Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

<p class="jove_content">이 동영상은 마우스 splenocytes의 단일 셀 suspensions를 준비하는 gentleMACS의 Dissociator를 사용하여 자동 조직 분리에 대한 간단한 시간 절약 기법을 설명합니다.</p>

gentleMACS Dissociator과 마우스 비장에서 단일 셀 Suspensions의 준비

Single-cell suspensions are a prerequisite for experiments in cell separation, cell analysis and cell culture.  To avoid tedious and often painful manual ...

<p>


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&#x4E2D;&#x6587;
</a>


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JapaneseVersion
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</p>

Research

JoVE Journal

Biology

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

gentleMACS Dissociator를 사용하여 마우스 폐 조직에서 단일 셀 Suspensions의 표준화 준비

The preparation of single-cell suspensions from tissues is an important prerequisite for many experiments in cellular research. The process of ...

연구

생물학

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