Name: preparation of single-cell suspensions from mouse spleen with the gentlemacs dissociator
Uploaded: 2008-12-11T00:00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator at JoVE.com

<p class="jove_step"> Introdução ao Equipamento </p><ol><li> Tecido é cuidadosamente dissociada, utilizando tubos de violeta C em uma única célula viável suspensões. </li><li> O PBS / BSA-tampão de EDTA é utilizado para dissociar as células. O buffer é preparada por adição de 1 parte de solução de BSA estoque para 20 partes de autoMACS lavagem solução contendo EDTA. </li><li> O MACS pré-separação Filtros são usados ​​para que as amostras de tecido dissociado estão livres de todos os aglomerados de células, promovendo a separação MACS sucesso e posterior análise. </li></ol><p class="jove_step"> Dissociar as células do baço </p><ol><li> Baços todo são disscociated em uma única célula suspensões de esplenócitos usando o Dissociator gentleMACS. </li><li> Para iniciar o procedimento, coloque o tubo C com um volume de tampão de acordo com a massa do baço. Um baço saudável de um jovem adulto camundongo BALB / c fêmeas pesa cerca de 80-120 mg. Cada 1 a 2 baços dessa massa necessitam de 3 mL de tampão. Baços de animais mais velhos ou animais com infecções são muitas vezes maiores e devem ser pesados ​​em buffer. Os volumes de buffer deve ser adaptado em conformidade. Não exceder o volume total do buffer de 10 mL. </li><li> Adicione o baço dissecados para o tubo C contendo 3 ml de tampão. </li><li> Certifique-se de que a tampa do tubo C é apertado e conecte o tubo C ao dissociator com a tampa para baixo. </li><li> Ligue o dissociator. Por 1-2 baços, selecione m_spleen_01 programa. O programa terá 56 segundo para ser concluído. Se o número de baços é maior, usar o programa m_spleen_04; este programa pode ser usado para até 720 mg de tecido esplênico. </li><li> Após a conclusão do programa, o tecido do baço nativa é dissociada em uma suspensão esplenócitos. </li><li> Girar a suspensão de células inteiras em 300xg em temperatura ambiente por cerca de 30 seg. Isso irá garantir que o rotor eo estator são libertados de todas as células que são coletados na parte inferior do tubo C. </li><li> Retirar a amostra através do septo, selada abertura da tampa do tubo C usando uma pipeta 1000 microlitro. </li></ol><p class="jove_step"> Etapa de filtração </p><ol><li> Para começar a etapa de filtração, aplicar o tecido dissociado para o Filtro de pré-separação ou um filtro de células com 30 mM tamanho dos poros. O filtro deve caber um tubo de 15 mL por 1-2 baços ou um tubo de 50 mL por mais de 2 baços. </li><li> Deixe a suspensão de células passar. Em seguida, lave o filtro através da aplicação de 5 mL de tampão. </li><li> Agora, centrifugar o tubo com a suspensão de células em 300xg, em temperatura ambiente por 10 minutos para coletar todos os esplenócitos em um baço pellet celular. </li><li> Agora, que temos uma pelota de esplenócitos dissociados, devemos aspirar o sobrenadante e ressuspender o pellet celular em uma quantidade adequada de buffer. </li></ol><p class="jove_content"> Dissociação baço usando o Dissociator gentleMACS renderá uma elevada percentagem de esplenócitos viável, o que é demonstrado por citometria de fluxo usando o Analisador MACSQuant. Células mortas estão manchadas pelo iodeto de propídio. No exemplo fornecido, o atacante lado gráfico de pontos de dispersão mostra o esplenócitos preparado. </p>

Todos os protocolos e fichas de dados estão disponíveis em<a href="http://www.miltenyibiotec.com"&gt; Http://www.miltenyibiotec.com.</a&gt;.

<p> Para evitar dissociações manuais entediantes e muitas vezes doloroso, o Dissociator gentleMACS permite dissociar o tecido de forma muito eficiente sob condições controladas e reproduzíveis. O tecido procedimento de dissociação é suave para as células e suspensões colheitas de células com uma taxa alta viabilidade. O Dissociator gentleMACS em combinação com C Tubes é projetado para a preparação de uma única célula suspensões de vários tecidos. O instrumento é equipado com uma série de programas pré-definidos para dissociar baço mouse, fígado, pulmão, ou tecido neural. A gama de programas e protocolos será continuamente ampliado para incluir outros tecidos. </p>

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>gentleMACS&#x2122; Starting Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>130-093-235</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>C Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-093-237</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>13 mL Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-596</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>autoMACS&#x2122; Rinsing Solution </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-222</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>MACS&#174; BSA Stock Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-376</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Pre-Separation Filters </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-041-407</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>MACSQuant Analyzer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-092-197</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Propidium Iodide Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>130-093-233</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx</a></td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

preparation of single-cell suspensions from mouse spleen with the gentlemacs dissociator

<p class="jove_content">De uma única célula suspensões são um pré-requisito para experimentos na separação de células, a análise de células e cultura de células. Para evitar dissociações manual tedioso e doloroso o Dissociator gentleMACS permite dissociar o tecido de forma muito eficiente sob condições controladas e reproduzíveis. O Dissociator gentleMACS pode perfeitamente dissociar baço mouse, combinando economia de tempo e padronização com segurança do usuário. Este vídeo descreve como dissociar baços mouse usando o Dissociator gentleMACS, um dispositivo de bancada automatizado que pode atrapalhar mecanicamente tecidos utilizando tubos especiais para produzir suspensões de células viáveis. Após a dissociação, baços são filtradas, centrifugadas e ressuspendidas para outras aplicações.</p>

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Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

<p class="jove_content">Este vídeo descreve uma técnica simples e que economiza tempo para a dissociação de tecidos automatizado utilizando o Dissociator gentleMACS para preparar uma única célula suspensões de esplenócitos mouse.</p>

Preparação de uma única célula Suspensões de Spleen rato com o Dissociator gentleMACS

Single-cell suspensions are a prerequisite for experiments in cell separation, cell analysis and cell culture.  To avoid tedious and often painful manual ...

<p>


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JapaneseVersion
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</p>

Research

JoVE Journal

Biology

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

Preparação padronizado de uma única célula Suspensões do tecido pulmonar do rato usando o Dissociator gentleMACS

The preparation of single-cell suspensions from tissues is an important prerequisite for many experiments in cellular research. The process of ...

Biologia

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

Geração de Single-Cell Tissue Suspensões de rato Neural

Within the nervous system, hundreds of neuronal and glial cell types have been described. Each specific cell type in the brain or spinal cord has a ...

Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors

Gravações de uma única célula de sucção de cones fotorreceptores rato

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Geração de camundongos derivadas de células-tronco pluripotentes induzidas

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Simple and Efficient Technique for the Preparation of Testicular Cell Suspensions

Técnica simples e eficiente para a preparação de suspensões de células testiculares

Mammalian testes are very complex organs that contain over 30 different cell types, including somatic testicular cells and different stages of germline ...

Isolation of Endothelial Cells from the Lumen of Mouse Carotid Arteries for Single-Cell Multi-Omics Experiments

Isolamento de células endoteliais do lúmen de artérias carótidas de camundongos para experimentos multi-ômicos unicelulares

Atherosclerosis is an inflammatory disease of the arterial regions exposed to disturbed blood flow (d-flow). D-flow regulates the expression of genes in ...

Real-Time Detection of Reactive Oxygen Species Production in Immune Response in Rice with a Chemiluminescence Assay

Detecção em Tempo Real da Produção de Espécies Reativas de Oxigênio na Resposta Imune em Arroz com Ensaio de Quimioluminescência

Reactive oxygen species (ROS) play vital roles in a variety of biological processes, including the sensing of abiotic and biotic stresses. Upon pathogen ...

Single-Cell Suspension Preparation from Nile Tilapia Intestine for Single-Cell Sequencing

Preparação de Suspensão de Célula Única do Intestino de Tilápia do Nilo para Sequenciamento de Célula Única

Nile tilapia is one of the most commonly cultured freshwater fish species worldwide and is a widely used research model for aquaculture fish studies. The ...

Isolation and Transcriptome Analysis of Plant Cell Types

Isolamento e Análise do Transcriptoma de Tipos Celulares Vegetais

In multicellular organisms, developmental programming and environmental responses can be highly divergent in different cell types or even within cells, ...

Isolamento Semi-Automatizado de Tecido Adiposo Branco Murino

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator

Autor em destaque: Isolamento semi-automatizado da fração vascular estromal do tecido adiposo branco murino usando um dissociador de tecido  

Isolamento Semi-Automatizado da Fração Vascular Estromal do Tecido Adiposo Branco Murino Usando um Dissociador de Tecido

The in vitro study of white, brown, and beige adipocyte differentiation enables the investigation of cell-autonomous functions of adipocytes and their ...