ソース: ムニエシルヴァン^1,2,3, パーチェットティボー^1,2,3, ソフィー・ノヴォール^{ト 4}, レイチェル・ゴルブ^1,2,3
リンパポイシス^{のための1}ユニット、免疫学科、パスツール研究所、パリ、フランス
² INSERM U1223, パリ, フランス
³ユニバーシテ パリ ディデロ, ソルボンヌ パリ シテ, セルレ パストゥール, パリ, フランス
⁴フローサイトメトリープラットから, サイトメトリーとバイオマーカー UtechS, 翻訳科学センター, パスツール研究所, パリ, フランス

病原体に対する防御は、免疫系による監視に依存する。このシステムは複雑で、多くのセルタイプで構成され、それぞれが特定の機能を持ちます。この複雑な組成物は、病原体および傷害の大きな多様性に対する免疫応答を可能にする。適応免疫は、特定の病原体に対する特定の応答を可能にします。このタイプの免疫を担う細胞の大半はリンパ球(B細胞およびT細胞)である。通常、B細胞は細胞外感染(細菌感染など)に反応し、T細胞は細胞内感染(ウイルス感染など)に反応する。リンパ球集団における細胞の異なるタイプは、それらが発現する細胞表面タンパク質の組み合わせおよび/または分泌されたサイトカインのパネルによって特徴付けることができる。

磁気ソートは、1つまたは複数の細胞表面タンパク質の磁気特性および発現を使用して標的細胞集団の濃縮を可能にする(1、2)。この手法は、3 つの手順で構成されます。まず、細胞は、1つまたは複数のモノクローナル特異的抗体と結合された磁気ビーズでインキュベートされる。これらの抗体に結合する表面タンパク質を発現する細胞は、磁気ビーズに付着する。次に、標的細胞集団を磁石で捕捉する。最後に、標的細胞は磁石からeledされます。最後に、2つの選別産物が得られ、1つは標識されていない細胞を含み、もう1つは磁気ビーズと結合した標的細胞を含む。カラムは、磁気ソートの効率を向上させるために使用することができます。列では、非磁性要素は、列を通るセルのパスを長くします。したがって、細胞の流れが遅くなり、磁石による細胞捕捉が容易になります。

図1:磁気分離の概略図。胸腺白血病は、抗CD3ビオチン化抗体で染色される。洗浄後、ストレプトアビジン(SAV)結合ビーズは、抗CD3抗体上のビオチンを特異的に固定する。(1) セルは列内で転送されます。(2) 磁石は標識されていない細胞を保持せず、CD3陽性細胞はカラムに残ります。最後に、カラムを磁石から分離し、(3)CD3陽性細胞を培地中でelqする。この図のより大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。

磁気選別には2種類あります(3)。正の選別では、目的の細胞を磁気ビーズで捕捉します。負の選別では、適切な抗体を運ぶ磁気ビーズで捕捉することにより不要な細胞を除去する。このMACS技術は、標的細胞の良好な濃縮を可能にし、臓器内の1-20%から60-98%に回収された細胞の割合を改善します。ソート後、細胞の純度を確認し、異なる方法(例えばフローサイトメトリー)でソートする必要があります。MACS技術は、細胞培養や細胞周期解析などの他の実験の標的集団を豊かにするのに理想的です。

このラボでは、胸腺白血病を単離し、その後、磁気細胞選別技術を用いて、胸腺CD3陽性細胞をミックスから濃縮する方法を示す。