Fonte: Perchet Thibaut^1,2,3, Meunier Sylvain^1,2,3, Sophie Novault⁴, Rachel Golub^1,2,3
1 Unidade de Linfísia, Departamento de Imunologia, Instituto Pasteur, Paris, França
² INSERM U1223, Paris, França
³ Université Paris Diderot, Sorbonne Paris Cité, Cellule Pasteur, Paris, França
⁴ Flow Cytometry Platfrom, Cytometry and Biomarkers UtechS, Center for Translational Science, Pasteur Institute, Paris, França

O ciclo celular é um processo universal de vida. Durante o ciclo celular, uma célula sofre várias modificações para se dividir em duas células filhas. Esse mecanismo ocorre ao longo da vida de um organismo em resposta às suas necessidades. Divisões celulares e desenvolvimento embrionário produzem um organismo completo a partir de um zigoto unicelular. Durante a idade adulta, o ciclo celular é central para muitos processos biológicos críticos, como reparos teciduais.

Mecanismos de divisão celular são eventos fortemente controlados onde a célula sofre modificações stepwise antes da divisão final. As células que ainda não estão no ciclo são descritas como estando na fase Gap 0 (G₀). Durante esta fase, a célula é considerada quiescente. Quando a célula começa a pedalar, quatro fases distintas são reconhecidas: Gap 1 (G_1),Síntese (S), Gap 2 (G₂) e Mitosis (M). A fase G₁ é um ponto de verificação para os recursos necessários pela célula para a síntese de DNA. Em seguida, ocorre a fase S, e a replicação do DNA começa, seguida pela interfase G_2, outro ponto de verificação que controla todos os elementos necessários para que a célula se divida. Finalmente, a célula entra na mitose e se divide em duas células filhas.

A divisão celular é um parâmetro altamente informativo em muitos sistemas biológicos diferentes. No campo da imunologia, a análise da proliferação de leucócitos pode indicar o mecanismo da resposta imune. Outros domínios da investigação também se baseiam na análise do ciclo celular. Por exemplo, a análise do ciclo celular durante o desenvolvimento do tumor melhorou nossa compreensão do câncer.

Muitos corantes fluorescentes estão agora disponíveis para rastrear a proliferação celular. Estes corantes diferem em suas propriedades químicas e espectrais. Existem duas classes diferentes de corantes: corantes proteicos se combinam permanentemente com proteínas formando uma ligação covalente, e corantes de membrana intercalam-se dentro das membranas celulares através de fortes associações hidrofóbicas. Estudos in vitro e in vivo de proliferação de células imunes por citometria de fluxo estão entre as aplicações mais comuns de ambas as classes de corantes de rastreamento celular (1, 2).

CFSE (Carboxyfluorescein succinimidyl é um corante fluorescente que marca células divisórias. Inicialmente, todas as células recebem a mesma quantidade de corante; dividindo células uniformemente dividir o corante que receberam entre suas duas células filhas. Consequentemente, o ciclo celular pode ser seguido pela diminuição progressiva da intensidade do corante nas células. A coloração do CFSE é seguida pela citometria de fluxo multiparamétrico convencional, uma tecnologia baseada em fluorescência de alto rendimento que permite caracterização fenotípica e funcional das células com base no seu grau de coloração de CFSE (3).

No experimento a seguir, avaliamos a proliferação de células CD4⁺ e CD8⁺ T in vitro,seguindo a estimulação do CD3, utilizando coloração de CFSE e citometria de fluxo.