Transfert adoptif de cellules : introduction de splénocytes d'une souris donneuse vers une souris hôte et évaluation du taux de succès au FACS

Source: Meunier Sylvain^1,2,3, Perchet Thibaut^1,2,3, Sophie Novault⁴, Rachel Golub^1,2,3
1 Unité de lymphopoiesis, Département d'immunologie, Institut Pasteur, Paris, France
² INSERM U1223, Paris, France
³ Université Paris Diderot, Sorbonne Paris Cité, Cellule Pasteur, Paris, France
⁴ Flow Cytometry Platfrom, Cytometry and Biomarkers UtechS, Center for Translational Science, Institut Pasteur, Paris, France

Le transfert de cellules adoptives est une méthode pour introduire des cellules dans un patient ou un organisme d'étude afin de traiter une maladie ou d'étudier un processus biologique, tel que l'hématopoiesis. Les objectifs du transfert adoptif sont divers; il peut être utilisé en biologie fondamentale ainsi qu'en sciences médicales (1, 2). Dans les modèles murins, la migration et la distribution des cellules transférées peuvent être étudiées et suivies d'un système de suivi (marqueur de surface cellulaire, coloration par CFSE, etc.). Dans les études sur le cancer sur les modèles de souris, le transfert de populations cellulaires spécifiques peut être utilisé comme traitement expérimental contre les tumeurs. Un autre exemple pour cette technique est la création de souris chimériques par transfert de cellules de moelle osseuse à des souris irradiées ou des souris avec un phénotype d'immunodéficience grave. Ce modèle de souris peut être utilisé pour évaluer l'impact de la suppression des gènes sur une population cellulaire spécifique, par exemple. Le transfert des cellules d'emprunt d'os est également employé dans le traitement médical humain. Lorsque les patients sont irradiés en cas de traitement du cancer, le transfert adoptif de la moelle osseuse permet la reconstitution du système immunitaire.

La première étape de cette technique est d'obtenir la population cellulaire d'intérêt. La technique choisie pour isoler cette population dépend du niveau de spécificité de la population ciblée. Le plus grand niveau de sélection est l'organe entier, dans lequel toutes les populations cellulaires présentes dans l'organe sont prises. Une méthode plus précise est la sélection d'une population de cellules cibles, souvent sélectionnée par un marqueur de surface cellulaire. La méthode idéale pour trier les cellules dans ce cas est par tri magnétique. Enfin, le niveau le plus strict est le choix des cellules par plusieurs marqueurs de surface cellulaire pour trier des populations cellulaires très spécifiques. Le tri cytométrie de flux est la méthode la plus populaire pour ce niveau de sélection. Une fois que la population d'intérêt est obtenue, elle peut être transférée à l'hôte. Avant le transfert d'adoption, il est essentiel d'assurer la compatibilité entre l'hôte et le donateur. En effet, quel que soit l'objectif de transfert, la compatibilité est cruciale pour assurer l'adoption des cellules par l'hôte sans rejet de cellules.

Dans cet exercice de laboratoire, nous démontrons la technique de transfert de cellules adoptives en transférant des splenocytes d'une souris CD45.2 dans une souris CD45.1 Ragc (manquant de lymphocytes) et quatre jours plus tard confirment le transfert de splenocytes utilisant la cytométrie de flux (voir la figure 1 ).

Figure 1 : Représentation schématique du transfert adoptif. (1) Les splenocytes sont isolés des souris CD45.2 et (2) transférés dans la souris CD45.1 Ragôc, la souris de contrôle est injectée avec PBS seulement. (3) 4 jours après le transfert adoptif, les splenocytes sont récupérés des souris et (4) analysés par cytométrie de flux. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.