Quelle: Meunier Sylvain^1,2,3, Perchet Thibaut^1,2,3, Sophie Novault⁴, Rachel Golub^1,2,3
1 Einheit für Lymphopoiese, Institut für Immunologie, Pasteur Institute, Paris, Frankreich
² INSERM U1223, Paris, Frankreich
³ Université Paris Diderot, Sorbonne Paris Cité, Cellule Pasteur, Paris, Frankreich
⁴ Flow Cytometry Platfrom, Cytometry and Biomarkers UtechS, Center for Translational Science, Pasteur Institute, Paris, Frankreich

Der Adoptivzelltransfer ist eine Methode zur Einführung von Zellen in einen Patienten- oder Studienorganismus, um eine Krankheit zu behandeln oder einen biologischen Prozess wie Hämatopoese zu untersuchen. Die Ziele der Adoption sind vielfältig; es kann in der Grundlagenbiologie sowie in den medizinischen Wissenschaften eingesetzt werden (1, 2). In Mausmodellen können Migration und Verteilung übertragener Zellen untersucht und von einem Tracking-System (Zelloberflächenmarker, Färbung durch CFSE usw.) gefolgt werden. In Krebsstudien an Mausmodellen kann die Übertragung bestimmter Zellpopulationen als experimentelle Behandlung gegen Tumore eingesetzt werden. Ein weiteres Beispiel für diese Technik ist die Erzeugung von chimären Mäusen durch Übertragung von Knochenmarkzellen auf bestrahlte Mäuse oder Mäuse mit einem schweren Immundefizienz-Phänotyp. Dieses Mausmodell kann beispielsweise verwendet werden, um die Auswirkungen der Genlöschung auf eine bestimmte Zellpopulation zu bewerten. Transfer von Knochen-Leih-Zellen wird auch in der menschlichen medizinischen Behandlung verwendet. Wenn Patienten im Falle einer Krebstherapie bestrahlt werden, ermöglicht die Adoptivübertragung des Knochenmarks eine Rekonstitution des Immunsystems.

Der erste Schritt in dieser Technik ist es, die Zellpopulation von Interesse zu erhalten. Die gewählte Technik, um diese Population zu isolieren, hängt vom Grad der Spezifität der Zielpopulation ab. Die größte Auswahl ist das gesamte Organ, in dem alle im Organ vorhandenen Zellpopulationen aufgenommen werden. Eine genauere Methode ist die Auswahl einer Zielzellpopulation, die häufig durch eine Zelloberflächenmarkierung ausgewählt wird. Die ideale Methode zum Sortieren von Zellen in diesem Fall ist durch magnetische Sortierung. Schließlich ist die strengste Ebene die Auswahl von Zellen durch mehrere Zelloberflächenmarker, um sehr spezifische Zellpopulationen zu sortieren. Die Flow-Zytometrie-Sortierung ist die beliebteste Methode für diese Auswahlebene. Sobald eine Bevölkerung von Interesse erhalten ist, kann sie auf den Host übertragen werden. Vor der Adoption ist es wichtig, die Kompatibilität zwischen Host und Spender zu gewährleisten. In der Tat, unabhängig vom Übertragungsziel, Kompatibilität ist entscheidend, um Zellen Adoption durch den Host ohne Zellen Abstoßung zu gewährleisten.

In dieser Übungsübung im Labor demonstrieren wir die Adoptivzelltransfertechnik, indem wir Splenozyten von einer CD45.2-Maus in eine CD45.1 Ragc-Maus (fehlende Lymphozyten) übertragen und vier Tage später die Splenozytenübertragung mittels Durchflusszytometrie bestätigen (siehe Abbildung 1 ).

Abbildung 1: Schematische Darstellung der Adoptivübertragung. (1) Splenozyten werden von CD45.2-Mäusen isoliert und (2) in CD45.1 Ragc-Maus übertragen, Steuermaus wird nur mit PBS injiziert. (3) 4 Tage nach der Adoption werden Splenozyten von Mäusen zurückgewonnen und (4) durch Durchflusszytometrie analysiert. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.