Name: horizontal slice preparation of the retina
Uploaded: 2006-11-20T00:00:00
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<p> Wir danken Drs. Richard H. Masland und Akimichi Kaneko, dass sie uns wertvolle Hinweise und Anregungen an das Verfahren der horizontalen Scheibe Vorbereitung der Netzhaut zu etablieren. </p>

<ol><li> Bereiten Sie eine Agar-Block (30 mg / ml, dh 3%, in destilliertem Wasser). Auflösen und Mikrowelle es zuerst und gießen Sie sie in einer Glasschale. Halten Sie das Gericht in einem Kühlschrank bei 4 <sup>°</sup> C. <br /> <em>Tipp: Die Agar-Block sollte im Vorfeld vorbereitet werden. <br /></em> <br /></li><li> Bereiten Sie bei niedrigen Temperaturen schmelzende Agarosegel (25 mg / ml, dh 2,5%, in Medium). Auflösen und Mikrowelle es. Halten Sie es in dem heißen Wasserbad bei 35 <sup>o</sup> C. <br /> <em>Tipp: Halten Sie das Agar...

<ol>
	<li>Azuma, T., Enoki, R., Iwamuro, K., Kaneko, A., Koizumi, A., Koizumi, A., TC, J. a. k. o. b. s., Masland, R. H., MA, M. a. c. N. e. i. l., RH, M. a. s. l. a. n. d. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+spatiotemporal+patterns+of+dendritic+Ca2++signals+in+goldfish+retinal+amacrine+cells.">Multiple spatiotemporal patterns of dendritic Ca2+ signals in goldfish retinal amacrine cells.</a> <em style='font-style: italic'>Brain Res</em>. , 64-73 (2004).</li></ol>

<p> Es gibt mehrere wichtige Vorteile der horizontalen Scheibe Vorbereitung der Netzhaut. </p><p> Zunächst wird die Morphologie der Zellen, die Dendriten erweitern horizontal wie Amakrinzellen und horizontale Zellen, erhalten. Es hat sich gezeigt, dass es über 20 Arten von Amakrinzellen in der Netzhaut (MacNeil und Masland, 1998), so dass es ganz wichtig ist, die Morphologie der Zellen mit der physiologische Eigenschaft zu vergleichen. </p><p> Zweitens, in der ganzen-mount Netzhaut verhindert, dass die umfangreiche Berichterstattung von Gliaz...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Agar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A-1296</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agarose L</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Wako</td>
<td>317-01182</td>
<td>Low-temperature melting agarose </td>
</tr>
<tr>
<td>Hyaluronidase</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Type I-S, 300 units/mg</td>
</tr>
<tr>
<td>Medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>in mM: 102 NaCl, 3.1 KCl, 2.0 CaCl2, 1.0 MgCl2, 23 NaHCO3, and 10 glucose, maintained at pH 7.8, or, Ames&#x2019; Solution (Sigma)</td>
</tr>
<tr>
<td>Microwave</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hot water bath</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>35 C</td>
</tr>
<tr>
<td>Vibratome slicer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica</td>
<td>VT1000S</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MF-Membrane filters</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>HAWP01300</td>
<td>Filter paper , pore size 0.45 um</td>
</tr>
<tr>
<td>Dissection tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>forceps, blade, pinch, twizzer, etc.</td>
</tr>
<tr>
<td>Instant glue</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>eg., Alonalpha, Krazy Glu</td>
</tr>
<tr>
<td>50 ml syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>syringe filter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>SX0001300</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

horizontal slice preparation of the retina

<p class="jove_content">Traditionell wird der vertikale Scheiben schneiden und die ganze-mount Vorbereitung der Netzhaut verwendet worden, um die Funktion der Netzhaut Schaltkreise zu untersuchen. Allerdings sind viele der retinalen Nervenzellen, wie Amakrinzellen, erweitern ihre Dendriten horizontal, so dass die Morphologie der Zellen soll zu stark in den vertikalen Scheiben beschädigt werden. In der ganzen-mount Vorbereitung, insbesondere für Patch-Clamp-Aufnahmen sind Netzhautneuronen in der mittleren Schicht nicht leicht zugänglich durch die umfangreiche Berichterstattung von Gliazellen (Mueller-Zelle) s endfeets. Hier beschreiben wir den Roman Slicing-Verfahren, um die dendritischen Morphologie der retinalen Nervenzellen intakt zu erhalten. Die Scheibe wurde horizontal an der inneren Schicht der Netzhaut mit einem Vibratom Allesschneider gemacht, nachdem der Netzhaut in der Tieftemperatur-Agarose-Gel eingebettet war. In diesem horizontalen Scheibe Vorbereitung der Netzhaut, untersuchten wir die Funktion der Netzhaut Neuronen im Vergleich zu ihrer Morphologie, mit Patch-Clamp-Aufzeichnung, Kalzium-Imaging-Technik, Immunzytochemie und Einzelzell-RT-PCR.</p>

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Horizontal Slice Preparation of the Retina

<p class="jove_content">Traditionell wird der vertikale Scheiben schneiden und die ganze-mount Vorbereitung der Netzhaut verwendet worden, um die Funktion der Netzhaut Schaltkreise zu untersuchen. Hier beschreiben wir den Roman Slicing-Verfahren, um die dendritischen Morphologie der retinalen Nervenzellen intakt zu erhalten.</p>

Horizontale Scheiben Vorbereitung der Retina

Traditionally the vertical slice and the whole-mount preparation of the retina have been used to study the function of retinal circuits. However, many of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Light/dark Transition Test for Mice

Hell / Dunkel Transition Test für Mäuse

Although all of the mouse genome sequences have been determined, we do not yet know the functions of most of these genes. Gene-targeting techniques, ...

Forschung

Biologie

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Organotypic culture systems of functional neural tissues are important tools in neurobiological research. Ideally, such a system should be compatible with ...

Thin Sectioning of Slice Preparations for Immunohistochemistry

Dünnschnitt der Scheibe Vorbereitungen für die Immunhistochemie

Many investigations in neuroscience, as well as other disciplines, involve studying small, yet macroscopic pieces or sections of tissue that have been ...

Organotypic Slice Culture of E18 Rat Brains

Organotypischen Kultur der E18 Gehirn von Ratten

Organotypic slice cultures from embryonic rodent brains are widely used to study brain development. While there are often advantages to an in-vivo system, ...

Preparation of Gene Gun Bullets and Biolistic Transfection of Neurons in Slice Culture

Vorbereitung der Gene Gun und Aufzählungszeichen Biolistic Transfektion von Neuronen in Scheiben Kultur

Biolistic transfection is a physical means of transfecting cells by bombarding tissue with high velocity DNA coated particles. We provide a detailed ...

Whole-cell Recordings of Light Evoked Excitatory Synaptic Currents in the Retinal Slice

Ganzzellableitungen of Light evozierten exzitatorischen synaptischen Ströme in der Netzhaut Scheiben

We use the whole-cell patch clamp technique to study the synaptic circuitry that underlies visual information processing in the retina. In this video, we ...

Evisceration of Mouse Vitreous and Retina for Proteomic Analyses

Ausweiden der Maus Glaskörper und Netzhaut für Proteomik-Analysen

While the mouse retina has emerged as an important genetic model for inherited retinal disease, the mouse vitreous remains to be explored. The vitreous is ...

<em>In vivo</em> Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

<em>In-vivo-Elektroporation</em> von Morpholinos in die Adult Zebrafisch Retina

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

<em>In Ovo</em> Electroporation in Embryonic Chick Retina

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

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The Slice Culture Method for Following Development of Tooth Germs In Explant Culture

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Explant culture allows manipulation of developing organs at specific time points&#160;and is therefore an important method for the developmental ...