Name: fabrication of myogenic engineered tissue constructs
Uploaded: 2009-05-01T00:00:00
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<p class="jove_content"> Ce travail est soutenu par des subventions de recherche du National Institutes of Health (HL068915; HL088206), un Prix du nouveau chercheur du Fonds de recherche Thrasher, et les contributions au Fonds de la conduction cardiaque au Centre hospitalier pour enfants de Boston. </p>

<p class="jove_title"> Partie 1: Réunir construire des moules de fonderie </p><ol><li> Utilisez une lame de rasoir pour réduire de moitié tube en silicone (VWR) et le couper en 3 morceaux cm de long. </li><li> Déposer une goutte d&#39;implant de qualité adhésive silicone RTV (Rhodia) à l&#39;intérieur de chaque extrémité du tube. </li><li> Vite placer un petit morceau (1 cm x 1 cm) de filet de polyester (McMaster-Carr) sur la chute d&#39;adhésif de silicone et de l&#39;aligner avec le bout du tuyau. Cela fournira une surface légère...

<ol>
	<li>Choi, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+conduction+through+engineered+tissue.">Cardiac conduction through engineered tissue.</a> <em style='font-style: italic'>Am J Pathol</em>. <b>169</b> (1), 72-85 (2006).</li><li>Rando, T. A., Blau, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+mouse+myoblast+purification,+characterization,+and+transplantation+for+cell-mediated+gene+therapy.">Primary mouse myoblast purification, characterization, and transplantation for cell-mediated gene therapy.</a> <em style='font-style: italic'>J Cell Biol</em>. <b>125</b> (6), 1275-1287 (1994).</li><li>Blau, H. M., Webster, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+human+muscle+cells.">Isolation and characterization of human muscle cells.</a> <em style='font-style: italic'>Proc Natl Acad Sci U S A</em>. <b>78</b> (9), 5623-5627 (1981).</li><li>Powell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+human+bioartificial+muscles+expressing+a+foreign+recombinant+protein+for+gene+therapy.">Tissue-engineered human bioartificial muscles expressing a foreign recombinant protein for gene therapy.</a> <em style='font-style: italic'>Hum Gene Ther</em>. <b>10</b> (4), 565-577 (1999).</li><li>Vandenburgh, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+skeletal+muscle+organoids+for+reversible+gene+therapy.">Tissue-engineered skeletal muscle organoids for reversible gene therapy.</a> <em style='font-style: italic'>Hum Gene Ther</em>. <b>7</b> (17), 2195-2200 (1996).</li><li>Gallop, P. M., Seifter, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+Properties+of+Soluble+Collagens.">Preparation and Properties of Soluble Collagens.</a> <em style='font-style: italic'>Methods in Enzymology</em>. <b>6</b>, 635-641 (1963).</li></ol>

<p class="jove_content"> Les moules dans lesquels la construction des tissus seront jetés peuvent être faites dans n&#39;importe quelle forme et taille, mais il doit y avoir au moins deux points de fixation. Sinon, la matrice et les cellules forment une structure sphérique et les cellules meurent. Dans le présent protocole, nous décrivons l&#39;utilisation d&#39;un maillage de polyester à cet effet, mais nous avons aussi utilisé avec succès maille d&#39;acier inoxydable. Évidemment, les grands moules, il faudra plus de cellules et un p...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Silicone tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>60985-724</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silicone adhesive</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Rhodia Silicones</td>
<td>MED ADH 4300 RTV</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Polyester Mesh</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>McMaster-Carr</td>
<td>93185T17</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Laminin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>L2020</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Nutrient Mixture F-10 HAM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>N6908</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal Bovine Serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Atlanta Biologicals</td>
<td>S11550</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin/Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15140</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fungizone</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15290-018</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dispase-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche</td>
<td>10295825001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Collagenase 2</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Worthington</td>
<td>46H8863</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Basic Fibroblast Growth Factor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Promega</td>
<td>G5071</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>150 mm tissue culture dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>353025</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.05% (1X) Trypsin-EDTA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>25300</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1X Hanks Balanced Salt Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>14170-112</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>7.5% NaHCO<sub>3</sub></td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>25080-094</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>70 &mu;m cell strainer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>352350</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>6-well plates</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>353046</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>50 mL Conical Vial</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>352098</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>15 mL Conical Vial</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>352099</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.2 &mu;m filter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nalgene</td>
<td>194-2520</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

fabrication of myogenic engineered tissue constructs

<p class="jove_content">Malgré le fait que les stimulateurs électroniques sont des dispositifs de sauvetage médical, leur performance à long terme chez les patients pédiatriques peut être problématique du fait des restrictions imposées par la petite taille de l&#39;enfant et leur croissance inévitable. Par conséquent, il ya un véritable besoin pour des thérapies innovantes conçues spécifiquement pour les patients pédiatriques atteints de troubles du rythme cardiaque. Nous proposons qu&#39;une alternative conducteur biologiques constitués d&#39;une matrice à base de collagène autologue contenant des cellules dérivées pourrait mieux s&#39;adapter à la croissance, réduire le besoin de chirurgies récurrentes, et d&#39;améliorer grandement la qualité de vie de ces patients. Dans la présente étude, nous décrivons une procédure pour intégrer primaires du squelette des cultures de cellules myoblastes dans une matrice d&#39;hydrogel à la mode d&#39;une construction des tissus implantables chirurgicalement qui servira comme un conduit électrique entre les chambres supérieures et inférieures du cœur. Finalement, nous prévoyons d&#39;utiliser ce type d&#39;ingénierie tissulaire pour restaurer la conduction électrique auriculo-ventriculaire chez les enfants présentant un bloc auriculo-ventriculaire complet. Compte tenu de cela, nous isolons les myoblastes dans les muscles squelettiques de rats Lewis néonatale et la plaque-les sur la laminine revêtement des boîtes de culture tissulaire en utilisant une version modifiée de protocoles établis<sup&gt; [2, 3]</sup&gt;. Après un à deux jours, les cellules cultivées sont collectés et mélangés avec les antibiotiques, collagène de type 1, Matrigel ™, et NaHCO<sub&gt; 3</sub&gt;. Le résultat est une solution visqueuse uniforme qui peut être coulé dans un moule de près toute forme et taille<sup&gt; [1, 4, 5]</sup&gt;. Pour nos constructions des tissus, nous employons de collagène de type 1 isolées de la peau d&#39;agneau du foetus en utilisant des procédures standard<sup&gt; [6]</sup&gt;. Une fois le tissu a solidifié à 37 ° C, la culture médiatique est soigneusement ajouté à la plaque jusqu&#39;à ce que la construction est submergé. L&#39;ingénierie tissulaire est alors autorisé à se condenser davantage grâce à la déshydratation pour les 2 jours de plus, à quel point il est prêt pour<em&gt; In vitro</em&gt; L&#39;évaluation ou de chirurgie d&#39;implantation.</p>

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Fabrication of Myogenic Engineered Tissue Constructs

<p class="jove_content">Ici, nous démontrons la fabrication de base de collagène, le tissu des constructions contenant myoblastes squelettiques. Ces constructions en 3-D modifiés peuvent être utilisés pour remplacer ou réparer des tissus<em&gt; In vivo</em&gt;. Pour nos fins, nous avons conçu ces comme un conduit auriculo-ventriculaire électriques pour la réparation de bloc cardiaque complet<sup&gt; [1]</sup&gt;.</p>

Fabrication de constructions myogéniques de l&#39;ingénierie tissulaire

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