Name: fabrication of myogenic engineered tissue constructs
Uploaded: 2009-05-01T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fabrication of Myogenic Engineered Tissue Constructs at JoVE.com

Detta arbete stöds av forskningsanslag från National Institutes of Health (HL068915, HL088206), en ny forskare Award från Thrasher Research Fund, och bidrag till hjärtöverledning fonden vid barnsjukhuset Boston.

Del 1: Montera bygga gjutformar <ol><li> Använd ett rakblad för att halvera silikonslang (VWR) och skär den i 3 cm långa bitar. </li><li> Placera en droppe implantat-grade RTV silikon lim (Rhodia) på insidan av vardera änden av slangen. </li><li> Snabbt placera en liten bit (1 cm x 1 cm) av polyester mesh (McMaster-Carr) på silikonytskikt sjunka och rikta in det mot slutet av slangen. Detta kommer att ge en något höjd och plan yta för att konstruera fäste. Upprepa för den andra änden. </li><li> Låt forme...

<ol>
	<li>Choi, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+conduction+through+engineered+tissue.">Cardiac conduction through engineered tissue.</a> Am J Pathol. 169 (1), 72-85 (2006).</li><li>Rando, T. A., Blau, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+mouse+myoblast+purification,+characterization,+and+transplantation+for+cell-mediated+gene+therapy.">Primary mouse myoblast purification, characterization, and transplantation for cell-mediated gene therapy.</a> J Cell Biol. 125 (6), 1275-1287 (1994).</li><li>Blau, H. M., Webster, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+human+muscle+cells.">Isolation and characterization of human muscle cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 78 (9), 5623-5627 (1981).</li><li>Powell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+human+bioartificial+muscles+expressing+a+foreign+recombinant+protein+for+gene+therapy.">Tissue-engineered human bioartificial muscles expressing a foreign recombinant protein for gene therapy.</a> Hum Gene Ther. 10 (4), 565-577 (1999).</li><li>Vandenburgh, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+skeletal+muscle+organoids+for+reversible+gene+therapy.">Tissue-engineered skeletal muscle organoids for reversible gene therapy.</a> Hum Gene Ther. 7 (17), 2195-2200 (1996).</li><li>Gallop, P. M., Seifter, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+Properties+of+Soluble+Collagens.">Preparation and Properties of Soluble Collagens.</a> Methods in Enzymology. 6, 635-641 (1963).</li></ol>

De formar i vilka vävnaden bygga kommer att kastas kan göras i någon form och storlek, men det måste finnas minst två fästpunkter. Annars matrisen och cellerna bildar en sfärisk struktur och cellerna dör. I det nuvarande protokollet beskriver vi användandet av en polyester mesh för detta ändamål, men vi har även framgångsrikt använt rostfritt stål. Självklart kommer större formar kräver mer celler och en större volym av de andra ingredienserna. Vid formarna är det viktigt att minimera mängden av si...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Silicone tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>60985-724</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silicone adhesive</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Rhodia Silicones</td>
<td>MED ADH 4300 RTV</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Polyester Mesh</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>McMaster-Carr</td>
<td>93185T17</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Laminin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>L2020</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Nutrient Mixture F-10 HAM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>N6908</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal Bovine Serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Atlanta Biologicals</td>
<td>S11550</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin/Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15140</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fungizone</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15290-018</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dispase-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche</td>
<td>10295825001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Collagenase 2</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Worthington</td>
<td>46H8863</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Basic Fibroblast Growth Factor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Promega</td>
<td>G5071</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>150 mm tissue culture dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>353025</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.05% (1X) Trypsin-EDTA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>25300</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1X Hanks Balanced Salt Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>14170-112</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>7.5% NaHCO3</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>25080-094</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>70 &mu;m cell strainer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>352350</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>6-well plates</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>353046</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>50 mL Conical Vial</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>352098</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>15 mL Conical Vial</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>352099</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.2 &mu;m filter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nalgene</td>
<td>194-2520</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

fabrication of myogenic engineered tissue constructs

Trots att elektroniska pacemaker är livräddande medicinsk utrustning, kan deras långsiktiga resultat hos barn vara problematisk på grund av de begränsningar som ett barns lilla storlek och deras oundvikliga tillväxt. Följaktligen finns det ett verkligt behov av innovativa terapier som utformats speciellt för barn med hjärtrytm störningar. Vi föreslår att en ledande biologiskt alternativ som består av en kollagenbaserade matris som innehåller autologously som härrör cellerna bättre kan anpassa sig till tillväxten, minska behovet av återkommande operationer, och avsevärt förbättra livskvaliteten för dessa patienter. I den aktuella studien beskriver vi en metod för att införliva primär skelett kulturer myoblast cell inom en hydrogel matris till mode ett kirurgiskt implanterbara vävnad konstruktion som kommer att fungera som en elektrisk ledning mellan övre och undre kammare i hjärtat. I slutändan räknar vi använda denna typ av vävnadstekniska att återställa atrioventrikulär elektrisk ledningsförmåga hos barn med komplett hjärtblock. Med tanke på att isolera vi myoblasts från skelettmuskulaturen av neonatal Lewis råttor och platta ut dem på laminin-belagd vävnadsodling rätter med hjälp av en modifierad version av fastställda protokoll<sup&gt; [2, 3]</sup&gt;. Efter en till två dagar, odlade celler samlas och blandas med antibiotika, typ 1 kollagen, Matrigel ™ och NaHCO<sub&gt; 3</sub&gt;. Resultatet är en trögflytande, enhetlig lösning som kan gjutas i en form av nästan alla former och storlekar<sup&gt; [1, 4, 5]</sup&gt;. För våra vävnad konstruktioner, sysselsätter vi typ 1 kollagen isolerade från foster lamm huden med hjälp av standardprocedurer<sup&gt; [6]</sup&gt;. När vävnad har stelnat vid 37 ° C, odlingssubstrat försiktigt läggas på plattan tills konstruktion är under vatten. Den vävnadstekniska får sedan ytterligare kondensera genom uttorkning i 2 dagar, då den är klar för<em&gt; In vitro</em&gt; Bedömning eller kirurgisk implantation.

Watch this Scientific Journal Video about Fabrication of Myogenic Engineered Tissue Constructs at JoVE.com

Fabrication of Myogenic Engineered Tissue Constructs

Här visar vi tillverkning av kollagen-baserade konstruktioner vävnad innehåller skelett myoblasts. Dessa 3-D-tillverkade konstruktioner kan användas för att ersätta eller reparera vävnader<em&gt; In vivo</em&gt;. För våra syften har vi utformat dessa som en atrioventrikulärt elektriska isolerrör för reparation av kompletta hjärtblock<sup&gt; [1]</sup&gt;.

Tillverkning av Myogenic vävnadstekniska Konstruerar

Despite the fact that electronic pacemakers are life-saving medical devices, their long-term performance in pediatric patients can be problematic owing to ...

Research

JoVE Journal

Biology

PDMS Device Fabrication and Surface Modification

PDMS Komponentframställning och ytmodifiering

Fabrication of the Thermoplastic Microfluidic Channels

Tillverkning av termoplast mikroflödessystem kanaler

In our lab, we have successfully isolated nucleic acids directly from microliter and submicroliter volumes of human blood, urine and stool using ...

Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin

Aktin Co-Sedimentering-analys, för analys av proteinbindning till F-Actin

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates ...

Fabrication of Amperometric Electrodes

Tillverkning av amperometriska elektroder

Carbon fiber electrodes are crucial for the detection of catecholamine release from vesicles in single cells for amperometry measurements.  Here, we ...

Implantation of Engineered Tissue in the Rat Heart

Implantation av vävnadstekniska i Rat hjärta

Rodent surgery is often an important component in assessing the utility of engineered tissues. A wide variety of surgical procedures can be performed in ...

Quantitative Comparison of cis-Regulatory Element (CRE) Activities in Transgenic Drosophila melanogaster

Quantitative Comparison of cis-Regulatory Element CRE Activities in Transgenic Drosophila melanogaster

Kvantitativ jämförelse av Cis-Regulatory Element (CRE) Aktiviteter i transgena Drosophila melanogaster</em

Gene expression patterns are specified by cis-regulatory element (CRE) sequences, which are also called enhancers or cis-regulatory modules. A typical CRE ...

Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the I&middot;Cryo Kit

Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the IÃƒâ€šÃ‚Â·Cryo Kit

Mus Spermier Frysförvaring and Recovery med I · Cryo Kit

Thousands of new genetically modified (GM) strains of mice have been created since the advent of transgenesis and knockout technologies.  Many of these ...

Recombineering Homologous Recombination Constructs in Drosophila

Recombineering Homologous Recombination Constructs in Drosophila

Recombineering homolog rekombination Konstruktionerna i<em&gt; Drosophila</em

The continued development of techniques for fast, large-scale manipulation of endogenous gene loci will broaden the use of Drosophila melanogaster as a ...

Preparation of Primary Myogenic Precursor Cell/Myoblast Cultures from Basal Vertebrate Lineages

Beredning av primär Myogenic prekursorcell / myoblast kulturer från Basal Ryggradsdjur härstamningar

Due to the inherent difficulty and time involved with studying the myogenic program in vivo, primary culture systems derived from the resident adult stem ...

Phage-mediated Delivery of Targeted sRNA Constructs to Knock Down Gene Expression in E. coli

Phage-mediated Delivery of Targeted sRNA Constructs to Knock Down Gene Expression in E. coli

Fag-medierad leverans av riktade sRNA Konstruerar slå ner genuttryck i<em&gt; E. coli</em

RNA-mediated knockdowns are widely used to control gene expression. This versatile family of techniques makes use of short RNA (sRNA) that can be ...