Name: live imaging of glial cell migration in the drosophila eye imaginal disc
Uploaded: 2009-07-09T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of Glial Cell Migration in the Drosophila Eye Imaginal Disc at JoVE.com

Patrick Cafferty é apoiado por uma bolsa de pós-doutorado da Sociedade de Esclerose Múltipla do Canadá.

Parte 1: Pré-experimental set-up. <ol><li> Uma semana de antecedência, mate moscas para gerar larva que expressam GFP sob o controle de um promotor glial específico. Para nosso experimento foi visualizada GFP marcado com uma seqüência de localização nuclear expresso em células gliais usando a polaridade invertida (repo) promotor (3, 4). </li><li> Prepare tampa desliza pelo menos um dia de antecedência por imersão 18 milímetros lamínulas redondas de 10 minutos em 1% de poli-L-lisina solução e ar ...

<ol>
	<li>Aigouy, B., Lepelletier, L., Giangrande, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+chain+migration+requires+pioneer+cells.">Glial chain migration requires pioneer cells.</a> J. Neurosci. 28, 11635-11641 (2008).</li><li>Silies, M., Yuva, Y., Engelen, D., Aho, A., Stork, T., Klambt, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+cell+migration+in+the+eye+disc.">Glial cell migration in the eye disc.</a> J. Neurosci. 27, 13130-13139 (2007).</li><li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes.">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118, 401-415 (1993).</li><li>Sepp, K. J., Auld, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conversion+of+lacZ+enhancer+trap+lines+to+GAL4+lines+using+targeted+transposition+in+Drosophila+melanogaster.">Conversion of lacZ enhancer trap lines to GAL4 lines using targeted transposition in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 151, 1093-1101 (1999).</li><li>Gibson, M. C., Patel, A. B., Nagpal, R., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+emergence+of+geometric+order+in+proliferating+metazoan+epitheia.">The emergence of geometric order in proliferating metazoan epitheia.</a> Nature. 442, 1038-1041 (2006).</li><li>Lee, T., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosaic+analysis+with+a+repressible+cell+marker+(MARCM)+for+Drosophila+neural+development.">Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development.</a> Trends Neurosci. 24, 251-254 (2001).</li></ol>

Neste protocolo, descrevemos a observação da migração de células gliais no disco imaginal olho através de microscopia ao vivo. No nosso exemplo de tipo selvagem (Figura 1 AD), foi utilizado um marcador GFP nuclear para observar a movimentação das células gliais no disco do olho ao longo de uma hora. Em um mutante de um gene candidato necessários para a migração de células gliais actualmente em estudo no nosso laboratório, observamos um adiamento de núcleos de células gliais no talo óptico duran...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Poly-L-lysine</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>P8920</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Schneider's Insect Media</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>S0146</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin-Streptomycin</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>P4458</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Insulin solution from bovine pancreas</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>I0516</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Chamlide Magnetic chamber</td>
<td>Tool</td>
<td>Live cell Instrument</td>
<td>CM-R-10</td>
<td>35 mm dish type chamber for 18 mm coverslip</td>
</tr>
<tr>
<td>Ultra fine clipper scissors</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine scientific tools</td>
<td>15200-00</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dumont #5 forceps</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine scientific tools</td>
<td>11251-20</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluorescent microscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>Zeiss</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Any fluorescent imaging system that has the necessary filters and excitation for GFP can be used. </td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

live imaging of glial cell migration in the drosophila eye imaginal disc

Células gliais de ambos os vertebrados e organismos invertebrados devem migrar para regiões de destino final para ensheath e apoio neurônios associados. Embora o progresso recente tem sido feito para descrever a migração de células gliais na ala desenvolvimento pupal (1), estudos de<em&gt; Drosophila</em&gt; Migração de células gliais têm tipicamente envolvidos no exame de tecido fixo. Análise microscópica de células móveis ao vivo oferece a capacidade de examinar o comportamento celular em todo o processo migratório, incluindo a determinação da taxa de e mudanças na direção do crescimento. Emparelhado com o uso de ferramentas genéticas, imagens ao vivo pode ser usado para determinar os papéis mais precisos para genes específicos no processo de desenvolvimento. Os trabalhos anteriores por Silies<em&gt; Et al.</em&gt; (2) descreveu a migração de células gliais provenientes do talo óptico, uma estrutura que liga o olho eo cérebro em desenvolvimento, no disco imaginal olho no tecido fixo. Aqui destacamos um protocolo para a análise da migração de células gliais na<em&gt; Drosophila</em&gt; Disco olho imaginal. Aproveitamos uma linha de Drosophila que expressa GFP em células gliais em desenvolvimento para acompanhar a progressão de células gliais no tipo selvagem e mutante em animais.

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Live Imaging of Glial Cell Migration in the Drosophila Eye Imaginal Disc

Aqui nós descrevemos um protocolo para analisar a migração de células gliais no olho Drosophila desenvolvimento, utilizando análise microscópica ao vivo emparelhado com GFP tag células gliais.

Imagens ao vivo da migração das células da glia no Disco Drosophila Eye Imaginal

Glial cells of both vertebrate and invertebrate organisms must migrate to final target regions in order to ensheath and support associated neurons.  While ...

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection of Imaginal Discs from 3rd Instar Drosophila Larvae

Dissecação de discos imaginais de 3 larvas Drosophila Instar

Biologia

Visualizing the Live Drosophila Glial-neuromuscular Junction with Fluorescent Dyes

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Visualizando o Live Drosophila Junção neuromuscular-Glial com corantes fluorescentes

Our project identified GFP labeled glial structures at the developing larval fly neuromuscular synapse. To look at development of live glial-nerve-muscle ...

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

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Elaboração de Drosophila Os embriões para Live-Imaging Usando o protocolo gota suspensa

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

A Novel RFP Reporter to Aid in the Visualization of the Eye Imaginal Disc in Drosophila

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A Novel Reporter RFP para ajudar na visualização do Disco Imaginal Eye em Drosophila</em

The Drosophila eye is a powerful model system for studying areas such as neurogenesis, signal transduction and neurodegeneration. Many of the discoveries ...

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

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Imagens ao vivo de Drosophila melanogaster Embrionárias Migrações hemócitos

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we ...

Imaging Cell Shape Change in Living Drosophila Embryos

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Imagem Alterar Forma Celular em Viver Drosophila Os embriões

The developing Drosophila melanogaster embryo undergoes a number of cell shape changes that are highly amenable to live confocal imaging.  Cell shape ...

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

Preparação Individual Drosophila Ovos Câmaras de imagens ao vivo

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Live Imaging of GFP-labeled Proteins in Drosophila Oocytes

Live Imaging of GFP-labeled Proteins in Drosophila Oocytes

Imagens ao vivo de Proteínas GFP-rotulados em<em&gt; Drosophila</em&gt; Oócitos

The  Drosophila oocyte has been established as a versatile system for investigating  fundamental questions such as cytoskeletal function, cell ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Imagens ao vivo de Apuramento celular por apoptose durante<em&gt; Drosophila</em&gt; Embriogênese

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Live Cell Imaging of Early Autophagy Events: Omegasomes and Beyond

Imagens de células vivas dos primeiros autofagia Eventos: Omegasomes and Beyond

Autophagy is a  cellular response triggered by the lack of nutrients, especially the absence of  amino acids. Autophagy is defined by the formation of ...