Name: dissecting and recording from the c. elegans neuromuscular junction
Uploaded: 2009-02-25T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissecting and Recording from The C. Elegans Neuromuscular Junction at JoVE.com

Dit artikel werd gefinancierd door NIH beurzen aan JER. Ik wil graag Dr Alex Gottschalk bedanken voor het verstrekken van de transgene wormen uiten kanaal rhodopsine in cholinerge neuronen gebruikt in een van de opname demonstraties.

A. Bereiding van de instrumenten die worden gebruikt voor de dissectie. <ol><li> De dissectie / opname kamer: Wij typisch onze opnamestudio kamer te bouwen uit een 1 / 16 e inch magnetische plaat, met een rond gat in het centrum, dat groot genoeg is om een 22 mm diameter ronde dekglas tegemoet te komen. De buitenste afmetingen van de kamer zal afhangen van de microscoop podium gebruikt om de opnamen te doen. Op de keerzijde van de magnetische plaat, hechten wij een 48 x 60 mm dekglas, die we op de kamer hou...

<ol>
	<li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Genetics. 77 (1), 71-71 (1974).</li><li>Richmond, J. E., Davis, W. S., Jorgensen, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Nat Neurosci. 2 (11), 959-959 (1999).</li><li>Richmond, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> WormBook. 1, (2006).</li><li>Liewald, J. F., Brauner, M., Stephens, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Nature methods. 5 (10), 895-895 (2008).</li><li>Lockery, S. R., Goodman, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in enzymology. 293, 201-201 (1998).</li><li>Brockie, P. J., Mellem, J. E., Hills, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Neuron. 31 (4), 617-617 (2001).</li><li>Richmond, J. E., Jorgensen, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Nat Neurosci. 2 (9), 791-791 (1999).</li></ol>

De genetische model organisme C. elegans is bij uitstek geschikt voor de studie van synaptische transmissie, door de functionele analyse van mutaties in genen die coderen voor synaptische eiwitten. Hier hebben we beschreven een dissectie techniek die de C. maakt elegans NMJs toegankelijk voor elektrofysiologische analyse. De bijhorende video toont de kritische stappen in de C. elegans dissectie en de typische opname configuratie gebruikt om de synaptische activiteit te meten. De drie ...

dissecting and recording from the c. elegans neuromuscular junction

Neurotransmissie is het proces waarbij neuronen informatie via chemische signalen over te dragen aan hun post-synaptische doelstellingen, op een snelle tijdschaal. Dit complexe proces vereist de gecoördineerde activiteit van de vele pre-en post-synaptische proteïnen te zorgen voor een passende synaptische connectiviteit, geleiding van elektrische signalen, targeting en priming van secretorische vesikels, calcium, blaasje fusion, lokalisatie en functie van postsynaptische receptoren en ten slotte, recycling mechanismen. Omdat neurowetenschappers Het is ons doel om toe te lichten welke eiwitten functioneren in elk van deze stappen en begrijpen van hun werkingsmechanismen. Elektrofysiologische opnames van synapsen zorgen voor een kwantificeerbare lezen van de onderliggende elektrische gebeurtenissen die zich voordoen tijdens de synaptische transmissie. Door het combineren van deze techniek met de krachtige reeks van moleculaire en genetische tools beschikbaar om synaptische eiwitten in C. te manipuleren elegans, kunnen analyseren we de resulterende functionele veranderingen in de synaptische transmissie. De C. elegans NMJs gevormd tussen motorneuronen en lichaamswand spieren controle motoriek, dus mutanten met ongecoördineerde motorische fenotypes (bekend als unc s) vaak verstoren synaptische transmissie op deze synapsen 1. Omdat unc mutanten worden onderhouden op een rijk aanbod van een bacteriële voedselbron, blijven ze levensvatbaar zolang ze een aantal pharynx pompen vermogen om voedsel innemen behouden. Dit, samen met het feit dat de C. elegans bestaan ​​als hermafrodieten, hen in staat stelt om op mutant nakomelingen doorgeven, zonder de noodzaak voor uitgebreide dekking gedrag. Deze eigenschappen, in combinatie met onze recente mogelijkheid om op te nemen van de wormen NMJs 2,3,7 maken dit een uitstekend model organisme waarin u precies hoe unc mutanten invloed neurotransmissie pakken. De dissectie methode houdt immobiliseren volwassen wormen met behulp van een cyanoacrylic lijm om een ​​incisie te maken in de worm cuticula het blootstellen van de NMJs. Sinds C. elegans volwassenen slechts 1 mm in de lengte van de dissectie wordt uitgevoerd met het gebruik van een dissectiemicroscoop en vereist een uitstekende hand-oog coördinatie. NMJ opnames zijn gemaakt door whole-cell spanning klemmen individuele lichaam muur spiercellen en neurotransmitter release kan worden opgewekt met behulp van een verscheidenheid aan stimulatie protocollen met inbegrip van elektrische stimulatie, door licht geactiveerde kanaal-rhodopsine-gemedieerde depolarisatie 4 en hyperosmotische zoutoplossing, die allemaal zullen worden kort beschreven.

Watch this Scientific Journal Video about Dissecting and Recording from The C. Elegans Neuromuscular Junction at JoVE.com

Dissecting and Recording from The C. Elegans Neuromuscular Junction

Toepassing van elektrofysiologie toegankelijke synapsen biedt een kwantificeerbare maat van synaptische activiteit, nuttig bij het analyseren van synaptische mutanten. Dit artikel beschrijft een dissectie methode die wordt gebruikt om de neuromusculaire verbindingen (NMJ) van bloot<em&gt; Caenorhabditis elegans (C. elegans)</em&gt; En kort bespreekt een aantal van het gebruik dat van deze voorbereiding kan worden toegepast.

Ontleden en opnemen van The C. Elegans neuromusculaire junctie

Neurotransmission is the process by which neurons transfer information via chemical signals to their post-synaptic targets, on a rapid time scale.   This ...

Research

JoVE Journal

Biology

Generation of Stable Transgenic C. elegans Using Microinjection

Generatie van Stable transgene C. elegans Met behulp van micro-injectie

Transgenic Caenorhabditis elegans can be readily created via microinjection of a DNA plasmid solution into the gonad 1.  The plasmid DNA rearranges to ...

Visualizing the Live Drosophila Glial-neuromuscular Junction with Fluorescent Dyes

Visualizing the Live Drosophila Glial-neuromuscular Junction with Fluorescent Dyes

Het visualiseren van de Live- Drosophila Gliale-neuromusculaire Junction met fluorescente kleurstoffen

Our project identified GFP labeled glial structures at the developing larval fly neuromuscular synapse. To look at development of live glial-nerve-muscle ...

The Production of C. elegans Transgenes via Recombineering with the galK Selectable Marker

The Production of C. elegans Transgenes via Recombineering with the galK Selectable Marker

De productie van C. elegans Transgenen via Recombineering met de GalK Selecteerbare marker

The creation of transgenic animals is widely utilized in C. elegans research including the use of GFP fusion proteins to study the regulation and ...

High-throughput Screening and Biosensing with Fluorescent C. elegans Strains

High-throughput Screening and Biosensing with Fluorescent C. elegans Strains

High-throughput screening &#39;en biosensing met fluorescerende C. elegans Stammen

High-throughput screening (HTS) is a powerful approach for identifying chemical modulators of biological processes.  However, many compounds identified in ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basis-<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Methoden: Synchronisatie-en-

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Creating Defined Gaseous Environments to Study the Effects of Hypoxia on C. elegans

Creating Defined Gaseous Environments to Study the Effects of Hypoxia on C. elegans

Het creëren van Defined Gasvormige omgevingen om de gevolgen van hypoxie Studie naar<em&gt; C. elegans</em

Oxygen is essential for all metazoans to survive, with one known exception1. Decreased O2 availability (hypoxia) can arise during states of disease, ...

C. elegans Chemotaxis Assay

C. elegans Chemotaxis Assay

Many organisms use chemotaxis to seek out food sources, avoid noxious substances, and find mates.  Caenorhabditis elegans has impressive chemotaxis ...

A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells

A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells

Een methode voor het kweken van embryonale<em&gt; C. elegans</em&gt; Cellen

C. elegans is a powerful model system, in which genetic and molecular techniques are easily applicable. Until recently though, techniques that require ...

Methods for Skin Wounding and Assays for Wound Responses in C. elegans

Methods for Skin Wounding and Assays for Wound Responses in C. elegans

Methoden voor de huid De verwondingen en Testen voor Wond Reacties in<em&gt; C. elegans</em

The C. elegans epidermis and cuticle form a simple yet sophisticated skin layer that can repair localized damage resulting from wounding. Studies of wound ...

Investigating the Spreading and Toxicity of Prion-like Proteins Using the Metazoan Model Organism C. elegans

Investigating the Spreading and Toxicity of Prion-like Proteins Using the Metazoan Model Organism C. elegans

Onderzoek naar de verspreiding en de toxiciteit van Prion-achtige eiwitten met behulp van de Metazoan modelorganisme<em&gt; C. elegans</em

Prions are unconventional self-propagating proteinaceous particles, devoid of any coding nucleic acid. These proteinaceous seeds serve as templates for ...