Name: dissecting and recording from the c. elegans neuromuscular junction
Uploaded: 2009-02-25T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissecting and Recording from The C. Elegans Neuromuscular Junction at JoVE.com

Dieser Artikel wurde von NIH gewährt JER finanziert. Ich möchte Dr. Alex Gottschalk für die Bereitstellung der transgenen Würmer Ausdruck Kanal Rhodopsin in cholinergen Motoneuronen in einer der Aufnahme Demonstrationen begleitet haben.

A. Herstellung von Werkzeugen für die Präparation verwendet. <ol><li> Die Dissektion / Aufnahme Kammer: Wir in der Regel konstruieren unsere Aufnahme Kammer aus einem 1 / 16 th Zoll Magnetfolie, mit einem kreisrunden Loch in der Mitte, die groß genug für einen 22 mm Durchmesser runden Deckglas Platz gebohrt. Die äußeren Abmessungen der Kammer wird auf dem Mikroskoptisch verwendet werden, um die Aufnahmen abhängen. Auf der Rückseite der Magnetfolie, legen wir eine 48 x 60 mm Deckglas, das wir in die ...

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	<li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Genetics. 77 (1), 71-71 (1974).</li><li>Richmond, J. E., Davis, W. S., Jorgensen, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Nat Neurosci. 2 (11), 959-959 (1999).</li><li>Richmond, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> WormBook. 1, (2006).</li><li>Liewald, J. F., Brauner, M., Stephens, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Nature methods. 5 (10), 895-895 (2008).</li><li>Lockery, S. R., Goodman, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in enzymology. 293, 201-201 (1998).</li><li>Brockie, P. J., Mellem, J. E., Hills, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Neuron. 31 (4), 617-617 (2001).</li><li>Richmond, J. E., Jorgensen, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Nat Neurosci. 2 (9), 791-791 (1999).</li></ol>

Die genetischen Modellorganismus C, elegans ist ideal für die Untersuchung der synaptischen Übertragung geeignet, durch die funktionelle Analyse von Mutationen in Genen, synaptischer Proteine. Hier haben wir eine Dissektionstechnik, dass die C macht beschriebenen elegans NMJs zugänglich für elektrophysiologische Analysen. Das dazugehörige Video zeigt die wichtigsten Schritte in der C. elegans Dissektion und die typische Aufnahme-Konfiguration verwendet werden, um synaptische Akti...

dissecting and recording from the c. elegans neuromuscular junction

Neurotransmission ist der Prozess, durch den Nervenzellen übertragen Informationen über chemische Signale an ihre postsynaptischen Ziele, auf einer schnellen Zeitskala. Dieser komplexe Prozess erfordert die koordinierte Aktivität von vielen Vor-und post-synaptischen Proteinen, geeignete synaptischer Verbindungen, Durchführung von elektrischen Signalen, Targeting und Grundieren von sekretorischen Vesikeln, Calcium-sensitiven, Vesikelfusion, Lokalisation und Funktion von postsynaptischen Rezeptoren zu gewährleisten und schließlich das Recycling Mechanismen. Wie Neurowissenschaftler ist es unser Ziel, aufzuklären, welche Proteine ​​Funktion in jedem dieser Schritte und verstehen ihre Wirkmechanismen. Elektrophysiologischen Ableitungen von Synapsen eine quantifizierbare aus dem zugrunde liegenden elektrischen Ereignisse, die während der synaptischen Übertragung auftreten zu lesen. Durch die Kombination dieser Technik mit dem leistungsstarken Reihe von molekularen und genetischen Werkzeuge zur Verfügung, synaptischer Proteine ​​in C. manipulieren elegans, können wir analysieren die daraus resultierenden funktionellen Veränderungen der synaptischen Übertragung. Die C. elegans NMJs gebildet zwischen Motoneuronen und Körper Wand Muskeln kontrollieren Fortbewegung, also Mutanten mit unkoordinierten Bewegungsapparates Phänotypen (bekannt als unc s) oft stören synaptischen Übertragung an diesen Synapsen 1. Da unc Mutanten auf ein reichhaltiges Angebot an einer bakteriellen Nahrungsquelle erhalten bleiben, bleiben sie umsetzbar, solange sie einige Rachenraum Pumpen Fähigkeit, Nahrung aufnehmen zu behalten. Dies, zusammen mit der Tatsache, dass C. elegans existieren als Zwitter, können sich auf mutierten Nachkommen ohne die Notwendigkeit für aufwendige Paarungsverhalten passieren. Diese Attribute, mit unserem jüngsten Fähigkeit, von den Würmern Rekord NMJs 2,3,7 machen dieses ein hervorragendes Modell Organismus, in dem genau wie unc Mutanten Auswirkungen Neurotransmission Adresse gekoppelt. Die Dissektion Methode besteht darin Immobilisierung erwachsenen Würmer mit einem Cyanoacrylsäure Leim, um einen Einschnitt in der Wurm Nagelhaut Freilegung der NMJs machen. Da C. elegans Erwachsene zahlen nur 1 mm in der Länge der Dissektion mit dem Einsatz von einem Binokular durchgeführt und erfordert gute Hand-Auge-Koordination. NMJ Aufnahmen werden durch whole-cell Spannungsbegrenzung einzelnen Körper Wand Muskelzellen und die Freisetzung von Neurotransmittern können evozierte mit einer Vielzahl von Stimulationsprotokolle einschließlich elektrischer Stimulation, Licht-aktivierte Kanal-Rhodopsin-vermittelte Depolarisation 4 und hyperosmotischen Kochsalzlösung, die alle sein wird gemacht werden kurz beschrieben.

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Dissecting and Recording from The C. Elegans Neuromuscular Junction

Die Anwendung der Elektrophysiologie, barrierefreie Synapsen eine quantifizierbare Messung der synaptischen Aktivität, nützlich bei der Analyse synaptischer Mutanten. Dieser Artikel beschreibt ein Dissektion Methode verwendet, um die motorischen Endplatten (NMJ) von expose<em&gt; Caenorhabditis elegans (C. elegans)</em&gt; Und beschreibt kurz einige der Anwendungen, auf die dieses Präparat angewendet werden können.

Dissecting und Aufnahme von C. elegans neuromuskulären Synapse

Neurotransmission is the process by which neurons transfer information via chemical signals to their post-synaptic targets, on a rapid time scale.   This ...

Research

JoVE Journal

Biology

Generation of Stable Transgenic C. elegans Using Microinjection

Generierung von stabilen transgenen C. elegans mit Mikroinjektion

Transgenic Caenorhabditis elegans can be readily created via microinjection of a DNA plasmid solution into the gonad 1.  The plasmid DNA rearranges to ...

Forschung

Biologie

Visualizing the Live Drosophila Glial-neuromuscular Junction with Fluorescent Dyes

Visualizing the Live Drosophila Glial-neuromuscular Junction with Fluorescent Dyes

Visualisierung der Live- Drosophila Glial-neuromuskulären Synapse mit Fluoreszenzfarbstoffen

Our project identified GFP labeled glial structures at the developing larval fly neuromuscular synapse. To look at development of live glial-nerve-muscle ...

The Production of C. elegans Transgenes via Recombineering with the galK Selectable Marker

The Production of C. elegans Transgenes via Recombineering with the galK Selectable Marker

Die Produktion von C. elegans Transgene via Recombineering mit dem GalK Selektionsmarker

The creation of transgenic animals is widely utilized in C. elegans research including the use of GFP fusion proteins to study the regulation and ...

High-throughput Screening and Biosensing with Fluorescent C. elegans Strains

High-throughput Screening and Biosensing with Fluorescent C. elegans Strains

High-Throughput-Screening und Biosensorik mit Fluorescent C. elegans Die Stämme

High-throughput screening (HTS) is a powerful approach for identifying chemical modulators of biological processes.  However, many compounds identified in ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Grundlegende<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Methoden: Synchronisation und Observation

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Creating Defined Gaseous Environments to Study the Effects of Hypoxia on C. elegans

Creating Defined Gaseous Environments to Study the Effects of Hypoxia on C. elegans

Erstellen Definierte gasförmigen Umgebungen, um die Auswirkungen von Hypoxie auf Studieren<em&gt; C elegans</em

Oxygen is essential for all metazoans to survive, with one known exception1. Decreased O2 availability (hypoxia) can arise during states of disease, ...

C. elegans Chemotaxis Assay

C. elegans Chemotaxis Assay

C. elegans Chemotaxis-Assay

Many organisms use chemotaxis to seek out food sources, avoid noxious substances, and find mates.  Caenorhabditis elegans has impressive chemotaxis ...

A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells

A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells

Ein Verfahren zur Kultivierung von embryonalen<em&gt; C. elegans</em&gt; Zellen

C. elegans is a powerful model system, in which genetic and molecular techniques are easily applicable. Until recently though, techniques that require ...

Methods for Skin Wounding and Assays for Wound Responses in C. elegans

Methods for Skin Wounding and Assays for Wound Responses in C. elegans

Verfahren zur Haut Verwundung und Assays für Wound Antworten in<em&gt; C. elegans</em

The C. elegans epidermis and cuticle form a simple yet sophisticated skin layer that can repair localized damage resulting from wounding. Studies of wound ...

Investigating the Spreading and Toxicity of Prion-like Proteins Using the Metazoan Model Organism C. elegans

Investigating the Spreading and Toxicity of Prion-like Proteins Using the Metazoan Model Organism C. elegans

Untersuchung der Verbreitung und Toxizität von Prion-ähnlichen Proteine ​​Mit dem Metazoan Modellorganismus<em&gt; C. elegans</em

Prions are unconventional self-propagating proteinaceous particles, devoid of any coding nucleic acid. These proteinaceous seeds serve as templates for ...