Name: dissecting and recording from the c. elegans neuromuscular junction
Uploaded: 2009-02-25T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissecting and Recording from The C. Elegans Neuromuscular Junction at JoVE.com

Denna artikel har finansierats av NIH bidrag till Jer. Jag vill tacka Dr Alex Gottschalk för att tillhandahålla de transgena maskarna uttrycka kanal rhodopsin i kolinerga motoriska nervceller som används i en av inspelningen demonstrationerna.

A. Beredning av verktyg som används för dissekering. <ol><li> Den dissektion / inspelning kammare: Vi brukar konstruera inspelning kammare av en 1 / 16: e tum magnetisk plåt, med ett cirkulärt hål borras i centrum som är stor nog att rymma en 22 mm diameter rund skyddsglas. De yttre dimensionerna av kammaren kommer att bero på mikroskop scenen används för att göra inspelningar. På baksidan av den magnetiska blad, fäster vi ett 48 x 60 slip mm omfattar, som vi följer i kammaren genom att placera...

<ol>
	<li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Genetics. 77 (1), 71-71 (1974).</li><li>Richmond, J. E., Davis, W. S., Jorgensen, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Nat Neurosci. 2 (11), 959-959 (1999).</li><li>Richmond, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> WormBook. 1, (2006).</li><li>Liewald, J. F., Brauner, M., Stephens, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Nature methods. 5 (10), 895-895 (2008).</li><li>Lockery, S. R., Goodman, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in enzymology. 293, 201-201 (1998).</li><li>Brockie, P. J., Mellem, J. E., Hills, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Neuron. 31 (4), 617-617 (2001).</li><li>Richmond, J. E., Jorgensen, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Nat Neurosci. 2 (9), 791-791 (1999).</li></ol>

Den genetiska modellorganism C elegans är idealiskt för studier av synaptisk transmission genom funktionell analys av mutationer i gener som kodar synaptiska proteiner. Här har vi beskrivit en dissektion teknik som gör C. elegans NMJs tillgänglig för elektrofysiologiska analys. Den medföljande videon visar de kritiska stegen i C. elegans dissektion och den typiska inspelning konfiguration används för att mäta synaptisk aktivitet. De tre stegen som utgör de största utmaningarna i at...

dissecting and recording from the c. elegans neuromuscular junction

Neurotransmissionen är den process genom vilken nervceller överföra information via kemiska signaler till sina postsynaptiska mål, på en snabb tid skala. Denna komplexa process kräver ett samordnat verksamheten i många pre-och postsynaptiska proteiner för att säkerställa lämplig synaptiska anslutningsmöjligheter, överledning av elektriska signaler, med inriktning och grundning av sekretoriska vesikler, avkänning kalcium, vesikelfusion, lokalisering och funktion av postsynaptiska receptorer och slutligen återvinning mekanismer. Som neuroforskare Det är vårt mål att kartlägga vilka proteiner fungerar i varje steg och förstå deras verkningsmekanismer. Elektrofysiologiska inspelningar från synapser ge en kvantifierbar läsa upp de underliggande elektriska händelser som inträffar under synaptisk överföring. Genom att kombinera denna teknik med kraftfull uppsättning molekylära och genetiska verktyg för att manipulera synaptiska proteiner i C. elegans kan vi analysera den resulterande funktionella förändringar i synaptisk transmission. C. elegans NMJs bildas mellan motoriska nervceller och kropp muskler vägg kontroll förflyttning därför mutanter med okoordinerade motoriskt fenotyper (sk UNC s) ofta störa synaptiska överföringen på dessa synapser 1. Eftersom UNC mutanter upprätthålls på ett rikt utbud av en bakteriell föda, är de fortfarande livskraftig, så länge de behålla en del svalget pumpning förmåga att inta föda. Detta, tillsammans med det faktum att C. elegans existera som hermafroditer, tillåter dem att föra vidare muterade avkomma utan att behöva utarbeta parning beteenden. Dessa attribut, tillsammans med vår senaste möjlighet att spela in från maskar NMJs 2,3,7 gör detta till en utmärkt modell organism där för att ta itu exakt hur UNC mutanter påverkan neurotransmission. Den dissektion Metoden innebär immobilisera vuxna maskarna med hjälp av en cyanoacrylic lim för att göra ett snitt i masken nagelbanden exponera NMJs. Eftersom C. elegans vuxna bara 1 mm i längd dissektionen utförs med hjälp av en dissekera mikroskop och kräver god hand-öga-koordination. NMJ inspelningar görs av hel-cellspänning fastspänning individuella kroppens celler väggen muskler och frisättningen av neurotransmittorer kan framkallas med hjälp av olika stimuleringsprotokoll inklusive elektrisk stimulering, ljusaktiverat kanal rhodopsin-medierad depolarisation 4 och hyperosmotic koksaltlösning, som alla kommer att beskrivs kortfattat.

Watch this Scientific Journal Video about Dissecting and Recording from The C. Elegans Neuromuscular Junction at JoVE.com

Dissecting and Recording from The C. Elegans Neuromuscular Junction

Tillämpning av elektrofysiologi till tillgängliga synapser ger ett kvantifierbart mått av synaptisk aktivitet, användbara i analysen synaptisk mutanter. Den här artikeln beskriver en dissektion metod som används för att exponera den neuromuskulära korsningar (NMJ) av<em&gt; Caenorhabditis elegans (C. elegans)</em&gt; Och kortfattat diskuterar några av de användningsområden som denna beredning kan tillämpas.

Dela upp och inspelning från The C. elegans neuromuskulära förbindelsen

Neurotransmission is the process by which neurons transfer information via chemical signals to their post-synaptic targets, on a rapid time scale.   This ...

Research

JoVE Journal

Biology

Generation of Stable Transgenic C. elegans Using Microinjection

Generering av Stabil Transgena C. elegans Använda mikroinjektion

Transgenic Caenorhabditis elegans can be readily created via microinjection of a DNA plasmid solution into the gonad 1.  The plasmid DNA rearranges to ...

Visualizing the Live Drosophila Glial-neuromuscular Junction with Fluorescent Dyes

Visualizing the Live Drosophila Glial-neuromuscular Junction with Fluorescent Dyes

Visualisera Live Drosophila Gliaceller-neuromuskulära förbindelsen med fluorescerande färger

Our project identified GFP labeled glial structures at the developing larval fly neuromuscular synapse. To look at development of live glial-nerve-muscle ...

The Production of C. elegans Transgenes via Recombineering with the galK Selectable Marker

The Production of C. elegans Transgenes via Recombineering with the galK Selectable Marker

Produktionen av C. elegans Transgener via Recombineering med GalK Markör

The creation of transgenic animals is widely utilized in C. elegans research including the use of GFP fusion proteins to study the regulation and ...

High-throughput Screening and Biosensing with Fluorescent C. elegans Strains

High-throughput Screening and Biosensing with Fluorescent C. elegans Strains

High-throughput screening och biosensing med fluorescerande C. elegans Stammar

High-throughput screening (HTS) is a powerful approach for identifying chemical modulators of biological processes.  However, many compounds identified in ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basisk<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Metoder: Synkronisering och miljöövervakning

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Creating Defined Gaseous Environments to Study the Effects of Hypoxia on C. elegans

Creating Defined Gaseous Environments to Study the Effects of Hypoxia on C. elegans

Skapa Definierade Gasformiga miljöer för att studera effekterna av Hypoxi på<em&gt; C. elegans</em

Oxygen is essential for all metazoans to survive, with one known exception1. Decreased O2 availability (hypoxia) can arise during states of disease, ...

C. elegans Chemotaxis Assay

C. elegans Chemotaxis Assay

C. elegans kemotaxianalys

Many organisms use chemotaxis to seek out food sources, avoid noxious substances, and find mates.  Caenorhabditis elegans has impressive chemotaxis ...

A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells

A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells

En metod för odling av embryonala<em&gt; C. elegans</em&gt; Celler

C. elegans is a powerful model system, in which genetic and molecular techniques are easily applicable. Until recently though, techniques that require ...

Methods for Skin Wounding and Assays for Wound Responses in C. elegans

Methods for Skin Wounding and Assays for Wound Responses in C. elegans

Metoder för Skin såra och Analyser för Wound-svar i<em&gt; C. elegans</em

The C. elegans epidermis and cuticle form a simple yet sophisticated skin layer that can repair localized damage resulting from wounding. Studies of wound ...

Investigating the Spreading and Toxicity of Prion-like Proteins Using the Metazoan Model Organism C. elegans

Investigating the Spreading and Toxicity of Prion-like Proteins Using the Metazoan Model Organism C. elegans

Undersöka spridning och toxicitet Prion-liknande proteiner Använda metazoan Model Organism<em&gt; C. elegans</em

Prions are unconventional self-propagating proteinaceous particles, devoid of any coding nucleic acid. These proteinaceous seeds serve as templates for ...