Name: primary culture of adult rat heart myocytes
Uploaded: 2009-06-16T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes at JoVE.com

<p class="jove_title"> Deel I. Voorbereiding voor een operatie </p><ol><li> De dag voor de rat operatie, er zeker van dat alle oplossingen worden gemaakt, maar nog geen enzymen. Buffers A, B en de wasbuffer moeten alle worden gefilterd voor steriliteit voorafgaand aan de opslag. De buffers moeten allemaal worden bewaard bij 4 ° C. </li><li> 6-well kultuurplaten moeten worden bedekt met 10-20 ug / ml laminine in 2 ml 1XSFM de dag ervoor ook, en moet worden bewaard bij 37 ° C in een CO <sub>2</sub> incubator. </li><li> Op de dag van de operatie...

<ol>
	<li>Miriyala, J., Nguyen, T., Yue, D. T., Colecraft, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+CaVbeta+subunits,+and+lack+of+functional+reserve,+in+protein+kinase+A+modulation+of+cardiac+CaV1.2+channels.">Role of CaVbeta subunits, and lack of functional reserve, in protein kinase A modulation of cardiac CaV1.2 channels.</a> <em style='font-style: italic'>Circ Res</em>. <b>102</b> (7), e54-e64 (2008).</li><li>SX, T. a. k. a. h. a. s. h. i., Mittman, S., Colecraft, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinctive+modulatory+effects+of+five+human+auxiliary+beta2+subunit+splice+variants+on+L-type+calcium+channel+gating.">Distinctive modulatory effects of five human auxiliary beta2 subunit splice variants on L-type calcium channel gating.</a> <em style='font-style: italic'>Biophys</em>. , 84-845 (2003).</li></ol>

<p class="jove_content"> Een kritische stap is de snelheid waarmee de geïsoleerde hart wordt opgehangen op het perfusie-systeem. De lengte van de enzymatische vertering periode kan een beetje verschillend voor elke rat. De aanpassing is afhankelijk van hoe zacht het hart wordt na de reguliere periode van de spijsvertering. De langzaam herstel van de Ca <sup>2 +</sup> na-enzym digestie is essentieel voor het verkrijgen van Ca <sup>2 +-tolerante</sup> gezonde cellen. </p><p class="jove_content"> Voor de cavia, het protocol is hetzelfde, behalve ...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>NaCl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>S6191</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KCl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P9541</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HEPES</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>H4034</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>K<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub></td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P9666</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MgSO<sub>4</sub></td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fluka</td>
<td>63068</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glucose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>G7021</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CaCl<sub>2</sub></td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>C7902</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heparin Sodium Salt</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>H4784</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Collagenase Type II</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Worthington Biochemical</td>
<td>LS004176</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Protease XIV</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P5147</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2,3-Butanedione Monoxime (BDM)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>B0753</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Carnitine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>C9500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Taurine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>T0625</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glutamic Acid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>G1501</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BSA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A3294</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Creatine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>C3630</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Antibiotic</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cellgro</td>
<td>30-009-CI</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Media 199</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>11150</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hyclone</td>
<td>SH30071.03</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Laminin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Bioscience</td>
<td>354232</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>water bath</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>15-462-5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>variable flow chemical pump</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>15-077-67</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>6-well culture plate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning</td>
<td>3516</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

primary culture of adult rat heart myocytes

<p class="jove_content">Gekweekte primaire volwassen knaagdieren hart-cellen zijn een belangrijk model voor cardiovasculair onderzoek. Toch kunnen stellen en daarvoor solide, levensvatbare gekweekte volwassen myocyten wordt een technisch uitdagende, snelheidsbeperkende stap voor vele onderzoekers. Hier hebben we beschreven een protocol om een ​​hoge opbrengst van volwassen ratten hart myocyten dat levensvatbaar te blijven in de cultuur gedurende enkele dagen te verkrijgen. Het hart is geïsoleerd en geperfuseerd met collagenase en protease onder lage Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; Voorwaarden om een ​​myocyten herstellen. Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt;-Tolerante cellen zijn verkregen door de stapsgewijze verhoging van extracellulaire Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; Concentratie in drie opeenvolgende wasstappen. Cellen worden gefilterd, geresuspendeerd in kweekmedium, en uitgeplaat op laminine gecoat enten. Verkregen gekweekt myocyten gebruik van dit protocol levensvatbaar zijn voor maximaal vier dagen en zijn geschikt voor de meeste experimenten, inclusief de elektrofysiologie, biochemie, beeldvorming en moleculaire biologie.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes at JoVE.com

Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes

<p class="jove_content">In dit artikel beschrijven we een typische manier om te isoleren en cultuur volwassen ratten hart myocyten. Collagenase en protease worden gebruikt voor het verteren en te isoleren single myocyten. Myocyten gekweekte volgen van dit protocol voldoen aan de meeste eisen experiment.</p>

Primaire Cultuur van volwassen ratten Heart myocyten

Cultured primary adult rodent heart cells are an important model system for cardiovascular research.  Nevertheless, establishment of robust, viable ...

Research

JoVE Journal

Biology

Organotypic Culture of Adult Rabbit Retina

Organotypische Cultuur van Adult Rabbit Retina

Organotypic culture systems of functional neural tissues are important tools in neurobiological research. Ideally, such a system should be compatible with ...

Implantation of Engineered Tissue in the Rat Heart

Implantatie van Engineered Tissue in het Rat Hart

Rodent surgery is often an important component in assessing the utility of engineered tissues. A wide variety of surgical procedures can be performed in ...

Isolation and Genetic Manipulation of Adult Cardiac Myocytes for Confocal Imaging

Isolatie en genetische manipulatie van Adult hartspiercellen voor confocale Imaging

Cardiac myocytes isolated from adult hearts are widely accepted as a model somewhere half way between embryonic and neonatal muscle cells on one side and ...

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

Tot vaststelling van primaire Adult Fibroblast Culturen van knaagdieren

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized.  Primary cells are preferred ...

Preparation of Highly Coupled Rat Heart Mitochondria

Bereiding van zeer Gekoppeld Rat Hart Mitochondriën

The function of mitochondria in generation of cellular ATP in the process of oxidative phosphorylation is widely recognised. During the past decades there ...

Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells

Isolatie en Primaire Cultuur van Rat levercellen

Primary hepatocyte culture is a valuable tool that has been extensively used in basic research of liver function, disease, pathophysiology, pharmacology ...

Isolating Primary Melanocyte-like Cells from the Mouse Heart

Isoleren Primaire Melanocyte-achtige cellen van de Muis van het Hart

We identified a novel population of melanocyte-like cells (also known as cardiac melanocytes) in the hearts of mice and humans that contribute to atrial ...

Methods for the Isolation, Culture, and Functional Characterization of Sinoatrial Node Myocytes from Adult Mice

Methoden voor de isolatie, Cultuur en functionele karakterisering van de sinusknoop Myocytes van volwassen muizen

Sinoatrial node myocytes (SAMs) act as the natural pacemakers of the heart, initiating each heart beat by generating spontaneous action potentials (APs). ...

Simultaneous Isolation of High Quality Cardiomyocytes, Endothelial Cells, and Fibroblasts from an Adult Rat Heart

Gelijktijdige isolatie van hoogwaardige cardiomyocyten, endothelcellen en fibroblasten uit een volwassen rat hart

The rat is an important animal model used in cardiovascular research, and rat cardiac cells are used routinely for in vitro analysis of the molecular ...

Isolation and Culture of Primary Mouse Keratinocytes from Neonatal and Adult Mouse Skin

Isolatie en Cultuur van Primaire Muis Keratinocyten Uit Neonatale en Volwassen Muis Huid

The keratinocyte (KC) is the predominant cell type in the epidermis, the outermost layer of the skin. Epidermal KCs play a critical role in providing skin ...