Name: primary culture of adult rat heart myocytes
Uploaded: 2009-06-16T00:00:00
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<p class="jove_title"> Préparation pour la chirurgie de la partie I. </p><ol><li> La veille de la chirurgie chez le rat, assurez-vous que toutes les solutions sont faites, mais n&#39;ajoutez pas encore les enzymes. Tampons A, B et le tampon de lavage devraient tous être filtrée pour la stérilité avant le stockage. Les tampons devraient tous être conservés à 4 ° C. </li><li> Plaques de 6 puits de culture de tissus doivent être plaqués avec 10-20 mg / ml de laminine dans 2 mL 1XSFM la veille aussi, et doivent être conservés à 37 ° ...

<ol>
	<li>Miriyala, J., Nguyen, T., Yue, D. T., Colecraft, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+CaVbeta+subunits,+and+lack+of+functional+reserve,+in+protein+kinase+A+modulation+of+cardiac+CaV1.2+channels.">Role of CaVbeta subunits, and lack of functional reserve, in protein kinase A modulation of cardiac CaV1.2 channels.</a> <em style='font-style: italic'>Circ Res</em>. <b>102</b> (7), e54-e64 (2008).</li><li>SX, T. a. k. a. h. a. s. h. i., Mittman, S., Colecraft, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinctive+modulatory+effects+of+five+human+auxiliary+beta2+subunit+splice+variants+on+L-type+calcium+channel+gating.">Distinctive modulatory effects of five human auxiliary beta2 subunit splice variants on L-type calcium channel gating.</a> <em style='font-style: italic'>Biophys</em>. , 84-845 (2003).</li></ol>

<p class="jove_content"> Une étape essentielle est la vitesse avec laquelle le cœur isolé est accroché sur le système de perfusion. La longueur de la période de digestion enzymatique peut être un peu différent pour chaque rat. L&#39;ajustement dépend de la manière douce le cœur devient après la période régulière de la digestion. La reprise lente de Ca <sup>2 +</sup> après digestion enzymatique est essentielle pour l&#39;obtention de Ca <sup>2 +-tolérants</sup> aux cellules saines. </p><p class="jove_content"> Pour cochon de Gui...

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>NaCl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>S6191</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KCl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P9541</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HEPES</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>H4034</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>K<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub></td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P9666</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MgSO<sub>4</sub></td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fluka</td>
<td>63068</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glucose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>G7021</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CaCl<sub>2</sub></td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>C7902</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heparin Sodium Salt</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>H4784</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Collagenase Type II</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Worthington Biochemical</td>
<td>LS004176</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Protease XIV</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P5147</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2,3-Butanedione Monoxime (BDM)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>B0753</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Carnitine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>C9500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Taurine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>T0625</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glutamic Acid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>G1501</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BSA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A3294</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Creatine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>C3630</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Antibiotic</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cellgro</td>
<td>30-009-CI</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Media 199</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>11150</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hyclone</td>
<td>SH30071.03</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Laminin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Bioscience</td>
<td>354232</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>water bath</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>15-462-5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>variable flow chemical pump</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>15-077-67</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>6-well culture plate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning</td>
<td>3516</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

primary culture of adult rat heart myocytes

<p class="jove_content">Culture primaire de cellules adultes rongeurs cœur sont un système modèle important pour la recherche cardiovasculaire. Néanmoins, l&#39;établissement de solides, viables myocytes adultes cultivés peut être un défi technique, étape limitante de nombreux chercheurs. Ici, nous avons décrit un protocole pour obtenir un rendement élevé d&#39;adultes myocytes cardiaques de rat qui demeurent viables en culture pendant plusieurs jours. Le cœur est isolé et perfusé avec de la collagénase et la protéase sous faible teneur en Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; Conditions de récupérer les myocytes unique. Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; Tolérant cellules sont obtenues par augmentation progressive de la Ca extracellulaire<sup&gt; 2 +</supConcentration&gt; en trois étapes de lavage subséquentes. Les cellules sont filtrées, remis en suspension dans un milieu de culture, et plaquées sur les feuillets laminine couché. Myocytes cultivés obtenus en utilisant ce protocole sont viables pour un maximum de quatre jours et sont adaptés à la plupart des expériences dont l&#39;électrophysiologie, biochimie, l&#39;imagerie et de biologie moléculaire.</p>

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Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes

<p class="jove_content">Dans ce papier, nous avons décrit d&#39;une manière typique à isoler et cultiver les myocytes cardiaques de rat adulte. Collagénase et la protéase sont utilisés pour digérer et d&#39;isoler les myocytes unique. Myocytes cultivés suivre ce protocole répondent aux exigences les plus expérimenter.</p>

Culture primaire des adultes myocytes cœur de rat

Cultured primary adult rodent heart cells are an important model system for cardiovascular research.  Nevertheless, establishment of robust, viable ...

Research

JoVE Journal

Biology

Organotypic Culture of Adult Rabbit Retina

Culture organotypique de Retina lapin adulte

Organotypic culture systems of functional neural tissues are important tools in neurobiological research. Ideally, such a system should be compatible with ...

Recherche

Biologie

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Implantation de l&#39;ingénierie tissulaire dans le coeur de rat

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L&#39;isolement et la manipulation génétique des adultes pour les myocytes cardiaques imagerie confocale

Cardiac myocytes isolated from adult hearts are widely accepted as a model somewhere half way between embryonic and neonatal muscle cells on one side and ...

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Établir des cultures primaires de fibroblastes adultes à partir de rongeurs

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Preparation of Highly Coupled Rat Heart Mitochondria

Préparation de coeur de rat fortement couplées Mitochondries

The function of mitochondria in generation of cellular ATP in the process of oxidative phosphorylation is widely recognised. During the past decades there ...

Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells

L&#39;isolement et la culture primaire de cellules de foie de rat

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Isoler des cellules mélanocytes comme primaires du Cœur de souris

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Méthodes pour l&#39;isolement, la culture et la caractérisation fonctionnelle des sinoatrial Node myocytes de souris adultes

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