Name: primary culture of adult rat heart myocytes
Uploaded: 2009-06-16T00:00:00
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<p class="jove_title"> Parte I. Preparazione per la chirurgia </p><ol><li> Il giorno prima della chirurgia ratto, accertarsi che tutte le soluzioni sono fatti, ma non aggiungere alcun enzimi ancora. Buffer A, B e il tampone di lavaggio dovrebbero essere filtrate per la sterilità prima di stoccaggio. I tamponi dovrebbero essere conservato a 4 ° C. </li><li> 6-pozzetti colture di tessuti deve essere placcato con 10-20 mg / mL laminina in 2 ml 1XSFM il giorno prima come bene, e deve essere conservato a 37 ° C in un incubatore CO <sub>2.</sub> <...

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	<li>Miriyala, J., Nguyen, T., Yue, D. T., Colecraft, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+CaVbeta+subunits,+and+lack+of+functional+reserve,+in+protein+kinase+A+modulation+of+cardiac+CaV1.2+channels.">Role of CaVbeta subunits, and lack of functional reserve, in protein kinase A modulation of cardiac CaV1.2 channels.</a> <em style='font-style: italic'>Circ Res</em>. <b>102</b> (7), e54-e64 (2008).</li><li>SX, T. a. k. a. h. a. s. h. i., Mittman, S., Colecraft, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinctive+modulatory+effects+of+five+human+auxiliary+beta2+subunit+splice+variants+on+L-type+calcium+channel+gating.">Distinctive modulatory effects of five human auxiliary beta2 subunit splice variants on L-type calcium channel gating.</a> <em style='font-style: italic'>Biophys</em>. , 84-845 (2003).</li></ol>

<p class="jove_content"> Un passo fondamentale è la velocità con cui è appeso il cuore isolato sul sistema di perfusione. La durata del periodo di digestione enzimatica può essere un po &#39;diverso per ogni ratto. La regolazione dipende da come il cuore diventa morbida dopo il periodo normale di digestione. Il piano di recupero di Ca <sup>2 +</sup> dopo la digestione enzima è essenziale per ottenere le cellule sane Ca <sup>2 +-tollerante.</sup> </p><p class="jove_content"> Per la cavia, il protocollo è lo stesso, tranne ialuronidasi vien...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>NaCl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>S6191</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KCl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P9541</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HEPES</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>H4034</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>K<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub></td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P9666</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MgSO<sub>4</sub></td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fluka</td>
<td>63068</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glucose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>G7021</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CaCl<sub>2</sub></td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>C7902</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heparin Sodium Salt</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>H4784</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Collagenase Type II</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Worthington Biochemical</td>
<td>LS004176</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Protease XIV</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P5147</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2,3-Butanedione Monoxime (BDM)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>B0753</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Carnitine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>C9500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Taurine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>T0625</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glutamic Acid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>G1501</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BSA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A3294</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Creatine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>C3630</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Antibiotic</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cellgro</td>
<td>30-009-CI</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Media 199</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>11150</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hyclone</td>
<td>SH30071.03</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Laminin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Bioscience</td>
<td>354232</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>water bath</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>15-462-5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>variable flow chemical pump</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>15-077-67</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>6-well culture plate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning</td>
<td>3516</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

primary culture of adult rat heart myocytes

<p class="jove_content">Coltura primaria adulto cellule del cuore roditori sono un modello di sistema importante per la ricerca cardiovascolare. Tuttavia, la creazione di robusti, miociti vitali adulto colto può essere tecnicamente impegnativo, fattore limitante per molti ricercatori. Qui abbiamo descritto un protocollo per ottenere un elevato rendimento di miociti adulti cuore di ratto che rimangono vitali in coltura per diversi giorni. Il cuore è isolato e perfuso con collagenasi e proteasi in basso Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; Condizioni di recuperare singoli miociti. Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt;-Tolerant cellule sono ottenute da un aumento graduale in extracellulare Ca<sup&gt; 2 +</supConcentrazione&gt; in tre successive fasi di lavaggio. Le cellule sono filtrati, risospeso in terreno di coltura, e placcato sulla scivola laminina rivestito. Miociti in coltura ottenuti usando questo protocollo sono vitali per un massimo di quattro giorni e sono adatti per la maggior parte degli esperimenti tra cui elettrofisiologia, biochimica, biologia molecolare e di imaging.</p>

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Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes

<p class="jove_content">In questo articolo, abbiamo descritto un modo tipico per isolare e cultura miociti adulti cuore di ratto. Collagenasi e proteasi sono utilizzati da digerire e isolare singoli miociti. Miociti colto seguire questo protocollo soddisfare le esigenze più sperimentare.</p>

Cultura primario di miociti adulti Cuore Rat

Cultured primary adult rodent heart cells are an important model system for cardiovascular research.  Nevertheless, establishment of robust, viable ...

Research

JoVE Journal

Biology

Organotypic Culture of Adult Rabbit Retina

Cultura organotipica di Retina Coniglio adulti

Organotypic culture systems of functional neural tissues are important tools in neurobiological research. Ideally, such a system should be compatible with ...

Ricerca

Biologia

Implantation of Engineered Tissue in the Rat Heart

L&#39;impianto di ingegneria tessutale nel Cuore Rat

Rodent surgery is often an important component in assessing the utility of engineered tissues. A wide variety of surgical procedures can be performed in ...

Isolation and Genetic Manipulation of Adult Cardiac Myocytes for Confocal Imaging

L&#39;isolamento e la manipolazione genetica di adulti miociti cardiaci per confocale Imaging

Cardiac myocytes isolated from adult hearts are widely accepted as a model somewhere half way between embryonic and neonatal muscle cells on one side and ...

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

Stabilire colture primarie di fibroblasti adulti dai roditori

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized.  Primary cells are preferred ...

Preparation of Highly Coupled Rat Heart Mitochondria

Preparazione del Cuore Rat altamente Accoppiato mitocondri

The function of mitochondria in generation of cellular ATP in the process of oxidative phosphorylation is widely recognised. During the past decades there ...

Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells

Isolamento e la coltura primaria di cellule epatiche di ratto

Primary hepatocyte culture is a valuable tool that has been extensively used in basic research of liver function, disease, pathophysiology, pharmacology ...

Isolating Primary Melanocyte-like Cells from the Mouse Heart

Isolamento di cellule melanociti-come primario dal Cuore del mouse

We identified a novel population of melanocyte-like cells (also known as cardiac melanocytes) in the hearts of mice and humans that contribute to atrial ...

Methods for the Isolation, Culture, and Functional Characterization of Sinoatrial Node Myocytes from Adult Mice

Metodi per l&#39;isolamento, la cultura, e la caratterizzazione funzionale di seno-atriale Nodo miociti da topi adulti

Sinoatrial node myocytes (SAMs) act as the natural pacemakers of the heart, initiating each heart beat by generating spontaneous action potentials (APs). ...

Simultaneous Isolation of High Quality Cardiomyocytes, Endothelial Cells, and Fibroblasts from an Adult Rat Heart

Isolamento simultaneo di cardiomiociti di alta qualità, cellule endoteliali e fibroblasti da un cuore di ratto adulto

The rat is an important animal model used in cardiovascular research, and rat cardiac cells are used routinely for in vitro analysis of the molecular ...

Isolation and Culture of Primary Mouse Keratinocytes from Neonatal and Adult Mouse Skin

Isolamento e cultura dei cheratinociti primari del mouse dalla pelle dei neonati e adulti

The keratinocyte (KC) is the predominant cell type in the epidermis, the outermost layer of the skin. Epidermal KCs play a critical role in providing skin ...