Name: primary culture of adult rat heart myocytes
Uploaded: 2009-06-16T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes at JoVE.com

<p class="jove_title">手術のためのパートI.準備</p><ol><li>ラットの手術の前日は、すべてのソリューションが行われていることを確認して、まだどの酵素を追加しないでください。バッファ、Bおよび洗浄緩衝液は、すべてのストレージの前に無菌のためにフィルタリングする必要があります。バッファはすべて4℃で保存してください。 </li><li> 6ウェル組織培養プレートを10〜20μgの/ 2mLの1XSFM mLのラミニンと同様前日...

<ol>
	<li>Miriyala, J., Nguyen, T., Yue, D. T., Colecraft, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+CaVbeta+subunits,+and+lack+of+functional+reserve,+in+protein+kinase+A+modulation+of+cardiac+CaV1.2+channels.">Role of CaVbeta subunits, and lack of functional reserve, in protein kinase A modulation of cardiac CaV1.2 channels.</a> <em style='font-style: italic'>Circ Res</em>. <b>102</b> (7), e54-e64 (2008).</li><li>SX, T. a. k. a. h. a. s. h. i., Mittman, S., Colecraft, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinctive+modulatory+effects+of+five+human+auxiliary+beta2+subunit+splice+variants+on+L-type+calcium+channel+gating.">Distinctive modulatory effects of five human auxiliary beta2 subunit splice variants on L-type calcium channel gating.</a> <em style='font-style: italic'>Biophys</em>. , 84-845 (2003).</li></ol>

<p class="jove_content">重要なステップは、単離心臓を灌流システム上でハングアップされる速度です。酵素消化の期間の長さは、各ラットのために少し異なる場合があります。調整は、心臓、消化の定期的な期間の後になるとどのようにソフトに依存します。酵素消化後のCa <sup>2</sup>徐々に回復<sup>+は、Ca 2 +</sup>トレラント健康な細胞を得るために不可欠です。 </p><p class="jove_content">モルモットの場合、プロトコ?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>NaCl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>S6191</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KCl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P9541</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HEPES</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>H4034</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>K<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub></td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P9666</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MgSO<sub>4</sub></td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fluka</td>
<td>63068</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glucose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>G7021</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CaCl<sub>2</sub></td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>C7902</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heparin Sodium Salt</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>H4784</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Collagenase Type II</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Worthington Biochemical</td>
<td>LS004176</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Protease XIV</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P5147</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2,3-Butanedione Monoxime (BDM)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>B0753</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Carnitine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>C9500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Taurine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>T0625</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glutamic Acid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>G1501</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BSA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A3294</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Creatine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>C3630</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Antibiotic</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cellgro</td>
<td>30-009-CI</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Media 199</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>11150</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hyclone</td>
<td>SH30071.03</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Laminin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Bioscience</td>
<td>354232</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>water bath</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>15-462-5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>variable flow chemical pump</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>15-077-67</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>6-well culture plate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning</td>
<td>3516</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

primary culture of adult rat heart myocytes

<p class="jove_content">培養一次成人の齧歯類の心臓の細胞は、心臓血管研究のための重要なモデル系である。それにもかかわらず、堅牢な、実行可能な培養成人心筋細胞の確立は、多くの研究者のための技術的に困難な、律速段階であることができる。ここでは、数日間培養中で実行可能なまま成体ラットの心筋細胞の高い収量を得るためのプロトコルを説明した。心臓は、低Caで単離され、コラゲナーゼやプロテアーゼで灌流され<sup&gt; 2 +</sup&gt;条件は、単一の筋細胞を回復する。のCa<sup&gt; 2 +</sup&gt;耐性細胞は、細胞外Caで段階的に増加することによって得られる<sup&gt; 2 +</sup以降3回の洗浄ステップで&gt;集中。細胞を濾過し、培養培地中に再懸濁し、ラミニンコートしたガラス上でメッキされています。このプロトコルを使用して得られた培養心筋細胞では最長4日間生存可能と電気生理学、生化学、イメージングと分子生物学を含むほとんどの実験に適しています。</p>

Watch this Scientific Journal Video about Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes at JoVE.com

Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes

<p class="jove_content">本稿では、成体ラットの心筋細胞を分離、培養に一般的な方法を説明した。コラゲナーゼとプロテアーゼは、単一の心筋細胞を消化して単離するために使用されています。心筋細胞は、ほとんどの実験の要件を満たすこのプロトコルに従って培養した。</p>

成体ラットの心筋細胞の初代培養

Cultured primary adult rodent heart cells are an important model system for cardiovascular research.  Nevertheless, establishment of robust, viable ...

Research

JoVE Journal

Biology

Organotypic Culture of Adult Rabbit Retina

大人のウサギの網膜の器官培養

Organotypic culture systems of functional neural tissues are important tools in neurobiological research. Ideally, such a system should be compatible with ...

Implantation of Engineered Tissue in the Rat Heart

ラット心臓における培養組織の移植

Rodent surgery is often an important component in assessing the utility of engineered tissues. A wide variety of surgical procedures can be performed in ...

Isolation and Genetic Manipulation of Adult Cardiac Myocytes for Confocal Imaging

共焦点イメージングのための成人心筋細胞の単離と遺伝子操作

Cardiac myocytes isolated from adult hearts are widely accepted as a model somewhere half way between embryonic and neonatal muscle cells on one side and ...

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

げっ歯類からプライマリ大人の線維芽細胞培養の確立

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized.  Primary cells are preferred ...

Preparation of Highly Coupled Rat Heart Mitochondria

ミトコンドリアは密結合のラットの心臓の準備

The function of mitochondria in generation of cellular ATP in the process of oxidative phosphorylation is widely recognised. During the past decades there ...

Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells

ラット肝細胞の単離及び初代培養

Primary hepatocyte culture is a valuable tool that has been extensively used in basic research of liver function, disease, pathophysiology, pharmacology ...

Isolating Primary Melanocyte-like Cells from the Mouse Heart

マウスの心臓から初代メラノサイト様細胞を単離する

We identified a novel population of melanocyte-like cells (also known as cardiac melanocytes) in the hearts of mice and humans that contribute to atrial ...

Methods for the Isolation, Culture, and Functional Characterization of Sinoatrial Node Myocytes from Adult Mice

成体マウスから洞房結節筋細胞の単離、培養、および機能解析のための方法

Sinoatrial node myocytes (SAMs) act as the natural pacemakers of the heart, initiating each heart beat by generating spontaneous action potentials (APs). ...

Simultaneous Isolation of High Quality Cardiomyocytes, Endothelial Cells, and Fibroblasts from an Adult Rat Heart

成体ラット心臓からの高品質心筋細胞、内皮細胞および線維芽細胞の同時単離

The rat is an important animal model used in cardiovascular research, and rat cardiac cells are used routinely for in vitro analysis of the molecular ...

Isolation and Culture of Primary Mouse Keratinocytes from Neonatal and Adult Mouse Skin

新生児および成人マウス皮膚由来の初代マウスケラチノサイトの単離および培養

The keratinocyte (KC) is the predominant cell type in the epidermis, the outermost layer of the skin. Epidermal KCs play a critical role in providing skin ...