Name: staining of proteins in gels with coomassie g-250 without organic solvent and acetic acid
Uploaded: 2009-08-14T00:00:00
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<p class="jove_content"> Nous tenons à souligner l&#39;aide technique de Ines Racke. </p>

<p class="jove_title"> Partie 1: Préparation de la solution de coloration CBB </p><ol><li> 60-80 mg de CBB G-250 sont dissous dans 1 litre d&#39;eau bidistillée en remuant pendant 2-4 heures. Enfin, 3 ml d&#39;HCl concentré est ajouté à la solution bleu foncé avec agitation pendant une minute et stockés dans l&#39;obscurité pour une utilisation ultérieure. La solution peut être stockée pendant des semaines jusqu&#39;à plusieurs mois sans perdre son efficacité coloration. </li><li> HCl concentré doit être manipulé avec les préca...

<ol>
	<li>Wondrak, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Process+for+fast+visualization+of+protein.">Process for fast visualization of protein.</a> <em style='font-style: italic'>US patent</em>. , (2001).</li><li>Wondrak, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solution+for+fast+visualization+of+protein.">Solution for fast visualization of protein.</a> <em style='font-style: italic'>US patent</em>. , (2001).</li></ol>

<ul><li> Les étapes de lavage sont essentiels pour la coloration efficace des protéines. Une réduction du temps de lavage en dessous de 2 min ou diminution du volume de l&#39;eau (&lt;50 ml) peut entraîner des pâles bandes protéiques bleu, très probablement due à des montants plus élevés des matières résiduelles de SDS dans le gel. </li><li> Si les protéines vont être analysés par spectrométrie de masse, les étapes de chauffage dans le four micro-ondes devrait être ignorés, le temps pour le lavage du gel étendu à environ 10...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Coomassie Brilliant Blue G-250</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>AppliChem</td>
<td>A3480</td>
<td>any other CBB G-250 could be used as well</td>
</tr>
<tr>
<td>Concentrated HCl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

staining of proteins in gels with coomassie g-250 without organic solvent and acetic acid

<p class="jove_content">Dans classiques protocoles de coloration des protéines à l&#39;aide de Coomassie Brilliant Blue (CBB), des solutions à haute teneur en toxiques et inflammables solvants organiques (méthanol, éthanol ou 2-propanol) et l&#39;acide acétique sont utilisés pour la fixation, coloration et de décoloration des protéines dans un gel après SDS -PAGE. Pour accélérer la procédure, le chauffage de la solution de coloration dans le four à micro-ondes pour un court laps de temps est fréquemment utilisé. Ce qui cause l&#39;évaporation du méthanol toxiques ou dangereux, l&#39;éthanol ou propanol-2 et une forte odeur d&#39;acide acétique dans le laboratoire qui doivent être évitées à cause de considérations de sécurité. Dans un protocole initialement publié en deux demandes de brevet par EM Wondrak (US2001046709 (A1), US6319720 (B1)), une composition alternative de la solution de coloration est décrit dans lequel aucun solvant organique ou de l&#39;acide est utilisé. Le CBB est dissous dans l&#39;eau bidistillée (60-80mg de CBB G-250 par litre) et 35 mM HCl est ajoutée comme le seul composé d&#39;autres dans la solution de coloration. Le CBB staning du gel est effectué après un lavage de SDS-PAGE et approfondie du gel dans l&#39;eau bidistillée. En chauffant le gel pendant le lavage et coloration étapes, le processus peut être terminé plus rapidement et aucune photo-oxydés toxiques ou dangereux sont s&#39;évaporer. La coloration des protéines se fait déjà au sein de 1 minute après le chauffage du gel dans la solution de coloration et est entièrement développé après 15-30 minutes avec un fond bleu qui est légèrement décolorés complètement par lavage prolongé du gel coloré à l&#39;eau bidistillée, sans affecter la protéine tachés bandes.</p>

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Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

<p class="jove_content">Un protocole court pour la coloration des protéines de Coomassie Brilliant Blue (CBB) G-250 dans des gels de polyacrylamide est décrite sans utiliser de solvants organiques ou d&#39;acide acétique comme dans les procédures de coloration classique avec CBB.</p>

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