Name: staining of proteins in gels with coomassie g-250 without organic solvent and acetic acid
Uploaded: 2009-08-14T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid at JoVE.com

<p class="jove_content"> Wir möchten die technische Unterstützung von Ines Racke anzuerkennen. </p>

<p class="jove_title"> Teil 1: Vorbereitung der CBB Färbelösung </p><ol><li> 60-80 mg der CBB G-250 werden in 1 Liter bidestilliertem Wasser unter Rühren für 2-4 Stunden gelöst. Schließlich wird mit 3 ml konzentrierter HCl auf den dunkelblauen Lösung unter Rühren für eine weitere Minute hinzugefügt und im Dunkeln aufbewahrt für eine spätere Verwendung. Die Lösung kann für mehrere Wochen aufbewahrt werden bis zu mehreren Monaten, ohne seine Färbung Effizienz. </li><li> Konzentrierte HCl sollte mit der üblichen Sorgfalt und unter ...

<ol>
	<li>Wondrak, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Process+for+fast+visualization+of+protein.">Process for fast visualization of protein.</a> <em style='font-style: italic'>US patent</em>. , (2001).</li><li>Wondrak, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solution+for+fast+visualization+of+protein.">Solution for fast visualization of protein.</a> <em style='font-style: italic'>US patent</em>. , (2001).</li></ol>

<ul><li> Die Waschschritte sind entscheidend für die effiziente Färbung der Proteine. Eine reduzierte Waschzeit unter 2 min oder reduziertem Volumen von Wasser (&lt;50 ml) kann in hellblauen Proteinbanden, wahrscheinlich aufgrund der höheren Mengen an restlichem SDS im Gel führen. </li><li> Wenn die Proteine ​​gehen, um durch Massenspektrometrie analysiert werden, die Heizung Schritte in der Mikrowelle übersprungen werden soll, ist die Zeit für das Waschen des Gels erweitert, um ca. 10 min in jedem Schritt und die Färbung der Zeit, b...

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		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Coomassie Brilliant Blue G-250</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>AppliChem</td>
<td>A3480</td>
<td>any other CBB G-250 could be used as well</td>
</tr>
<tr>
<td>Concentrated HCl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

staining of proteins in gels with coomassie g-250 without organic solvent and acetic acid

<p class="jove_content">In der klassischen Protein Färbeprotokollen mit Coomassie Brilliant Blue (CBB), Lösungen mit hohen Gehalten von toxischen und brennbaren organischen Lösungsmitteln (Methanol, Ethanol oder 2-Propanol) und Essigsäure sind zur Fixierung verwendet, Färben und Entfärben von Proteinen in einem Gel nach SDS -PAGE. Zur Beschleunigung der Verfahren, Erhitzen der Färbelösung in der Mikrowelle für eine kurze Zeit wird häufig verwendet. Dies führt in der Regel Verdampfung von giftigen oder gefährlichen Methanol, Ethanol oder 2-Propanol und ein starker Geruch von Essigsäure im Labor, die vermieden aus Sicherheitserwägungen sollte. In einem Protokoll ursprünglich in zwei Patentanmeldungen EM Wondrak (US2001046709 (A1), US6319720 (B1)) veröffentlicht wurde, ist eine alternative Zusammensetzung der Färbelösung beschrieben, in denen keine organischen Lösungsmittel oder Säuren verwendet wird. Die CBB ist in bidestilliertem Wasser gelöst (60-80mg CBB G-250 pro Liter) und 35 mM HCl ist als einzige weitere Verbindung in die Färbelösung aufgenommen. Die CBB Staning des Gels wird nach SDS-PAGE und gründliches Waschen des Gels in bidestilliertem Wasser getan. Durch Erhitzen des Gels während des Waschens und Färbeschritte, kann der Prozess schneller beendet sein und keine giftigen oder gefährlichen Kombinationspräparate sind verdampft. Die Färbung von Proteinen tritt bereits innerhalb von 1 Minute nach dem Erwärmen des Gels in Färbelösung und ist voll nach 15-30 min mit einem leicht blauen Hintergrund, die komplett bei längerer Waschen der gefärbten Gel in bidestilliertem Wasser entfärbt entwickelt, ohne dass die gefärbten Proteins Bands.</p>

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Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

<p class="jove_content">Ein kurzes Protokoll für Protein-Färbung mit Coomassie Brilliant Blue (CBB) G-250 in Polyacrylamidgelen wird ohne Verwendung von organischen Lösungsmitteln oder Essigsäure als in der klassischen Färbeverfahren mit CBB beschrieben.</p>

Färbung von Proteinen in Gelen mit Coomassie G-250 ohne organische Lösungsmittel und Essigsäure

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Research

JoVE Journal

Biology

Staining Proteins in Gels

Die Färbung Proteine ​​in Gelen

Following separation by electrophoretic methods, proteins in a gel can be detected by several staining methods. This unit describes protocols for ...

Forschung

Biologie

Fast and Sensitive Colloidal Coomassie G-250 Staining for Proteins in Polyacrylamide Gels

Schnell und feinfühlig Kolloidale Coomassie G-250 Färbung für Proteine ​​in Polyacrylamidgelen

Coomassie Brilliant Blue (CBB) is a dye commonly used for the visualization of proteins separated by SDS-PAGE, offering a simple staining procedure and ...

Profiling of Methyltransferases and Other <em>S</em>-adenosyl-<sub>L</sub>-homocysteine-binding Proteins by Capture Compound Mass Spectrometry (CCMS)

Profiling of Methyltransferases and Other S-adenosyl-L-homocysteine-binding Proteins by Capture Compound Mass Spectrometry CCMS

Profiling von Methyltransferasen und andere<em> S</em>-Adenosyl-<sub> L</sub>-Homocystein-bindende Proteine ​​von Capture Compound Mass Spectrometry (CCMS)

There is a variety of approaches to reduce the complexity of the proteome on the basis of functional small molecule-protein interactions such as affinity ...

High-Throughput Measurement and Classification of Organic P in Environmental Samples

High-Throughput Measurement and Classification of Organic P in Umweltproben

Many types of organic phosphorus (P) molecules exist in environmental samples1.  Traditional P measurements do not detect these organic P compounds since ...

Synthesis of Nine-atom Deltahedral Zintl Ions of Germanium and their Functionalization with Organic Groups

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Although the first studies of Zintl ions date between the late 1890's and early 1930's they were not structurally characterized until many years later.1,2 ...

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Genotypisierung von Pflanzen und Tieren Proben ohne vorherige DNA-Aufreinigung

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Eine Stoff Screening Verfahren für die Glucocorticoid-Signalisierung mit einem Zebrafisch-Larve Luciferase-Reportersystems

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Sequence-specific Labeling of Nucleic Acids and Proteins with Methyltransferases and Cofactor Analogues

Sequenzspezifische Markierung von Nukleinsäuren und Proteinen mit Methyltransferasen und Cofaktor-Analoga

S-Adenosyl-l-methionine (AdoMet or SAM)-dependent methyltransferases (MTase) catalyze the transfer of the activated methyl group from AdoMet to specific ...

Visualization of miniSOG Tagged DNA Repair Proteins in Combination with Electron Spectroscopic Imaging (ESI)

Visualization of miniSOG Tagged DNA Repair Proteins in Combination with Electron Spectroscopic Imaging ESI

Visualisierung von miniSOG Tagged DNA Reparaturproteine ​​in Kombination mit Electron spektroskopischen Bildgebung (ESI)

The limits to optical resolution and the challenge of identifying specific protein populations in transmission electron microscopy have been obstacles in ...