Name: staining of proteins in gels with coomassie g-250 without organic solvent and acetic acid
Uploaded: 2009-08-14T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid at JoVE.com

<p class="jove_content"> Vorremmo ringraziare l&#39;assistenza tecnica di Ines Racke. </p>

<p class="jove_title"> Parte 1: Preparazione della soluzione colorante CBB </p><ol><li> 60-80 mg di CBB G-250 sono sciolti in 1 litro di acqua bidistillata mescolando per 2-4 ore. Infine, 3 ml di HCl concentrato viene aggiunto alla soluzione blu scuro con mescolando per un altro minuto e conservati al buio per un uso successivo. La soluzione può essere conservata per settimane fino a diversi mesi senza perdere la sua efficienza colorazione. </li><li> HCl concentrato deve essere maneggiato con la massima cura al solito utilizzati sotto una capp...

<ol>
	<li>Wondrak, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Process+for+fast+visualization+of+protein.">Process for fast visualization of protein.</a> <em style='font-style: italic'>US patent</em>. , (2001).</li><li>Wondrak, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solution+for+fast+visualization+of+protein.">Solution for fast visualization of protein.</a> <em style='font-style: italic'>US patent</em>. , (2001).</li></ol>

<ul><li> Le fasi di lavaggio sono fondamentali per la colorazione efficiente delle proteine. Una riduzione dei tempi di lavaggio di sotto di 2 minuti o ridotto volume di acqua (&lt;50 ml) può risultare in bande proteiche blu pallido, molto probabilmente a causa di una maggiore quantità di residui di SDS nel gel. </li><li> Se le proteine ​​stanno per essere analizzati mediante spettrometria di massa, le fasi di riscaldamento nel forno a microonde deve essere ignorata, il tempo per il lavaggio del gel estesa a circa 10 minuti in ogni passo ...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Coomassie Brilliant Blue G-250</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>AppliChem</td>
<td>A3480</td>
<td>any other CBB G-250 could be used as well</td>
</tr>
<tr>
<td>Concentrated HCl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

staining of proteins in gels with coomassie g-250 without organic solvent and acetic acid

<p class="jove_content">Nei protocolli classica colorazione delle proteine ​​con Coomassie Brilliant Blue (CBB), soluzioni con alto contenuto di solventi organici tossici e infiammabili (metanolo, etanolo o 2-propanolo) e acido acetico vengono utilizzati per la fissazione, colorazione e decolorazione delle proteine ​​in un gel dopo SDS -PAGE. Per accelerare la procedura, il riscaldamento della soluzione colorante nel forno a microonde per un breve periodo è usato frequentemente. Questo di solito provoca l&#39;evaporazione di metanolo tossici o pericolosi, Etanolo o 2-propanolo e un forte odore di acido acetico in laboratorio, che dovrebbe essere evitato per motivi di sicurezza. In un protocollo originariamente pubblicato in due domande di brevetto da EM Wondrak (US2001046709 (A1), US6319720 (B1)), una composizione alternativa della soluzione di colorazione è descritta in cui nessun solvente organico o acido è usato. La CBB è disciolto in acqua bidistillata (60-80mg di CBB G-250 per litro) e 35 mM HCl è aggiunto come l&#39;unico altro composto nella soluzione colorante. Il staning CBB del gel è fatto dopo SDS-PAGE e completa il lavaggio del gel in acqua bidistillata. Riscaldando il gel durante il lavaggio e la colorazione fasi, il processo può essere completato più velocemente e senza compunds tossici o pericolosi stanno evaporando. La colorazione delle proteine ​​si verifica già entro 1 minuto dopo il riscaldamento il gel in soluzione colorante ed è completamente sviluppato dopo 15-30 minuti con uno sfondo blu che è leggermente decolorato completamente dal lavaggio prolungato del gel colorato in acqua bidistillata, senza alterare la proteina macchiata bande.</p>

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Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

<p class="jove_content">Un protocollo corto per la colorazione delle proteine ​​con Coomassie Brilliant Blue (CBB) G-250 in gel di poliacrilammide è descritto senza l&#39;utilizzo di solventi organici o acido acetico come nelle procedure di colorazione classica con CBB.</p>

La colorazione delle proteine ​​in gel con Coomassie G-250, senza solventi organici acido acetico e

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

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