Name: staining of proteins in gels with coomassie g-250 without organic solvent and acetic acid
Uploaded: 2009-08-14T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid at JoVE.com

<p class="jove_content"> Gostaríamos de agradecer a assistência técnica da Ines Racke. </p>

<p class="jove_title"> Parte 1: Preparação da solução de coloração CBB </p><ol><li> 60-80 mg de CBB G-250 são dissolvidos em 1 litro de água bidestilada pela agitação por 2-4 horas. Finalmente, 3 ml de HCl concentrado é adicionado à solução de azul escuro, com agitação por mais um minuto e armazenados no escuro para uso posterior. A solução pode ser armazenada por várias semanas até vários meses sem perder sua eficiência de coloração. </li><li> HCl concentrado deve ser tratado com o cuidado habitual und usada sob uma coi...

<ol>
	<li>Wondrak, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Process+for+fast+visualization+of+protein.">Process for fast visualization of protein.</a> <em style='font-style: italic'>US patent</em>. , (2001).</li><li>Wondrak, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solution+for+fast+visualization+of+protein.">Solution for fast visualization of protein.</a> <em style='font-style: italic'>US patent</em>. , (2001).</li></ol>

<ul><li> Os passos de lavagem são críticos para a coloração eficiente das proteínas. Um menor tempo de lavagem com menos de 2 min ou volume reduzido de água (&lt;50ml) pode resultar em pálida bandas de proteína azul, provavelmente devido a maior quantidade de SDS residuais no gel. </li><li> Se as proteínas vão ser analisados ​​por espectrometria de massa, os passos de aquecimento no forno de microondas deve ser ignorada, o tempo para a lavagem do gel estendido para cerca de 10 min em cada etapa eo tempo de coloração prorrogado a...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Coomassie Brilliant Blue G-250</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>AppliChem</td>
<td>A3480</td>
<td>any other CBB G-250 could be used as well</td>
</tr>
<tr>
<td>Concentrated HCl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

staining of proteins in gels with coomassie g-250 without organic solvent and acetic acid

<p class="jove_content">Em protocolos de proteína clássica coloração com Coomassie Brilliant Blue (CBB), soluções com alto teor de substâncias tóxicas e inflamáveis ​​solventes orgânicos (metanol, etanol ou 2-Propanol) e ácido acético são usados ​​para fixação, coloração e descoloração de proteínas em um gel após SDS -PAGE. Para acelerar o procedimento, o aquecimento da solução corante no forno de microondas por um tempo curto é freqüentemente usada. Isso geralmente resulta em evaporação do metanol tóxicos ou perigosos, etanol ou 2-Propanol e um forte cheiro de ácido acético no laboratório, que deve ser evitado devido a considerações de segurança. Em um protocolo publicado originalmente em dois pedidos de patente por EM Wondrak (US2001046709 (A1), US6319720 (B1)), uma composição alternativa de solução de coloração é descrito em que nenhum solvente orgânico ou ácido é usado. A CBB é dissolvido em água bidestilada (60-80mg de CBB G-250 por litro) e 35 mM HCl é adicionado como o único composto outras na solução corante. A CBB staning do gel é feito após a lavagem SDS-PAGE e completa do gel em água bidestilada. Pelo aquecimento do gel durante a lavagem e coloração etapas, o processo pode ser concluído mais rapidamente e não compunds tóxicos ou perigosos são evaporando. A coloração das proteínas ocorre já dentro de 1 minuto após o aquecimento do gel na coloração da solução e está totalmente desenvolvido após 15-30 min com um fundo levemente azul que é totalmente descorados por lavagem prolongada do gel corado em água bidestilada, sem afetar as proteínas coradas bandas.</p>

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Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

<p class="jove_content">Um protocolo curto para a coloração de proteínas com Coomassie Brilliant Blue (CBB) G-250 em gel de poliacrilamida é descrito sem o uso de solventes orgânicos ou em ácido acético como nos procedimentos de coloração clássica com CBB.</p>

Coloração de proteínas em géis com Coomassie G-250 sem ácido acético e Solventes Orgânicos

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Research

JoVE Journal

Biology

Staining Proteins in Gels

Coloração Proteínas em Gel

Following separation by electrophoretic methods, proteins in a gel can be detected by several staining methods. This unit describes protocols for ...

Biologia

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Rápido e sensível Colloidal Coomassie G-250 coloração para proteínas em gel de poliacrilamida

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Profiling of Methyltransferases and Other S-adenosyl-L-homocysteine-binding Proteins by Capture Compound Mass Spectrometry CCMS

Perfil de metiltransferases e Outros<em> S</em>-Adenosil-<sub> L</sub> Homocisteína-Proteínas de Ligação de captura por Espectrometria de Massa Compound (CCMS)

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