Name: staining of proteins in gels with coomassie g-250 without organic solvent and acetic acid
Uploaded: 2009-08-14T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid at JoVE.com

<p class="jove_content"> Vi vill tacka för tekniskt bistånd från Ines Racke. </p>

<p class="jove_title"> Del 1: Beredning av CBB färglösning </p><ol><li> 60-80 mg CBB G-250 löses upp i 1 liter bidistilled vatten under omrörning i 2-4 timmar. Slutligen är 3 ml koncentrerad HCl tillsätts den mörkblå lösning med omrörning i ytterligare en minut och förvaras mörkt för senare användning. Lösningen kan lagras i veckor upp till flera månader utan att förlora sin färgning effektivitet. </li><li> Koncentrerad HCl bör hanteras med den vanliga vården und används under ett dragskåp. Den slutliga lösningen kommer a...

<ol>
	<li>Wondrak, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Process+for+fast+visualization+of+protein.">Process for fast visualization of protein.</a> <em style='font-style: italic'>US patent</em>. , (2001).</li><li>Wondrak, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solution+for+fast+visualization+of+protein.">Solution for fast visualization of protein.</a> <em style='font-style: italic'>US patent</em>. , (2001).</li></ol>

<ul><li> Tvätten steg är avgörande för en effektiv färgning av proteinerna. En minskad tvättid under 2 minuter eller minskad mängd vatten (&lt;50 ml) kan resultera i ljusblått protein band, sannolikt på grund av större mängder kvarvarande SDS i gelen. </li><li> Om de proteiner kommer att analyseras med masspektrometri, ska värmen steg i mikrovågsugn ska hoppas över, är det dags för tvätt av gelen förlängas till ca 10 min i varje steg och färgningen tiden förlängs till bandet intensiteten tillräckligt stark . Värme gelen ...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Coomassie Brilliant Blue G-250</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>AppliChem</td>
<td>A3480</td>
<td>any other CBB G-250 could be used as well</td>
</tr>
<tr>
<td>Concentrated HCl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

staining of proteins in gels with coomassie g-250 without organic solvent and acetic acid

<p class="jove_content">I klassisk protokoll protein färgning med Coomassie Brilliant Blue (CBB), lösningar med höga halter av giftiga och brandfarliga organiska lösningsmedel (metanol, etanol eller 2-propanol) och ättiksyra används för fixering, färgning och avfärgning av proteiner i en gel efter SDS -PAGE. För att påskynda förfarandet, värme färglösningen i mikrovågsugn en kort tid används ofta. Detta resulterar vanligen i avdunstning av giftiga eller farliga metanol, etanol eller 2-propanol och en stark lukt av ättiksyra i labbet som bör undvikas av säkerhetsskäl. I ett protokoll publicerades ursprungligen i två patentansökningar av EM Wondrak (US2001046709 (A1), US6319720 (B1)), är ett alternativ sammansättning färglösningen beskrivs där inga organiska lösningsmedel eller syra används. Den CBB löses upp i bidistilled vatten (60-80mg av CBB G-250 per liter) och 35 mM HCl läggs till som den enda förening i färglösningen. Den CBB staning av gelen görs efter SDS-PAGE och grundlig tvättning av gel i bidistilled vatten. Genom uppvärmning av gelen under tvätt och färgning steg kan processen vara klar snabbare och inga giftiga eller farliga föreningar som avdunstar. Den färgning av proteinerna sker redan inom 1 minut efter uppvärmning gelen i färglösningen och är fullt utvecklad efter 15-30 minuter med en lätt blå bakgrund som destained helt av långvarig tvätt av färgade gel i bidistilled vatten, utan att påverka färgade proteinet band.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid at JoVE.com

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

<p class="jove_content">En kort protokoll för protein färgning med Coomassie Brilliant Blue (CBB) G-250 i polyakrylamidgeler beskrivs utan att använda organiska lösningsmedel eller ättiksyra som i den klassiska färgning förfaranden med CBB.</p>

Färgning av proteinerna i geler med Coomassie G-250 utan organiska lösningsmedel och ättiksyra

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Research

JoVE Journal

Biology

Staining Proteins in Gels

Infärgning Proteiner i Geler

Following separation by electrophoretic methods, proteins in a gel can be detected by several staining methods. This unit describes protocols for ...

Fast and Sensitive Colloidal Coomassie G-250 Staining for Proteins in Polyacrylamide Gels

Snabb och känslig Kolloidal Coomassie G-250 Färgning för proteiner i polyakrylamidgeler

Coomassie Brilliant Blue (CBB) is a dye commonly used for the visualization of proteins separated by SDS-PAGE, offering a simple staining procedure and ...

Profiling of Methyltransferases and Other <em>S</em>-adenosyl-<sub>L</sub>-homocysteine-binding Proteins by Capture Compound Mass Spectrometry (CCMS)

Profiling of Methyltransferases and Other S-adenosyl-L-homocysteine-binding Proteins by Capture Compound Mass Spectrometry CCMS

Profilering av metyltransferaser och andra<em> S</em>-Adenosyl-<sub> L</sub>-Homocystein-bindande proteiner av Capture Compound masspektrometri (CCMS)

There is a variety of approaches to reduce the complexity of the proteome on the basis of functional small molecule-protein interactions such as affinity ...

High-Throughput Measurement and Classification of Organic P in Environmental Samples

Hög genomströmning Mätning och klassificering av organiska P i miljöprover

Many types of organic phosphorus (P) molecules exist in environmental samples1.  Traditional P measurements do not detect these organic P compounds since ...

Synthesis of Nine-atom Deltahedral Zintl Ions of Germanium and their Functionalization with Organic Groups

Syntes av nio atom Deltahedral Zintl Joner av germanium och deras funktionalisering med organiska grupper

Although the first studies of Zintl ions date between the late 1890's and early 1930's they were not structurally characterized until many years later.1,2 ...

Genotyping of Plant and Animal Samples without Prior DNA Purification

Genotypning av vegetabiliskt och animaliskt prover utan Prior DNA Rening

The Direct PCR approach facilitates PCR amplification directly from small amounts of unpurified samples, and is demonstrated here for several plant and ...

Analyzing and Building Nucleic Acid Structures with 3DNA

Analysera och bygga nukleinsyrastrukturer med 3DNA

The 3DNA software package is a popular and versatile bioinformatics tool with capabilities to analyze, construct, and visualize three-dimensional nucleic ...

A Chemical Screening Procedure for Glucocorticoid Signaling with a Zebrafish Larva Luciferase Reporter System

En kemikaliescreening för Glukokortikoid Signa med en Zebrafish Larva luciferas Reporter System

Glucocorticoid stress hormones and their artificial derivatives are widely used drugs to treat inflammation, but long-term treatment with glucocorticoids ...

Sequence-specific Labeling of Nucleic Acids and Proteins with Methyltransferases and Cofactor Analogues

Sekvensspecifik Märkning av nukleinsyror och proteiner med metyltransferaser och kofaktor Analogues

S-Adenosyl-l-methionine (AdoMet or SAM)-dependent methyltransferases (MTase) catalyze the transfer of the activated methyl group from AdoMet to specific ...

Visualization of miniSOG Tagged DNA Repair Proteins in Combination with Electron Spectroscopic Imaging (ESI)

Visualization of miniSOG Tagged DNA Repair Proteins in Combination with Electron Spectroscopic Imaging ESI

Visualisering av miniSOG Märkta DNA Reparations Proteiner i kombination med Electron Spectroscopic Imaging (ESI)

The limits to optical resolution and the challenge of identifying specific protein populations in transmission electron microscopy have been obstacles in ...