Name: preparation of aplysia sensory-motor neuronal cell cultures
Uploaded: 2009-06-08T00:00:00
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Aplysia 뉴런의 culturing 관련된 실험실에서 작업이 목록에 NIH R01와 NIH에 의해 투자 R21MH077921 있습니다.

준비 (솔루션 구성을위한 프로토콜의 끝에있는 솔루션 섹션을 참조) <ol><li> 문화 요리를 준비합니다. 폴리 - L - 라이신 (나트륨 borate에서 만든)로 Mattek 유리 바닥 문화 요리 잘 코트 유리. 완전히 잘 유리를 커버하고&gt; 1 시간 (야간 왼쪽 수)에 남길만큼 추가합니다. 철저하게 폴리 - L - 라이신은 인공 바닷물에서 (ASW) 4-5 번 rinsing하여 제거합니다. 마지막 헹굼 제거한 후, 2 50% L15의 MLS (소금과 보충?...

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	<li>Kandel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+biology+of+memory+storage:+a+dialogue+between+genes+and+synapses.">The molecular biology of memory storage: a dialogue between genes and synapses.</a> Science. 294 (5544), 1030-1038 (2001).</li><li>Rayport, S. G., Schacher, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity+in+vitro:+cell+culture+of+identified+Aplysia+neurons+mediating+short-term+habituation+and+sensitization.">Synaptic plasticity in vitro: cell culture of identified Aplysia neurons mediating short-term habituation and sensitization.</a> J Neurosci. 6 (3), 759-763 (1986).</li><li>Goldberg, D. J., Schacher, S., Banker, G., Goslin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Culturing Nerve Cells. , 213-236 (1998).</li><li>Glanzman, D. L., Kandel, E. R., Schacher, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identified+target+motor+neuron+regulates+neurite+outgrowth+and+synapse+formation+of+aplysia+sensory+neurons+in+vitro.">Identified target motor neuron regulates neurite outgrowth and synapse formation of aplysia sensory neurons in vitro.</a> Neuron. 3 (4), 441-450 (1989).</li><li>Lyles, V., Zhao, Y., Martin, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synapse+formation+and+mRNA+localization+in+cultured+Aplysia+neurons.">Synapse formation and mRNA localization in cultured Aplysia neurons.</a> Neuron. 49 (3), 349-356 (2006).</li><li>Martin, K. C., Casadio, A., Zhu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synapse-specific,+long-term+facilitation+of+aplysia+sensory+to+motor+synapses:+a+function+for+local+protein+synthesis+in+memory+storage.">Synapse-specific, long-term facilitation of aplysia sensory to motor synapses: a function for local protein synthesis in memory storage.</a> Cell. 91 (7), 927-938 (1997).</li><li>Guan, Z., Giustetto, M., Lomvardas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+long-term-memory-related+synaptic+plasticity+involves+bidirectional+regulation+of+gene+expression+and+chromatin+structure.">Integration of long-term-memory-related synaptic plasticity involves bidirectional regulation of gene expression and chromatin structure.</a> Cell. 111 (4), 483-493 (2002).</li></ol>

그것은 스테레오 현미경을 통해 볼 개별 뉴런의 microdissection 및 조작과 관련된 미세 모터 기술의 개발과 관련된 이후 Aplysia 감각 모터 문화의 성공적인 준비는 다소 느린 학습 곡선이 있습니다. 우리의 경험에서는 모터 뉴런과 감각 뉴런을 쌍으로하는 방법에 대한 자세한 내용은 문화의 건강한 고립 감각 뉴런과 추가 1~3주를 얻는 연습의 약 1-3주 걸립니다. 그 동안 현미경이 culturing (임의의 ...

솔루션은 문화에 필요한 <ol><li> 0.35 M MgCl 2, 실온에서 보관 마취에 사용. </li><li> 폴리 - L - 라이신 솔루션, 시그마 : 0.1M 나트륨 Borate pH8.2로 0.5mg/ml 솔루션에서 만들어진 P - 1524, MW&gt; 300000. 잘하고 필터 소용돌이 필터 0.22 μm의를 통해 소독, 4C의 °에서 그것을 저장합니다. 동결 - 해동하지 마십시오. </li><li> L - 15 중간 분말 (Leibovitz) (시그마 : L4386)는 1리터를 만들기 위해 아래의 염분과 보충 <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tr><td> L - 15 분말 </td><td> 13.8g </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 15.4 g </td></tr><tr><td> D - 포도당 </td><td> 6.24 g </td></tr><tr><td> MgSO 4 7H 2 0 </td><td> 6.45g </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 350 MG </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> 170 MG </td></tr><tr><td> MgCl 2 6H 2 O </td><td> 5.49 g </td></tr><tr><td> CaCl 2 2 시간 2 O </td><td> 1.43g </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 3.53g </td></tr></table> ddH20 1 리터 추가합니다. 산도는 7.4-7.5에 대한 수 100X 펜 / Strep 솔루션 10ml를 추가하고, 0.22 m 필터를 통해 필터 소독해야합니다. 일개월 이상의 이상에 대한 4C0에 보관하십시오. </li><li> 테아제 소화 솔루션 : 1 % 테아제 IX (1unit/mg)는 L15에서 만든 (위의 같은 소금과 보충) 또는 ASW에 즉시 사용하기 전에, 0.22 m Millipore를 통해 필터 살균입니다. 5mls 두 동물 (신경이 완전히 테아제 용액에 잠겨 있는지 확인)에서 신경 충분해야합니다. 시그마들은 프로 테아제 IX 판매를 중단할 것이라고 보도했다. 대체 프로 테아제입니다 Dispase II (로체 응용 과학 카탈로그 # 04942078001). </li><li> 문화 매체. 사전 준비 문화 즉시, hemolymph의 10 ML의 나누어지는를 해동하고 20mls 배지를 만들기 위해 L15 10 MLS (위의 같은 소금과 보충)로 섞는다. L - 글루타민 200mM 200 μl를 추가, 잘 믹스와 문화를 준비하십시오. 때마다 문화가 만들어진 신선한 해당 매체가 준비되어야합니다. </li><li> 인공 해수는 인스턴트 오션 (수족관 시스템, 멘토, OH) 또는 다음과 같이 만들 수 있습니다 : 450 MM NaCl, 10 MM KCl, 30 MM MgCl 2 (6H 2 O), 20 MM MgSO 4, 10 MM CaCl 2 (2 시간 2 O), 7.4로 조정 산도 10 MM HEPES. </li></ol>

preparation of aplysia sensory-motor neuronal cell cultures

해양 연체 동물 Aplysia californica의 신경계는 약 20,000 뉴런으로 구성된, 비교적 간단합니다. 뉴런은 별개의 크기, 형태, 위치 및 pigmentations과 함께, 대형 (직경에 1 ㎜)과 식별되며, 세포 기관은 외부 동물의 체내 분산 오 이점의 신경에 노출됩니다. 이러한 속성은 동물 1 특정 동작을 기본 회로를 윤곽을 그리다하기 위해 조사를 허용합니다. 감각과 운동 뉴런 사이의 monosynaptic 연결 동물의 길 - 철수 반사의 중심 구성 요소, 동물이 사이펀의 촉각 자극에 대한 응답으로의 길을 철회하는 간단한 방어 반사합니다. 이 반사는 sensitization, 요법 이니, 그리고 고전적인 컨디셔닝을 포함하는 비 - 연관과 연관 학습의 형태를 겪습. 잘 특징 자극이 동물 2,3의 행동에 직접적으로 상호를 소성의 형태를 이끌어내는 어디 시냅스 소성의 연구에 특히 이익, 감각 모터 버렸네는 문화의 재구성 수 있습니다. 특히 세로토닌의 응용 프로그램은 시냅스, 응용 프로그램 프로토콜에 따라, (단기 촉진) 분 지속 강화, 시간 (중급 단기 촉진) 또는 일 (장기 촉진) 생산하고 있습니다. 대조적으로, 펩티드 송신기 FMRFamide의 응용 프로그램은 응용 프로그램 프로토콜에 따라 일 분 (장기 우울증)에서 지난 수 시냅스 약화이나 우울증을 생산하고 있습니다. 뉴런의 큰 크기는 표현 벡터, siRNAs 및 특정 신호 폭포와 분자를 대상으로하는 다른 화합물의 microinjection 함께 일 기간 동안 시냅스 강도의 반복 sharp 전극 기록을 허용함으로써 변경 사항을 기초 분자 및 세포 생물 학적 단계를 식별 시냅스 효능 인치 Aplysia 문화 시스템의 추가적인 장점은 뉴런 문화 4,5에서 버렸네 - 특이성을 보여주는 사실에서 비롯됩니다. 따라서, 감각 뉴런은 스스로 (autapses) 또는 다른 감각 뉴런과 시냅스를 형성하지 않으며 그들은 문화가 아닌 대상 확인된 모터 뉴런과 시냅스를 형성 않습니다. varicosities, 감각과 운동 뉴런 사이의 시냅스 접촉 사이트, 대상 모터 뉴런과 버렸네 형성은 (뿐만 아니라 시냅스 형태의 변화) 빛의 미세한 수준에서 공부 할 수 있도록 충분한 (직경 2-7 미크론) 큽니다. 이 비디오에서는, 우리는 그들의 신경, 신경의 테아제 소화, microdissection에 의해 결합 조직의 제거, 감각 및 운동 신경 및 제거 모두의 신분을 해부, anesthetizing 성인 및 청소년 Aplysia 포함한 감각 - 운동 신경 세포의 문화를, 준비의 각 단계를 보여주는 microdissection 각 세포 유형의 모터 신경 세포, 감각 neurite의 감각 신경 세포 및 조작의 이외의 도금은 교양 모터 신경 세포와 접촉을 형성합니다.

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Preparation of Aplysia Sensory-motor Neuronal Cell Cultures

의 주요 문화<em&gt; Aplysia</em&gt; 감각 - 모터 뉴런은 버렸네 형성하고 시냅스 소성을 연구를위한 모델 준비를 제공합니다<em&gt; 체외에서</em&gt;. 이 비디오에서 감각 및 운동 신경의 식별 및 microdissection을 보여<em&gt; Aplysia</em&gt; 신경뿐만 아니라 문화의 감각 - 모터 뉴런을 설정하고 관리하기위한 방법.

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