Name: preparation of aplysia sensory-motor neuronal cell cultures
Uploaded: 2009-06-08T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Aplysia Sensory-motor Neuronal Cell Cultures at JoVE.com

Kültür Aplysia nöron içeren laboratuar İş listesi NIH R01 ve NIH R21MH077921 tarafından finanse edilmektedir.

Hazırlama (bkz. çözümleri bölümünde çözümler kompozisyon için protokol sonunda) <ol><li> Kültür yemekleri hazırlayın. Mattek ile poli-L-lisin (sodyum borat yapılan) cam alt kültür çanak Kat cam. Tamamen cam kapak ve&gt; 1hr (gece sol olabilir) terk etmek yeterli ekleyin. Iyice poli-L-lisin, yapay deniz suyu (ASW) 4-5 kez durulayarak çıkarın. Çıkardıktan sonra, son durulama, 2 ml (tuzları ile desteklenmiş ve 2mm son bir konsantrasyonda L-glutamin içeren)% 50 L15 /% 50 hemolimf ekleyin. Bu k?...

<ol>
	<li>Kandel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+biology+of+memory+storage:+a+dialogue+between+genes+and+synapses.">The molecular biology of memory storage: a dialogue between genes and synapses.</a> Science. 294 (5544), 1030-1038 (2001).</li><li>Rayport, S. G., Schacher, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity+in+vitro:+cell+culture+of+identified+Aplysia+neurons+mediating+short-term+habituation+and+sensitization.">Synaptic plasticity in vitro: cell culture of identified Aplysia neurons mediating short-term habituation and sensitization.</a> J Neurosci. 6 (3), 759-763 (1986).</li><li>Goldberg, D. J., Schacher, S., Banker, G., Goslin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Culturing Nerve Cells. , 213-236 (1998).</li><li>Glanzman, D. L., Kandel, E. R., Schacher, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identified+target+motor+neuron+regulates+neurite+outgrowth+and+synapse+formation+of+aplysia+sensory+neurons+in+vitro.">Identified target motor neuron regulates neurite outgrowth and synapse formation of aplysia sensory neurons in vitro.</a> Neuron. 3 (4), 441-450 (1989).</li><li>Lyles, V., Zhao, Y., Martin, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synapse+formation+and+mRNA+localization+in+cultured+Aplysia+neurons.">Synapse formation and mRNA localization in cultured Aplysia neurons.</a> Neuron. 49 (3), 349-356 (2006).</li><li>Martin, K. C., Casadio, A., Zhu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synapse-specific,+long-term+facilitation+of+aplysia+sensory+to+motor+synapses:+a+function+for+local+protein+synthesis+in+memory+storage.">Synapse-specific, long-term facilitation of aplysia sensory to motor synapses: a function for local protein synthesis in memory storage.</a> Cell. 91 (7), 927-938 (1997).</li><li>Guan, Z., Giustetto, M., Lomvardas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+long-term-memory-related+synaptic+plasticity+involves+bidirectional+regulation+of+gene+expression+and+chromatin+structure.">Integration of long-term-memory-related synaptic plasticity involves bidirectional regulation of gene expression and chromatin structure.</a> Cell. 111 (4), 483-493 (2002).</li></ol>

Stereo-mikroskop ile bakıldığında bireysel nöronlar mikrodiseksiyon ve manipülasyon ile ilişkili ince motor becerileri geliştirme içerdiğinden Aplysia duyusal-motor kültürlerin başarılı bir şekilde hazırlanması, biraz daha yavaş bir öğrenme eğrisi vardır. Bizim tecrübelerimize göre, duyusal nöron motor nöron çifti öğrenmek için sağlıklı kültür izole duyu nöronları ve ek olarak 1-3 hafta elde etmek için uygulama yaklaşık 1-3 hafta sürer. Biz rutin olarak bu sürece mikro...

Çözümler kültürü için gerekli <ol><li> 0.35 M MgCl 2, anestezi için kullanılan oda sıcaklığında saklanır. </li><li> Poli-L-lisin çözüm, Sigma: 0.1M Sodyum Borat pH8.2 için 0.5mg/ml çözüm P-1524, MW&gt; 300.000. Bir 0.22 mikron filtre ve filtre Vortex yoluyla sterilize, 4C ° saklayın. Donma-çözülme etmeyin. </li><li> L-15 Orta tozu (Leibovitz) (Sigma: L4386) 1 litre yapmak için aşağıdaki gibi tuzları ile desteklenmiş <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tr><td> L-15 toz </td><td> 13.8g </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 15.4 g </td></tr><tr><td> D-glikoz </td><td> 6,24 g </td></tr><tr><td> MgSO 4 2 0 7H </td><td> 6.45g </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 350 mg </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> 170 mg </td></tr><tr><td> MgCl 2 6H 2 O </td><td> 5.49 g </td></tr><tr><td> CaCl 2 2H 2 O </td><td> 1.43g </td></tr><tr><td> Hepes </td><td> 3.53g </td></tr></table> DdH20 için 1 litre ekleyin. PH 7,4-7,5 hakkında 100X Pen / Strep çözüm 10ml ekleyin ve 0,22 m filtre ile filtre sterilize edilmelidir. 1 aydan daha uzun süre saklayın 4C0. </li><li> Proteaz sindirim çözüm:% 1 Proteaz IX (1unit/mg) L15 (yukarıdaki gibi tuzları ile desteklenmiş) ya da ASW kullanımdan hemen önce 0.22 m Millipore aracılığıyla filtre ile sterilize edilmiş. 5mls iki hayvan (ganglia tamamen proteaz çözüm dalmış emin olun) ganglionlar için yeterli olacaktır. Sigma Proteaz IX satan durdurma olacağını bildirdi. Bir yerine proteaz: Dispase II (Roche Uygulamalı Bilimler katalog # 04942078001). </li><li> Kültür ortamı. Hemen hemolimf 10 ml lik bir kısım hazırlanıyor kültürler önce Çözülme ve 20mls kültür ortamı yapmak için L15, 10 ml (yukarıdaki gibi tuzları ile desteklenmiş) ile karıştırın. 200mm L-Glutamin 200 ul ekleyin, iyice karıştırın ve kültürlerin hazırlanması için kullanılacak. Bu ortam, her zaman kültürleri yapılır taze hazırlanmalıdır. </li><li> Yapay Deniz suyu Anında Ocean (Akvaryum Sistemleri, Mentor, OH) ya da şu şekilde yapılabilir: 450 mM NaCl, 10 mM KCl, 30 mM MgCl 2 (6H 2 O), 20 mM MgSO 4, 10 mM CaCl 2 (2H 2 Ç), 7.4 &#39;e ayarlanmış 10 mM pH ile Hepes. </li></ol>

preparation of aplysia sensory-motor neuronal cell cultures

Deniz yumuşakça Aplysia californica sinir sistemi, yaklaşık 20.000 nöronların oluşan, oldukça basittir . Nöronlar, farklı boyutları, şekilleri, konumları ve pigmentations, büyük (çapı 1 mm kadar) ve tanımlanabilir ve hücre organları dışarıdan hayvanın vücut boyunca dağıtılan beş eşleşmiş ganglionlarda maruz kalmaktadır. Bu özellikler araştırmacılar hayvan 1 belirli davranışların altında yatan devreleri tanımlamak için izin verdiler. Duyu ve motor nöronlar arasındaki monosinaptik bağlantı, hayvan solungaç çekilme refleks merkezi bir bileşeni, hayvan sifon dokunsal uyarılara yanıt solungaç çekilmesi basit bir savunma refleksi. Bu refleks hassaslaşması, alışkanlık ve klasik koşullanma da dahil olmak üzere non-ilişkisel ve ilişkisel öğrenme biçimleri, uğrar. Sinaptik plastisite çalışmada özellikle yarar, iyi karakterize uyaranlara 2,3 hayvan davranışlarını doğrudan ilişkilendiren plastisite biçimleri ortaya duyusal-motor sinaps, kültür sulandırılmış olabilir. Özellikle, serotonin uygulama, uygulama protokolü bağlı olarak, (kısa vadeli kolaylaştırma) dakika süren bir sinaptik güçlendirilmesi, saat (orta vadeli kolaylaştırma) veya gün (uzun vadeli kolaylaştırma) üretir. Buna karşılık, peptid verici FMRFamide uygulama uygulama protokolü bağlı olarak, (uzun vadeli depresyonu) gün dakika sürebilir, sinaptik zayıflaması veya depresyon üretir. Büyük boy nöronların sinaptik gücü ifade vektörler, siRNA&#39;lar ve diğer bileşikler, özel sinyalizasyon kaskadlar ve moleküller hedef mikroenjeksiyon ile birlikte gün süre tekrarlanan keskin elektrot kayıt için izin verir ve böylece, değişikliklerin altında yatan moleküler ve hücre biyolojik adımları belirlemek sinaptik etkinliği. Aplysia kültür sistemi ek bir avantajı, nöronlar kültür 4,5 sinaps-özgüllük göstermektedir ki gerçeğinden geliyor . Böylece, duyusal nöronlar edilebilir (autapses) ya da diğer duyusal nöronlar ile sinaps formu değil, ne de kültürü olmayan hedef tespit edilen motor nöronlar ile sinaps formu. Varisler, duyu ve motor nöronlar arasındaki sinaptik temas siteleri, ışık mikroskobik düzeyde incelenmesi gereken hedef motor nöronlar ile sinaps oluşumu (yanı sıra, sinaptik morfoloji değişiklikleri) izin için yeterli (çapı 2-7 mikron) büyük. Bu video, anestezi yetişkin ve çocuk Aplysia dahil olmak üzere, duyusal-motor nöron kültürleri, hazırlama, her adımı gösteren ganglionlar, gangliyon proteaz sindirim, bağ dokusu mikrodiseksiyon kaldırılması, duyu ve motor nöronlar ve kaldırma belirlenmesi diseksiyon mikrodiseksiyon ile her bir hücre tipi, motor nöron, duyusal neurite duyusal nöron ve manipülasyon ek kaplama kültürlü motor nöron iletişim formu.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Aplysia Sensory-motor Neuronal Cell Cultures at JoVE.com

Preparation of Aplysia Sensory-motor Neuronal Cell Cultures

Primer kültürler<em&gt; Aplysia</em&gt; Duyusal-motor nöronlar sinaps oluşumu ve sinaptik plastisite eğitim için bir model hazırlama<em&gt; In vitro</em&gt;. Bu video duyu ve motor nöronlar tanımlanması ve mikrodiseksiyon gösterir<em&gt; Aplysia</em&gt; Ganglionlar yanı sıra, duyusal-motor nöronların kültür kurmak ve korumak için yöntemler.

Hazırlanması Aplysia Duyusal-motor Nöronal Hücre Kültürleri

The nervous system of the marine mollusk Aplysia californica is relatively simple, consisting of approximately 20,000 neurons.  The neurons are large (up ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of Aplysia Sensory-motor Neuronal Cell Cultures

ES Cell-derived Neuroepithelial Cell Cultures

ES Hücre türetilen nöroepitelyal Hücre Kültürleri

ES cells have the potential to differentiate into cells from all germ layers, which makes them an attractive tool for the development of new therapies. In ...

Primary Neuronal Cultures from the Brains of Late Stage Drosophila Pupae

Geç Stage Drosophila pupa Brain İlköğretim Nöronal Kültürler

In this video, we demonstrate the preparation of primary neuronal cultures from the brains of late stage Drosophila pupae. The procedure begins with the ...

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Nöronal Kültürler Midgastrula Sahne Drosophila Embriyolar hazırlanması

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

Preparation of Dissociated Mouse Cortical Neuron Cultures

Grubuyla Fare Kortikal Nöron Kültürler hazırlanması

This video will guide you through the process for generating cortical neuronal cultures from late embryo and early postnatal mouse brain. These cultures ...

Neuronal Cell Cultures from Aplysia for High-Resolution Imaging of Growth Cones

Büyüme Konileri Yüksek Çözünürlüklü Görüntüleme için Aplysia Nöronal Hücre Kültürleri

Neuronal growth cones are the highly motile structures at the tip of axons that can detect guidance cues in the environment and transduce this information ...

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell (EPI-NCSC) Cultures

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell EPI-NCSC Cultures

Fare Epidermal Sinir Crest Kök Hücre (EPI-NCSC) Kültürler

EPI-NCSC are remnants of the embryonic neural crest in an adult location, the bulge of hair follicles. They are multipotent stem cells that have the ...

Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures

2-dGuo Boyalı Thymus Organ Kültürleri hazırlanması

In the thymus, interactions between developing T-cell precursors and stromal cells that include cortical and medullary epithelial cells are known to play ...

Preparation and Maintenance of Dorsal Root Ganglia Neurons in Compartmented Cultures

Kompartman Kültürleri Dorsal Kök Ganglia Nöronlar hazırlanması ve Bakım

Neurons extend axonal processes that are far removed from the cell body to innervate target tissues, where target-derived growth factors are required for ...

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

Hazırlık Elektroporasyon murin Kemik İliği itibaren İlköğretim Hematopoetik Hücre Kültürleri

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Preparation of Rat Brain Aggregate Cultures for Neuron and Glia Development Studies

Nöron ve Glia Geliştirme Çalışmaları Rat Beyin Agrega Kültürler hazırlanması

An in vitro system that recapitulates the development and differentiation of progenitors into mature neurons and glia in the central nervous system (CNS) ...