Name: purification of mitochondria from yeast cells
Uploaded: 2009-08-24T16:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Purification of Mitochondria from Yeast Cells at JoVE.com

Este trabajo fue apoyado por becas de los CIHR y NSERC de Canadá. VIT es un investigador de Nueva CIHR y Concordia Cátedra de Investigación de la Universidad de genómica, biología celular y el envejecimiento.

Materiales y métodos Cepas de levadura y las condiciones de crecimiento La cepa de tipo salvaje BY4742 (MATα his3Δ1 leu2Δ0 lys2Δ0 ura3Δ0) fue cultivada en medio rico en YEPD (1% extracto de levadura, 2% de peptona, 2% de glucosa). Las células fueron cultivadas a 30 ° C con rotación agitación a 200 rpm en frascos de Erlenmeyer en un &quot;frasco de volumen / volumen medio de&quot; proporción de 5:1. El aislamiento de la fr...

<ol>
	<li>Voet, D., Voet, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemistry.">Biochemistry.</a> , (2004).</li><li>Suen, D. -. F., Norris, K. L., Youle, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dynamics+and+apoptosis.">Mitochondrial dynamics and apoptosis.</a> Genes Dev. 22, 1577-1590 (2008).</li><li>Cheng, W. C., Berman, S. B., Ivanovska, I., Jonas, E. A., Lee, S. J., Chen, Y., Kaczmarek, L. K., Pineda, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Hardwick, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+factors+with+dual+roles+in+death+and+survival.">Mitochondrial factors with dual roles in death and survival.</a> Oncogene. 25, 4697-4705 (2006).</li><li>Detmer, S. A., Chan, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functions+and+dysfunctions+of+mitochondrial+dynamics.">Functions and dysfunctions of mitochondrial dynamics.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 8, 870-879 (2007).</li><li>McBride, H. M., Neuspiel, M., Wasiak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria:+more+than+just+a+powerhouse.">Mitochondria: more than just a powerhouse.</a> Curr. Biol. 16, R551-R560 (2006).</li><li>Balaban, R. S., Nemoto, S., Finkel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria,+oxidants,+and+aging.">Mitochondria, oxidants, and aging.</a> Cell. 120, 483-495 (2005).</li></ol>

Este método permite el aislamiento de alto rendimiento de puro mitocondrias de células de levadura. Las mitocondrias purificadas por este método son esencialmente libres de contaminación por otros orgánulos y mantener su integridad estructural y funcional después de su purificación. El método descrito mitocondrias rendimientos que son adecuados para células libres de la reconstitución de los procesos esenciales mitocondrial. Estas mitocondrias de alta pureza también se puede utilizar para el análisis de la e...

purification of mitochondria from yeast cells

Las mitocondrias son el sitio principal de producción de ATP durante el metabolismo aeróbico en eucariotas no fotosintéticos células<sup&gt; 1</sup&gt;. Estos orgánulos complejos también juegan un papel esencial en la muerte celular por apoptosis<sup&gt; 2</sup&gt;, La supervivencia celular<sup&gt; 3</sup&gt;, Desarrollo de los mamíferos<sup&gt; 4</sup&gt;, El desarrollo neuronal y la función<sup&gt; 4</sup&gt;, La señalización intracelular<sup&gt; 5</sup&gt;, Y la longevidad de la regulación<sup&gt; 6</sup&gt;. Nuestra comprensión de estos complejos procesos biológicos controlados por las mitocondrias se basa en métodos robustos para la evaluación de su morfología, la proteína y la composición de los lípidos, la integridad de su ADN, y sus numerosas funciones vitales. La levadura en ciernes<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt;, Una genéticamente y bioquímicamente eucariotas unicelulares manipulable con el genoma y el proteoma anotada bien definido, es un valioso modelo para el estudio de los mecanismos moleculares y celulares subyacentes a las funciones biológicas esenciales de las mitocondrias. Para este tipo de estudios, es fundamental contar con las mitocondrias de alta pureza. Aquí se presenta una descripción detallada de un método rápido y eficaz para la purificación de la mitocondria de levadura. Este método permite el aislamiento de alta pureza, las mitocondrias, que son esencialmente libres de contaminación por otros orgánulos y mantener su integridad estructural y funcional después de su purificación. Las mitocondrias purificadas por este método son adecuados para la libre de células de la reconstitución de los procesos esenciales de la mitocondria y se puede utilizar para el análisis de la estructura mitocondrial y funciones, y proteoma mitocondrial lipidome, y el ADN mitocondrial.

Watch this Scientific Journal Video about Purification of Mitochondria from Yeast Cells at JoVE.com

Purification of Mitochondria from Yeast Cells

Se describe un método rápido y eficaz para la purificación de las mitocondrias de la levadura<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt;. Este método permite el aislamiento de alto rendimiento de puro mitocondrias, que son esencialmente libres de contaminación por otros orgánulos y mantener su integridad estructural y funcional después de su purificación.

Purificación de las mitocondrias de las células de levadura

Mitochondria are the main site of ATP production during aerobic metabolism in eukaryotic non-photosynthetic cells1. These complex organelles also play ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification

Aislamiento de células T CD4 + de los ganglios linfáticos del ratón utilizando Miltenyi Purificación MACS

Isolation of cells from the primary source is a necessary step in many more complex protocols. Miltenyi offers kits to isolate cells from several ...

Investigación

Biología

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

Tinción de las proteínas en geles con Coomassie G-250, sin ácido disolvente orgánico y el acético

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Purification of Progenitors from Skeletal Muscle

Purificación de los progenitores del músculo esquelético

Skeletal muscle contains multiple progenitor populations of distinct embryonic origins and developmental potential. Myogenic progenitors, usually residing ...

Chromatographic Purification of Highly Active Yeast Ribosomes

Purificación por cromatografía de ribosomas de levadura de gran actividad

Eukaryotic ribosomes are much more labile as compared to their eubacterial and archael counterparts, thus posing a significant challenge to researchers.  ...

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Imagen confocal de Soltero mitocondriales superóxido Parpadea en corazón intacto o<em&gt; En Vivo</em

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial ...

Isolation of mRNAs Associated with Yeast Mitochondria to Study Mechanisms of Localized Translation

Aislamiento de ARNm asociados a la mitocondria de levadura para estudiar los mecanismos de traducción localizada

Most of mitochondrial proteins are encoded in the nucleus and need to be imported into the organelle. Import may occur while the protein is synthesized ...

Rapid Isolation And Purification Of Mitochondria For Transplantation By Tissue Dissociation And Differential Filtration

Aislamiento rápido y purificación de mitocondrias para el trasplante por disociación de tejidos y filtración diferencial

Previously described mitochondrial isolation methods using differential centrifugation and/or Ficoll gradient centrifugation require 60 to 100 min to ...

Isolation and Functional Analysis of Mitochondria from Cultured Cells and Mouse Tissue

Aislamiento y análisis funcional de las mitocondrias de las células cultivadas y ratón de Tejidos

Comparison between two or more distinct groups, such as healthy vs. disease, is necessary to determine cellular status. Mitochondria are at the nexus of ...

Genome-wide Purification of Extrachromosomal Circular DNA from Eukaryotic Cells

La purificación de todo el genoma de ADN circular Extracromosómica a partir de células eucariotas

Extrachromosomal circular DNAs (eccDNAs) are common genetic elements in Saccharomyces cerevisiae and are reported in other eukaryotes as well. EccDNAs ...

MitoCeption: Transferring Isolated Human MSC Mitochondria to Glioblastoma Stem Cells

MitoCeption: Transferencia hermoso humano MSC mitocondrias de las células madre de glioblastoma

Mitochondria play a central role for cell metabolism, energy production and control of apoptosis. Inadequate mitochondrial function has been found ...