Name: an in vitro fluoroblok tumor invasion assay
Uploaded: 2009-07-20T13:00:00
Duration: 7 min 53 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about An In vitro FluoroBlok Tumor Invasion Assay at JoVE.com

بعد وضع العلامات والقياس باستخدام دينار بحريني صبغ نيون calcein AM وصفت خلايا الكميات بعد أن يكونوا قد غزا من خلال مصفوفة Matrigel دينار بحريني ، ومرت عبر الغشاء FluoroBlok دينار بحريني. ونتيجة لذلك ، يمكن الحصول على القياس فقط نقطة النهاية لغزو الخلايا. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنمو الخلايا لالتقاء ~ 80 ٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد وترطيب نظام إدراج. <ol style="list-style-type:lower-alpha;;text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الحزمة من تخزين -20 درجة مئوية وتسمح له أن يأتي إلى درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح الحزمة احباط وإضافة 500 ميكرولتر دافئة (37 درجة مئوية) وسائل الإعلام إلى داخل الآبار إدراج. تسمح لوحة لترطيب لمدة 2 ساعة على 37 درجة مئوية ، و 5 ٪ CO 2. ملاحظة : إنه ليس من الضروري ترطيب وغير المصقول دينار بحريني فالكون FluoroBlok 24 - Multiwell إدراج النظام الذي سيتم استخدامه في خلية مراقبة الهجرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الجفاف ، وإزالة بعناية المتوسطة من الآبار من دون إزعاج إدراج طبقة دينار بحريني Matrigel مصفوفة على الغشاء. هذا النظام هو الآن جاهز للاستخدام. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد تعليق خلية trypsinizing monolayers الخلية وإعادة التعليق في مصل الخلايا خالية DMEM في الخلايا 5 × 4 10 / مل. ملاحظة : إذا كنت تستخدم نوع من الخلايا المختلفة تحتاج إلى تحديد كثافة بذر الأمثل. لتحديد كثافة الغرس الأمثل لنوع من الخلايا الخاصة بك على سطح النمو التي يسهل اختراقها ، واستخدام مجموعة من كثافة بذر (خلية / سم 2) التي بين قوسين كثافة البذر المستخدمة على أسطح غير مسامية (أي القوارير ، وأطباق وصحون). على سبيل المثال ، إذا كنت البذور في الوقت الراهن 2.5 × 5 10 الخلايا / سم 2 ، والبذور بتركيزات مختلفة بين الخلية 5 × 10 4 و 5 × 10 5 خلية / سم 2 لتحديد الأمثل كثافة بذر الأولي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 500 ميكرولتر من التعليق الخلية (2.5 × 10 4 خلايا) إلى غرف القمي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 750 ميكرولتر من جاذب كيميائي (5 ٪ في DMEM FBS) في كل دائرة من الدوائر القاعدية ، وذلك باستخدام عينة من أجل الوصول إلى الموانئ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان للورم BioCoat دينار بحريني نظام الغزو وغير المصقول دينار بحريني فالكون FluoroBlok 24 - Multiwell إدراج خماسي لل20-22 ساعة عند 37 درجة مئوية ، 5 ٪ CO 2 الغلاف الجوي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التالية الحضانة ، وإزالة بعناية المتوسطة من غرف القمي. ويمكن تحقيق ذلك من خلال محتويات عبها في حاوية النفايات. لا تلمس السطح السفلي من نظام إدراج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل إدراج النظام في لوحة 24 ثانية تحتوي على 500 جيدا ميكرولتر / بئر 4 ميكروغرام / مل في HBSS Calcein AM. احتضان لمدة 1 ساعة عند 37 درجة مئوية ، 5 ٪ CO 2. لم تتم إزالة الحل AM Calcein من مجلس النواب قبل قراءة مضان لأنها صبغة nonfluorescent الحيوية التي يتم تحويلها إلى calcein الفلورية الخضراء esterases عصاري خلوي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قراءة مضان من الخلايا في غزت موجات 494/517 نانومتر (م ت / م) على القارئ قراءة لوحة أسفل الفلورسنت. قد كسب الإعداد يجب أن يتم تحديد تجريبيا ، ولكن كسب نقطة الوسط ينبغي أن يكون نقطة انطلاق كافية. ويجوز للحصول على الإعداد التي هي مرتفعة جدا تؤدي إلى تشبع كاشف مع عينة الفلورسنت عالية ، وهذا قد تحول دون اقتناء نتائج مجدية. ليس من المستحسن استخدام autogain (إذا كان معتمدا على القارئ). ويمكن استخدام مجهر مضان مقلوب للتحقق من النتائج ، بل هي مفيدة بشكل خاص للقيام بذلك المرة الأولى التي تقوم بتشغيل هذا الاختبار. ملاحظة : ومن الأهمية بمكان أن تتم قراءة نظم إدراج باستخدام الخريطة لوحة الصحيح. للحصول على معلومات حول الخرائط لوحة التحميل انظر دينار بحريني الفنية رقم 436 في نشرة www.bdbiosciences.com أو الاتصال بالدعم الفني دينار بحريني (labware@bd.com). التوجه الصحيح هو مع لوحة A1 جيدا في الزاوية اليسرى العليا وشعار القنينة دينار موجهة إلى اليمين كما هو إدراج لوحة الى القارئ. </li></ol> بيانات لحد وأعرب عن البيانات كما في المعادلة التالية : <img src="/files/ftp_upload/1475/1475eqa.jpg" alt="معادلة" /> قد يكون طرح خلفية مسبقة على حساب لغزو الخلايا في المئة RFU الوحدات = الفلورسنت النسبية.

<ol>
	<li>Sethi, G., Ahn, K. S., Pandey, M. K., Aggarwal, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Celastrol,+a+novel+triterpene,+potentiates+TNF-induced+apoptosis+and+suppresses+invasion+of+tumor+cells+by+inhibiting+NF-&#x03BA;B-regulated+gene+products+and+TAK1-mediated+NF-&#922;B+activation.">Celastrol, a novel triterpene, potentiates TNF-induced apoptosis and suppresses invasion of tumor cells by inhibiting NF-&#x03BA;B-regulated gene products and TAK1-mediated NF-&#922;B activation.</a> Blood. 109, 2727-2735 (2007).</li><li>Takada, Y., Kobayashi, Y., Aggarwal, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evodiamine+Aboloishes+Constitutive+and+Inducible+NF-&#x03BA;B+Activation+by+Inhibiting+I&#x03BA;B&#x03B1;+Kinase+Activation,+Thereby+Suppressing+NF-&#x03BA;B-regulated+Antiapoptotic+and+Metastatic+Gene+Expression,+Up-regulating+Apoptosis,+and+Inhibiting+Invasion.">Evodiamine Aboloishes Constitutive and Inducible NF-&#x03BA;B Activation by Inhibiting I&#x03BA;B&#x03B1; Kinase Activation, Thereby Suppressing NF-&#x03BA;B-regulated Antiapoptotic and Metastatic Gene Expression, Up-regulating Apoptosis, and Inhibiting Invasion.</a> J. Biol. Chem. 280, 17203-17212 (2005).</li><li>Harikumar, K. B., Kunnumakkara, A. B., Ahn, K. S., Anand, P., Krishnan, S., Guha, S., Aggarwal, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modification+of+the+cysteini+residues+in+I&#x03BA;B&#x03B1;+kinase+and+NF-&#x03BA;B+(p65)+by+xanthohumol+leads+to+suppression+of+NF-&#x03BA;B-regulated+gene+products+and+potentiation+of+apoptosis+in+leukemia+cells.">Modification of the cysteini residues in I&#x03BA;B&#x03B1; kinase and NF-&#x03BA;B (p65) by xanthohumol leads to suppression of NF-&#x03BA;B-regulated gene products and potentiation of apoptosis in leukemia cells.</a> Blood. , 113-2003 (2009).</li><li>Nair, A. S., Sishodia, S., Ahn, K. S., Kunnumakkara, A. B., Sethi, G., Aggarwal, B. B. D. e. g. u. e. l. i. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=an+Akt+Inhibitor,+Suppresses+I&#922;B&#945;+Kinase+Activation+Leading+to+Suppression+of+NF-&#x03BA;B-Regulated+Gene+Expression,+Potentiation+of+Apoptosis,+and+Inhibition+of+Cellular+Invasion.">an Akt Inhibitor, Suppresses I&#922;B&#945; Kinase Activation Leading to Suppression of NF-&#x03BA;B-Regulated Gene Expression, Potentiation of Apoptosis, and Inhibition of Cellular Invasion.</a> J. Immunol. , 177-5612 (2006).</li><li>Partridge, J., Qian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+and+High-Throughput+Screening+of+Tumor+Cell+Invasion+using+a+Cell-based+Model.">Quantitative and High-Throughput Screening of Tumor Cell Invasion using a Cell-based Model.</a> Society for Biomolecular Screening 2005 Conference. , (2005).</li><li>Mannuzza, F., Flaherty, P., Ilsley, S., Kramer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Improved+In+Vitro+Device+For+Measuring+Cell+Invasion+and+Method+for+its+Formation.">An Improved In Vitro Device For Measuring Cell Invasion and Method for its Formation.</a> US patent. , (2004).</li><li>Flaherty, P., Goldberger, A., Dery, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Fluorescent+Cell+Labeling+on+Tumor+Invasion+and+Screening+of+Anti-Metastatic+Compounds.">Effect of Fluorescent Cell Labeling on Tumor Invasion and Screening of Anti-Metastatic Compounds.</a> Mole. Biol. Cell. 12, 46a-46a (2001).</li><li>Flaherty, P., Mannuzza, F., Ilsley, S., Maliakal, J., Wu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+Anti-Metastatic+Compounds+by+a+Fluorescence+Based+Tumor+Invasion+Assay.">Screening of Anti-Metastatic Compounds by a Fluorescence Based Tumor Invasion Assay.</a> Screentech 2001 Conference. , (2005).</li><li>Mannuzza, F., Flaherty, P., Wu, M., Ilsley, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+Quantitative,+High-Throughput+Assay+System+for+the+Discovery+of+Anti-Cancer+Drugs.">Development of a Quantitative, High-Throughput Assay System for the Discovery of Anti-Cancer Drugs.</a> Proceedings of the Society for Biomolecular Screening. , (1999).</li></ol>

الكتاب والعاملين في العلوم البيولوجية دينار بحريني التي تنتج الكواشف والأدوات المستخدمة في هذه المقالة.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>BD BioCoat Tumor Invasion System</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>354165 or 354166</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HT-1080 and NIH/3T3 cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ATCC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dulbecco&#x2019;s Modified Eagle Medium (DMEM; serum-free)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dulbecco&#x2019;s Phosphate Buffered Saline, without calcium and magnesium (DPBS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BD Falcon FluoroBlok 24-Multiwell Insert System to be used as a cell migration control</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>351157 or 351158</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>5% Fetal Bovine Serum in DMEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BD Calcein AM Fluorescent Dye</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>354216 or 354217</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hanks&#x2019; Balanced Salt Solution (HBSS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BD Falcon 24-well plates for post cell invasion labeling</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>351147</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluorescence plate reader with bottom reading capabilities</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>PerkinElmer EnVision (R), TECAN Infinite (R), Molecular Devices SpectraMax (R), BioTek Synergy (TM), BMG LABTECH PHERAstar.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

an in vitro fluoroblok tumor invasion assay

السمة المميزة للخلايا النقيلي هو قدرتها على غزو عن طريق الغشاء القاعدي وتهاجر إلى أجزاء أخرى من الجسم. يجب أن تكون قادرة على الخلايا كلا البروتياز التي تفرز كسر الغشاء القاعدي وكذلك الهجرة من أجل أن تكون الغازية. دينار بحريني غزو الورم BioCoat يوفر نظام الخلايا مع الظروف التي تسمح بتقييم ممتلكاتها الغازية<em&gt; في المختبر</em<sup&gt; 1،2</sup&gt;. وهو يتألف من FluoroBlok فالكون 24 دينار بحريني Multiwell بلايت مع إدراج 8.0 ميكرون مسام الغشاء PET الحجم الذي كانت مغلفة بشكل موحد مع BD Matrigel ماتريكس. هذه الطبقة موحدة دينار بحريني Matrigel ماتريكس بمثابة إعادة الغشاء القاعدي<em&gt; في المختبر</em&gt; توفير الحاجز الحقيقي لخلايا غير الغازية في حين تقديم بنية البروتين مناسبة لدراسة الغزو. عملية طلاء occludes مسام الغشاء ، ومنع غير الغازية الخلايا السرطانية من الهجرة من خلال الغشاء. في المقابل ، الخلايا الغازية هي قادرة على فصل أنفسهم عن والهجرة من خلال غشاء المغلفة. ويمكن تحقيق الكميات لغزو الخلايا التي إما الوسم قبل الغزو أو ما بعد الخلية مع صبغة الفلورسنت مثل DiIC<sub&gt; 12</sub&gt; (3) أو calcein صباحا ، على التوالي ، وقياس مضان من الخلايا الغازية. منذ الغشاء FluoroBlok كتل دينار بحريني فعال مرور الضوء 490-700 نانومتر في الكفاءة&gt; 99 ٪ ، fluorescently المسمى لم يتم الكشف عن الخلايا التي لم غزتها القارئ قراءة لوحة أسفل مضان. ومع ذلك ، لم تعد محمية الخلايا التي قد غزت على الجانب السفلي للغشاء من مصدر الضوء ، ويتم الكشف عنها مع قارئ لوحة منها. هذا الفيديو يوضح غزو الخلايا مقايسة نقطة النهاية ، وذلك باستخدام calcein للكشف عن خلايا AM غزا.

Watch this Scientific Journal Video about An In vitro FluoroBlok Tumor Invasion Assay at JoVE.com

An In vitro FluoroBlok Tumor Invasion Assay

هذا الفيديو يوضح كيفية قياس غزو الخلية من خلال إدراج ثقافة الخلية باستخدام منهجية مضان مقرا لها.

و في المختبر غزو الورم FluoroBlok الفحص

The hallmark of metastatic cells is their ability to invade through the basement membrane and migrate to other parts of the body. Cells must be able to ...

Research

JoVE Journal

Biology

An In vitro FluoroBlok Tumor Invasion Assay

Assay for Adhesion and Agar Invasion in S. cerevisiae

مقايسة للالتصاق وغزو آجار في البيرة س.

Yeasts are found in natural biofilms, where many microorganisms colonize surfaces. In artificial environments, such as surfaces of man-made objects, ...

Assessing Neural Stem Cell Motility Using an Agarose Gel-based Microfluidic Device

تقييم العصبية على الحركة باستخدام الخلايا الجذعية جل المستندة Agarose الأجهزة ميكروفلويديك

While microfluidic technology is reaching a new level of maturity for macromolecular assays, cell-based assays are still at an infant stage1. This is ...

Isolation of Primary Mouse Trophoblast Cells and Trophoblast Invasion Assay

عزل خلايا الأرومة الغاذية الابتدائية ماوس والأرومة الغاذية الفحص الغزو

The placenta is responsible for the transport of nutrients, gasses and growth factors to the fetus, as well as the elimination of wastes.  
Thus, defects ...

Application of an In vitro DNA Protection Assay to Visualize Stress Mediation Properties of the Dps Protein

Application of an In vitro DNA Protection Assay to Visualize Stress Mediation Properties of the Dps Protein

تطبيق على<em&gt; في المختبر</em&gt; الحمض النووي الفحص حماية لتصور الإجهاد خصائص الوساطة من البروتين DPS

Oxidative stress is an unavoidable byproduct of  aerobic life.  Molecular oxygen is  essential for terrestrial metabolism, but it also takes part in many ...

A Quantitative Assay to Study Protein:DNA Interactions, Discover Transcriptional Regulators of Gene Expression, and Identify Novel Anti-tumor Agents

A الكمي الفحص لدراسة البروتين: تفاعلات الحمض النووي، اكتشاف المنظمين الترانسكربتي التعبير الجيني، وتحديد رواية وكلاء المضادة للورم

Many DNA-binding assays such as electrophoretic mobility shift assays (EMSA), chemiluminescent assays, chromatin immunoprecipitation (ChIP)-based assays, ...

In vitro Cell Migration and Invasion Assays

In vitro Cell Migration and Invasion Assays

في المختبر الهجرة الخليوي والغزو فحوصات

Migration is a key property of live cells and critical for normal development, immune response, and disease processes such as cancer metastasis and ...

An Assay for Lateral Line Regeneration in Adult Zebrafish

على الفحص لتجديد الخط الجانبي في اسماك الزرد الكبار

Due to the clinical importance of hearing and balance disorders in man, model organisms such as the zebrafish have been used to study lateral line ...

In vitro Methylation Assay to Study Protein Arginine Methylation

In vitro Methylation Assay to Study Protein Arginine Methylation

في المختبر مثلأيشن الفحص لدراسة البروتين أرجينين مثلأيشن

Protein arginine methylation is one of the most abundant post-translational modifications in the nucleus. Protein arginine methylation can be identified ...

In Vitro Assay to Measure Phosphatidylethanolamine Methyltransferase Activity

In Vitro Assay to Measure Phosphatidylethanolamine Methyltransferase Activity

في المختبر الفحص لقياس فسفاتيديل إيثانولامين ناقلة ميثيل آخر

Phosphatidylethanolamine methyltransferases are biosynthetic enzymes that catalyze the transfer of one or more methyl group(s) from ...

In Vitro SUMOylation Assay to Study SUMO E3 Ligase Activity

In Vitro SUMOylation Assay to Study SUMO E3 Ligase Activity

في المختبر تحليل سومويليشن لدراسة النشاط ليجاسى E3 السومو

Small ubiquitin-like modifier (SUMO) modification is an important post-translational modification (PTM) that mediates signal transduction primarily ...