Name: preparation of pooled human platelet lysate (phpl) as an efficient supplement for animal serum-free human stem cell cultures
Uploaded: 2009-10-30T07:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Pooled Human Platelet Lysate pHPL as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures at JoVE.com

Эта работа была поддержана австрийским исследовательского фонда (FWF, грант N211-NAN для DS) и Австрийское агентство по продвижению научных исследований (FFG, грант N200 для DS). Авторы выражают благодарность Клаудиа Url за отличную техническую помощь и Моника Фаррелл языковых редактирования.

1. Исходный материал Начните с богатой тромбоцитами плазмы (PRP) единиц подготовленных cytapheresis или полученные из Баффи пальто. 2. Стерильность проверить Для проверки стерильности взять образец 20 мл с каждой единицы PRP путем перевода объема связ?...

<ol>
	<li>Nurden, A. T., Nurden, P., Sanchez, M., Andia, I., Anitua, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelets+and+wound+healing.">Platelets and wound healing.</a> Front Biosci. 13, 3532-3548 (2008).</li><li>Barrientos, S., Stojadinovic, O., Golinko, M. S., Brem, H., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factors+and+cytokines+in+wound+healing.">Growth factors and cytokines in wound healing.</a> Wound Repair Regen. 16, 585-601 (2008).</li><li>Giacco, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombin-activated+platelets+induce+proliferation+of+human+skin+fibroblasts+by+stimulating+autocrine+production+of+insulin-like+growth+factor-1.">Thrombin-activated platelets induce proliferation of human skin fibroblasts by stimulating autocrine production of insulin-like growth factor-1.</a> FASEB J. 20, 2402-2404 (2006).</li><li>Kocaoemer, A., Kern, S., Kluter, H., Bieback, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+AB+serum+and+thrombin-activated+platelet-rich+plasma+are+suitable+alternatives+to+fetal+calf+serum+for+the+expansion+of+mesenchymal+stem+cells+from+adipose+tissue.">Human AB serum and thrombin-activated platelet-rich plasma are suitable alternatives to fetal calf serum for the expansion of mesenchymal stem cells from adipose tissue.</a> Stem Cells. 25, 1270-1278 (2007).</li><li>Kakudo, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation-promoting+effect+of+platelet-rich+plasma+on+human+adipose-derived+stem+cells+and+human+dermal+fibroblasts.">Proliferation-promoting effect of platelet-rich plasma on human adipose-derived stem cells and human dermal fibroblasts.</a> Plast Reconstr Surg. 122, 1352-1360 (2008).</li><li>Doucet, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+lysates+promote+mesenchymal+stem+cell+expansion:+A+safety+substitute+for+animal+serum+in+cell-based+therapy+applications.">Platelet lysates promote mesenchymal stem cell expansion: A safety substitute for animal serum in cell-based therapy applications.</a> J Cell Physiol. 205, 228-236 (2005).</li><li>Schallmoser, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+platelet+lysate+can+replace+fetal+bovine+serum+for+clinical-scale+expansion+of+functional+mesenchymal+stromal+cells.">Human platelet lysate can replace fetal bovine serum for clinical-scale expansion of functional mesenchymal stromal cells.</a> Transfusion. 47, 1436-1446 (2007).</li><li>Reinisch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+system+to+propagate+cord+blood-derived+multipotent+mesenchymal+stromal+cells+for+clinical+application.">Humanized system to propagate cord blood-derived multipotent mesenchymal stromal cells for clinical application.</a> Regen Med. 2, 371-382 (2007).</li><li>Schallmoser, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+large-scale+expansion+of+functional+mesenchymal+stem+cells+from+unmanipulated+bone+marrow+without+animal+serum+Tissue+Eng+Part.">Rapid large-scale expansion of functional mesenchymal stem cells from unmanipulated bone marrow without animal serum Tissue Eng Part.</a> C Methods. 14, 185-196 (2008).</li><li>Lange, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+and+safe+expansion+of+human+mesenchymal+stromal+cells+in+animal+serum-free+medium+for+transplantation+and+regenerative+medicine.">Accelerated and safe expansion of human mesenchymal stromal cells in animal serum-free medium for transplantation and regenerative medicine.</a> J Cell Physiol. 213, 18-26 (2007).</li><li>Reinisch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+large-scale+expanded+endothelial+colony-forming+cells+function+in+vitro+and+in+vivo.">Humanized large-scale expanded endothelial colony-forming cells function in vitro and in vivo.</a> Blood. 113, 6716-6725 (2009).</li><li>Bernardo, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+in+vitro+expansion+of+human+multipotent+mesenchymal+stromal+cells+for+cell-therapy+approaches:+further+insights+in+the+search+for+a+fetal+calf+serum+substitute.">Optimization of in vitro expansion of human multipotent mesenchymal stromal cells for cell-therapy approaches: further insights in the search for a fetal calf serum substitute.</a> J Cell Physiol. 211, 121-130 (2007).</li><li>Carrancio, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+mesenchymal+stem+cell+expansion+procedures+by+cell+separation+and+culture+conditions+modification.">Optimization of mesenchymal stem cell expansion procedures by cell separation and culture conditions modification.</a> Exp Hematol. 36, 1014-1021 (2008).</li><li>Muller, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+lysate+as+a+serum+substitute+for+2D+static+and+3D+perfusion+culture+of+stromal+vascular+fraction+cells+from+human+adipose+tissue.">Platelet lysate as a serum substitute for 2D static and 3D perfusion culture of stromal vascular fraction cells from human adipose tissue.</a> Tissue Eng Part A. 15, 869-875 (2009).</li><li>Anitua, E., Sanchez, M., Orive, G., Andia, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+potential+impact+of+the+preparation+rich+in+growth+factors+(PRGF)+in+different+medical+fields.">The potential impact of the preparation rich in growth factors (PRGF) in different medical fields.</a> Biomaterials. 28, 4551-4560 (2007).</li><li>Anitua, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+and+novel+applications+for+platelet-rich+fibrin+therapies.">New insights into and novel applications for platelet-rich fibrin therapies.</a> Trends Biotechnol. 24, 227-234 (2006).</li><li>Martinez-Zapata, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+and+safety+of+the+use+of+autologous+plasma+rich+in+platelets+for+tissue+regeneration:+a+systematic+review.">Efficacy and safety of the use of autologous plasma rich in platelets for tissue regeneration: a systematic review.</a> Transfusion. 49, 44-56 (2009).</li><li>Weibrich, G., Kleis, W. K., Hafner, G., Hitzler, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factor+levels+in+platelet-rich+plasma+and+correlations+with+donor+age,+sex,+and+platelet+count.">Growth factor levels in platelet-rich plasma and correlations with donor age, sex, and platelet count.</a> J Craniomaxillofac Surg. 30, 97-102 (2002).</li><li>Frechette, J. P., Martineau, I. &. a. m. p. ;. a. m. p., Gagnon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+plasmas:+growth+factor+content+and+roles+in+wound+healing.">Platelet-rich plasmas: growth factor content and roles in wound healing.</a> J Dent Res. 84, 434-439 (2005).</li><li>Seghatchian, J., Krailadsiri, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+platelet+storage+lesion.">The platelet storage lesion.</a> Transfus Med Rev. 11, 130-144 (1997).</li><li>Selvaggi, T. A., Walker, R. E., Fleisher, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+antibodies+to+fetal+calf+serum+with+arthus-like+reactions+in+human+immunodeficiency+virus-infected+patients+given+syngeneic+lymphocyte+infusions.">Development of antibodies to fetal calf serum with arthus-like reactions in human immunodeficiency virus-infected patients given syngeneic lymphocyte infusions.</a> Blood. 89, 776-779 (1997).</li><li>Tonti, G. A., Mannello, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+bone+marrow+to+therapeutic+applications:+different+behaviour+and+genetic/epigenetic+stability+during+mesenchymal+stem+cell+expansion+in+autologous+and+foetal+bovine+sera.">From bone marrow to therapeutic applications: different behaviour and genetic/epigenetic stability during mesenchymal stem cell expansion in autologous and foetal bovine sera.</a> Int J Dev Biol. 52, 1023-1032 (2008).</li><li>Bieback, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Alternatives+to+Fetal+Bovine+Serum+for+the+Expansion+of+Mesenchymal+Stromal+Cells+from+Bone+Marrow.">Human Alternatives to Fetal Bovine Serum for the Expansion of Mesenchymal Stromal Cells from Bone Marrow.</a> Stem Cells. , (2009).</li><li>Rohde, E., Schallmoser, K., Bartmann, C., Reinisch, A., Gad, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GMP-Compliant+Propagation+of+Human+Multipotent+Mesenchymal+Stromal+Cells.">GMP-Compliant Propagation of Human Multipotent Mesenchymal Stromal Cells.</a> Pharmaceutical Manufacturing Handbook: Regulations and Quality. , 97-115 (2008).</li></ol>

В некоторых регионах богатой тромбоцитами плазмы (PRP) могут быть получены из Баффи пальто иначе быть отходы упакованных красных кровяных телец из протестированных доноров крови (рис. 1). Оптимально, PRP используется непосредственно для дальнейшей подготовки pHPL, как в устаревших концентр?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Double bag (2 x 3.5L)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MacoPharma</td>
<td>VDL 8000XQ</td>
<td>originally for ascites puncture</td>
</tr>
<tr>
<td>50 mL Falcon tube</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Falcon BD</td>
<td>2098</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>50 mL Stripettes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Costar</td>
<td>4501</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plasma bags (600mL)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Baxter</td>
<td>R4R2021</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterile tubing welder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Terumo</td>
<td>TSCD-II</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Welding equipment </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fresenius Kabi</td>
<td>Compo Seal</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Water bath</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterile scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Clamps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Centrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

preparation of pooled human platelet lysate (phpl) as an efficient supplement for animal serum-free human stem cell cultures

Тромбоцитарный факторов роста, как было показано, чтобы стимулировать пролиферацию клеток эффективно<em&gt; В естественных условиях</em<sup&gt; 1,2</sup&gt; И<em&gt; В пробирке</em&gt;. Этот эффект проявляется в отношении мезенхимальные стромальные клетки (МСК), фибробласты и эндотелиальные колониеобразующих клеток тромбоциты активируются тромбином<sup&gt; 3-5</sup&gt; Или лизируются циклов замораживания / оттаивания<sup&gt; 6-14</sup&gt; Перед тромбоцитов releasate добавляется в питательную среду клетки. Трофические влияния тромбоцитарный факторы роста уже была опробована в нескольких испытаний для тканевой инженерии и регенеративной терапии.<sup&gt; 1,15-17</sup&gt; Изменение эффективности считается крайней мере, частично из-за индивидуально расходящихся концентрации факторов роста<sup&gt; 18,19</sup&gt; И отсутствие в настоящее время стандартизированные протоколы для тромбоцитов подготовки.<sup&gt; 15,16</sup&gt; Этот протокол представляет практически процедуры для создания пула тромбоцитов человека лизат (pHPL), полученных из регулярно производятся богатой тромбоцитами плазмы (PRP) от сорока до пятидесяти одной донорской крови. В нескольких циклов замораживания / оттаивания тромбоцитов оболочки повреждены и факторов роста эффективно выпущены в плазме. Наконец, тромбоцитов фрагменты удаляются с помощью центрифугирования, чтобы избежать обширного образования агрегатов и истощать потенциальных антигенов. Реализация pHPL в стандартные протоколы культура представляет перспективный инструмент для дальнейшего развития клеточной терапии распространяются в животный белок без системы.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Pooled Human Platelet Lysate pHPL as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures at JoVE.com

Preparation of Pooled Human Platelet Lysate pHPL as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures

Человек тромбоцитов лизат является богатым источником факторов роста и мощным дополнением в клеточной культуре. Этот протокол представляет процесс подготовки большого пула тромбоцитов человека лизат, исходя из богатой тромбоцитами плазмы, выполняя несколько циклов замораживания-оттаивания и истощению тромбоцитов фрагментов.

Подготовка Объединенные тромбоцитов человека лизат (pHPL) как эффективное дополнение для животных бессывороточной человеческих культур стволовых клеток

Platelet derived growth factors have been shown to stimulate cell proliferation efficiently in vivo1,2 and in vitro. This effect has been reported for ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of Pooled Human Platelet Lysate (pHPL) as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell (EPI-NCSC) Cultures

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell EPI-NCSC Cultures

Мышь эпидермального нервного гребня стволовых клеток (EPI-NCSC) Культур

EPI-NCSC are remnants of the embryonic neural crest in an adult location, the bulge of hair follicles. They are multipotent stem cells that have the ...

Preparation of Aplysia Sensory-motor Neuronal Cell Cultures

Preparation of Aplysia Sensory-motor Neuronal Cell Cultures

Подготовка Aplysia Сенсомоторной нейронов клеточных культур

The nervous system of the marine mollusk Aplysia californica is relatively simple, consisting of approximately 20,000 neurons.  The neurons are large (up ...

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (ECFCs)

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells MSCs and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells ECFCs

Выделение и животных Сыворотка свободного расширения прав пуповины производных мезенхимальных стромальных клеток (МСК) и эндотелиальных колонии Формирование клеток-предшественников (ECFCs)

The umbilical cord is a rich source for progenitor cells with high proliferative potential including mesenchymal stromal cells (also termed mesenchymal ...

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

Дифференциация эмбриональных стволовых клеток в олигодендроцитов прекурсоров

Oligodendrocytes are the myelinating cells of the central nervous system. For regenerative cell therapy in demyelinating diseases, there is significant ...

Xenotransplantation of Human Stem Cells into the Chicken Embryo

Ксенотрансплантация из стволовых клеток человека в куриный эмбрион

The chicken embryo is a classical animal model for studying normal embryonic and fetal development and for xenotransplantation experiments to study the ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

Эффективное Вывод прав Сердечная Прекурсоры и кардиомиоциты из плюрипотентных эмбриональных стволовых клеток человека с малыми Индукционная Молекула

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Rapid Fibroblast Removal from High Density Human Embryonic Stem Cell Cultures

Быстрое удаление фибробластов с высокой плотностью эмбриональных стволовых клеток культур

Mouse embryonic fibroblasts (MEFs) were used to establish human embryonic stem cells (hESCs) cultures after blastocyst isolation1. This feeder system ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

Na&#239;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

Наивные стволовых клеток взрослых Изоляция от первичных человеческих культурах фибробластов

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Efficient Generation Human Induced Pluripotent Stem Cells from Human Somatic Cells with Sendai-virus

Эффективная генерация человека индуцированных плюрипотентных стволовых клеток из человеческих соматических клеток с Сендай-вируса

A few years ago, the establishment of human induced pluripotent stem cells (iPSCs) ushered in a new era in biomedicine. Potential uses of human iPSCs ...

Alternative Cultures for Human Pluripotent Stem Cell Production, Maintenance, and Genetic Analysis

Альтернативные Культуры для человека плюрипотентных стволовых клеток производство, техобслуживание, и генетический анализ

Human pluripotent stem cells (hPSCs) hold great promise for regenerative medicine and biopharmaceutical applications. Currently, optimal culture and ...