Name: elime (enzyme linked immuno magnetic electrochemical) method for mycotoxin detection
Uploaded: 2009-10-23T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about ELIME Enzyme Linked Immuno Magnetic Electrochemical Method for Mycotoxin Detection at JoVE.com

والكتاب أود أن أشكر نانسي داونر وجميع أعضاء من مختبر الكيمياء التحليلية من جامعة روما &quot;تور فيرغاتا&quot; للتعاون والدعم اللوجستي. وأيد هذا العمل من قبل &quot;BioCop&quot; مشروع الاتحاد الأوروبي.

1) حظر الخرز المغناطيسي المغلفة : المضي قدما على النحو التالي لعرقلة الخرز المغناطيسي المغلفة : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد مجموعة من أنابيب إيبندورف 2 مل ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التجانس (الهز ولكن ل?...

<ol>
	<li>Koch, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=State+of+the+art+of+trichothecenes+analysis.">State of the art of trichothecenes analysis.</a> Toxicol. Letters. 153, 109-112 (2004).</li><li>Krska, R., Baumgartner, S., Josephs, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=State+of+the+art+in+the+analysis+of+type-A+and-B+trichothecene+mycotoxins+in+cereals.">State of the art in the analysis of type-A and-B trichothecene mycotoxins in cereals.</a> Fresenius J. Anal. Chem. 371, 285-299 (2001).</li><li>Morozova, T. Y., Morozov, V. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Force+differentiation+in+recognition+of+cross-reactive+antigens+by+magnetic+beads.">Force differentiation in recognition of cross-reactive antigens by magnetic beads.</a> Anal. Biochem. , 263-271 (2008).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FAO+Food+and+Nutrition+Paper+74.">FAO Food and Nutrition Paper 74.</a> JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITIVES Fifty-sixth meeting. , 115 (2001).</li><li>Piermarini, S., Volpe, G., Ricci, F., Micheli, L., Moscone, D., Palleschi, G., Fuhrer, M., Krska, R., Baumgartner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Screening+Electrochemical+Methods+for+Aflatoxin+B1+and+Type-A+Trichothecenes:+a+preliminary+study.">Rapid Screening Electrochemical Methods for Aflatoxin B1 and Type-A Trichothecenes: a preliminary study.</a> Anal. Lett. 40, 1333-1346 (2007).</li><li>Findlay, J. W. A., Dillard, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Appropriate+calibration+curve+fitting+in+ligand+binding+assays.">Appropriate calibration curve fitting in ligand binding assays.</a> AAPS J. 9 (2), E260-E267 (2007).</li><li>Ricci, F., Volpe, G., Micheli, l., Palleschi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+on+novel+developments+and+applications+of+immunosensors+in+food+analysis.">A review on novel developments and applications of immunosensors in food analysis.</a> Anal. Chim. Acta. 605 (2), 111-129 (2007).</li></ol>

وقد شهد استخدام الأجسام المضادة وتحقيق الاعتراف الجزيئية البيولوجية استخدام تقنيات الاستشعار عن بعد على نطاق واسع ل؛ منهجيات الكشف immunochemical ، مثل ELISAs وMEIAs ، هي ، في الوقت الحاضر ، من بين المنصات المستخدمة وتطبيقها في العديد من المختبرات 7. <p class="jove_content" style=";text-...

الكواشف <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات (اختياري) </td></tr><tr><td> كلوريد البوتاسيوم </td><td> سيغما </td><td> P9333 </td><td></td></tr><tr><td> هيدروجين فوسفات البوتاسيوم </td><td> سيغما </td><td> P9791 </td><td></td></tr><tr><td> الفوسفات ثنائي الصوديوم الهيدروجينية </td><td> سيغما </td><td> S3264 </td><td></td></tr><tr><td> كلوريد الصوديوم </td><td> سيغما </td><td> S3014 </td><td></td></tr><tr><td> 2 MgCl اللامائية </td><td> سيغما </td><td> M8266 </td><td></td></tr><tr><td> DEA (99.5 ٪) </td><td> سيغما </td><td> 31589 </td><td></td></tr><tr><td> حمض الهيدروكلوريك 37 ٪ </td><td> سيغما </td><td> 320331 </td><td></td></tr><tr><td> H 3 BO 3 </td><td> سيغما </td><td> B6768 </td><td></td></tr><tr><td> تريس [hydroxymethyl] - aminomethane </td><td> سيغما </td><td> 252859 </td><td></td></tr><tr><td> BSA (ألبومين المصل البقري) </td><td> سيغما </td><td> A4503 </td><td></td></tr><tr><td> هيدروكسيد الصوديوم </td><td> سيغما </td><td> S5881 </td><td></td></tr><tr><td> توين 20 </td><td> سيغما </td><td> P9416 </td><td></td></tr><tr><td> نان 3 </td><td> الدريتش </td><td> 71290 </td><td></td></tr><tr><td> 1 - النفثول الفوسفات ثنائي الصوديوم الملح </td><td> Fluka </td><td> N7255 </td><td></td></tr><tr><td> منزوع الدسم الحليب عرقلة الحل -- غير دهن الحليب الجاف </td><td> الحيوي راد </td><td> 170-6404 </td><td></td></tr><tr><td> HT - 2 مترافق مع KLH (الخادم Keyhole هيموسيانين البطلينوس) ، حل سهم (1 ملغ / مل في برنامج تلفزيوني) : </td><td> Biopure </td><td> 004050 </td><td> تم الحصول على المتقارن HT - 2 - KLH - CDI حسب الطريقة التي تم تنشيط الحرة OH - مجموعات على موقف 3 و 4 في السم HT - 2 بواسطة N ، N&#39; - carbonyldiimidazole (CDI) وتنشيط HT - 2 توكسين كان السماح للتفاعل مع aminogroups من البروتين (KLH) لإنشاء الربط carbammate مستقرة. </td></tr><tr><td> الثانوية الضد المسمى : مكافحة الماوس مفتش (H + L) من الخيل ، مترافق مع الفوسفاتيز القلوية ، وتركيز 1 ملغ / مل. </td><td> ناقلات مختبرات </td><td> AP - 2000 </td><td></td></tr><tr><td> HT - 2 توكسين </td><td> Biopure </td><td></td><td></td></tr><tr><td> الخرز المغناطيسي : Dynabeads ® </td><td> Dynal </td><td> M - 280 Tosylactivated </td><td> تركيز 2 × 10 9 حبات / مل. </td></tr></table> الحلول <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> اسم كاشف </td><td> إعداد </td><td> تعليقات (اختياري) </td></tr><tr><td> الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) ، ودرجة الحموضة 7.4 </td><td> حل 0،20 غرام من كلوريد البوتاسيوم ، 0.20 غرام من فوسفات هيدروجين البوتاسيوم ، 1،16 غرام من فوسفات الصوديوم والهيدروجين 8.00 جرام من كلوريد الصوديوم في 900 مل من الماء </td><td></td></tr><tr><td> الديثانولامين العازلة ، DEA ، 0.97 M + 1 ملم MgCl 2 + 0.15 م بوكل ، ودرجة الحموضة 9.8 </td><td> حل 0.0476g من 2 MgCl اللامائية و7.3.59 غرام من بوكل في 300 ~ مل من الماء. بعد انحلال إضافة 51 مل من إدارة مكافحة المخدرات (99.5 ٪). ضبط الرقم الهيدروجيني إلى 9.8 مع حمض الهيدروكلوريك (6 م). مخفف الى 500 مل من الماء. </td><td></td></tr><tr><td> بورات العازلة ، 0.1 م ، ودرجة الحموضة 9.5 </td><td> حل 3،09 غرام من H 3 BO 3 في 300 ~ مل من الماء المقطر ، ضبط الرقم الهيدروجيني إلى 9.5 و / أو حمض الهيدروكلوريك هيدروكسيد الصوديوم (6 م أو أقل تركيزات). مخفف الى 500 مل من الماء المقطر. </td><td></td></tr><tr><td> TRIS العازلة ، 0.2 م ، ودرجة الحموضة 8.5 </td><td> حل 3،85 غرام من تريس [hydroxymethyl] - aminomethane في 100 مليلتر من الماء. ضبط درجة الحموضة إلى 8.5 و / أو حمض الهيدروكلوريك هيدروكسيد الصوديوم (6 م أو أقل تركيزات). مخفف الى 200 مل من الماء. </td><td></td></tr><tr><td> TRIS عازلة + حل جيش صرب البوسنة (0.1 ٪) ، ودرجة الحموضة 8.4 </td><td> حل 0.050 غرام من جيش صرب البوسنة في 50 مل من الحموضة عازلة TRIS 8.4. </td><td> يجب أن يكون هذا الحل الطازجة في اليوم للاستخدام. </td></tr><tr><td> PBS عازلة + توين ® 0.05 ٪ </td><td> حل 0.250 غرام من توين 20 في 500 مل من المخزن برنامج تلفزيوني أعد سابقا ، ودرجة الحموضة 7.4 </td><td></td></tr><tr><td> PBS العازلة حل جيش صرب البوسنة + 0.1 ٪ </td><td> حل 0.050 غرام من جيش صرب البوسنة في 50 مل من المخزن برنامج تلفزيوني ، ودرجة الحموضة 7.3. </td><td> يجب أن يكون هذا الحل الطازجة في اليوم للاستخدام. </td></tr><tr><td> PBS عازلة + 0.1 ٪ + جيش صرب البوسنة نان 3 0.02 ٪ </td><td> حل 0.050 غرام من جيش صرب البوسنة و0،010 نان من 3 في 50 مل من المخزن برنامج تلفزيوني ، ودرجة الحموضة 7.3. </td><td> تخزين سولution </td></tr><tr><td> الركيزة الأنزيمية </td><td> حل 0.010 غرام من 1 النفثول فوسفات الصوديوم في 100 مل من الحموضة عازلة DEA 9.8. التفاف القارورة بإحكام بورق الألمنيوم. </td><td> يجب أن يكون هذا الحل الطازجة في اليوم للاستخدام. </td></tr><tr><td> منزوع الدسم الحليب عرقلة الحل </td><td> إضافة 0،20 غرام من التنشيف الصف حظر غير دهن الحليب الجاف (بيو راد ، هرقل ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) إلى 200 مل من برنامج تلفزيوني العازلة الحموضة 7.3. </td><td> يجب أن يكون هذا الحل الطازجة في اليوم للاستخدام. </td></tr><tr><td> HT - 2 الاسهم الحل </td><td> حل 10 ملغ من HT - 2 trichothecene قارورة السم ، في 10 مل من أسيتونتريل لإعطاء الحل مع تركيز 1 ملغ / مل. </td><td> تقسيم هذا الحل في استخدام المفرد aliquots من 30 مل وتخزينها في أقل من -30 درجة مئوية. </td></tr><tr><td> HT - 2 العامل حل القياسية </td><td> ماصة 20 مل من HT - 2 توكسين حل البورصة إلى 2 مل معايرة الدورق الحجمي وتمييع مع أسيتونتريل للحصول على حل HT - 2 العمل تحتوي على 10 ميكروغرام / مل من السم trichothecene. </td><td> وينبغي أن يكون هذا الحل الطازجة في اليوم للاستخدام. </td></tr><tr><td> HT - 2 حلول calibrant العامل </td><td> تمييع HT - 2 الحل معيار العمل (10 ميكروغرام / مل) لإعداد حل calibrant العمل 100 نانوغرام / مل. تمييع HT - 2 العاملة حل calibrant 100 نانوغرام / مل لإعداد العاملين حلول calibrant لتركيزات التالية 0 (فارغة) ، 0.5 ، 1 ، 2 ، 4 ، 10 نانوغرام / مل. </td><td> يجب أن يكون مستعدا هذه الحلول الطازجة في اليوم للاستخدام. </td></tr><tr><td> HT - 2 مترافق مع KLH </td><td> تقسيم HT - 2 مترافق مع الحل KLH الأسهم (الخادم Keyhole هيموسيانين البطلينوس) (1 ملغ / مل في برنامج تلفزيوني) في واحد استخدام aliquots من 350 ميكرولتر. </td><td> aliquots المحل في -30 درجة مئوية. </td></tr><tr><td> ضد وحيد النسيلة محددة </td><td> تمييع 1:350 (ت : ت) تركيز المخزون (1،383 ملغ / مل) من ريتوكسيماب في برنامج تلفزيوني ، لاستخدامها في خطوة المنافسة </td><td> يجب أن يكون مستعدا هذا الحل الجديد في لحظة استخدامها. 10 مل الأسهم الضد الحل في برنامج تلفزيوني عن الحجم النهائي من 3.5 لتر ، ما يكفي لتحليل المعايير 17 و / أو عينات. </td></tr><tr><td> إعتبر جسم الثانوية </td><td> غير المخفف المضادة للمفتش الماوس (H + L) مترافق مع الفوسفاتيز القلوية 1:100 (ت : v) في برنامج تلفزيوني ، لاستخدامها في خطوة المنافسة. </td><td> 100 سهم الضد ميكرولتر الحل في برنامج تلفزيوني عن الحجم النهائي من 10 مل تكفي لتحليل المعايير 25 و / أو عينات. يجب أن يكون مستعدا هذا الحل الجديد في لحظة استخدامها. </td></tr></table> جهاز <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> تعليقات (اختياري) </td></tr><tr><td> الجسيمات المغناطيسية المكثف : MPC ® - S </td><td> Dynal </td><td></td></tr><tr><td> PalmSens الصك </td><td> PalmSens </td><td> قدمت مع لايت PalmSens ، المسلسل المحمول كابل ربط الكمبيوتر والبرمجيات خيارات مسك الغزال </td></tr><tr><td> CH8 PalmSens المضاعف </td><td> PalmSens </td><td></td></tr><tr><td> ثمانية قناة اتصال الكهربائية مسك الغزال </td><td> اليد التي قدمت </td><td></td></tr><tr><td> مع أقطاب قطاع الشاشة eight المطبوعة (الكيانات الخاصة الغرض) </td><td> اليد التي قدمت </td><td></td></tr><tr><td> المصممة خصيصا لدعم قطاع الأقطاب </td><td> اليد التي قدمت </td><td> يتضمن المغناطيس النيوديميوم 8 كل واحدة منها وضعت تحت سطح القطب كل عمل SPE </td></tr><tr><td> ماصات معايرة ميكروليتر </td><td> جيلسون </td><td></td></tr><tr><td> النمام المغناطيسي وقضبان ضجة. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> الأكواب الزجاجية (100 ، 50 ، 20 مل). </td><td></td><td></td></tr><tr><td> الحجمي القوارير (2ml). </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 0.2 و 2ml أنابيب إيبندورف. </td><td> إيبندورف </td><td></td></tr><tr><td> الصقر ™ من أنابيب و5ml 15ml. </td><td> صقر </td><td></td></tr><tr><td> مختبر دوامة خلاط </td><td></td><td> لا تستخدم لدوامة خلاط resuspend الخرز المغناطيسي المغلفة مع HT2 - KLH أو مرتبطة مع سلسلة المناعية لتفادي تغيير طبيعة قطع بروتيني </td></tr><tr><td> فرن مختبر أو غرفة thermostated </td><td></td><td> اختيار الفرن قادرة على الحفاظ على درجة حرارة 37 درجة مئوية ± 3 </td></tr></table>

elime (enzyme linked immuno magnetic electrochemical) method for mycotoxin detection

المناعية هي بديل صالح للاستهلاك كمية HPLC أكثر كلفة والوقت أو GC 1 ، 2 طرق للكشف فحص السموم الفطرية الخطرة في السلع الغذائية. في هذا البروتوكول نظهر كيفية تلفيق واستجواب انزيم الكهروكيميائية تنافسية مقايسة immunomagnetic مرتبط على أساس استخدام الخرز المغناطيسي ودعما قويا لسلسلة immunochemical 3 و أقطاب الشاشة المطبوعة والاستشعار عن منصة. لدينا وسيلة تهدف إلى تحديد المبلغ الإجمالي للHT - 2 و T - 2 السموم ، والسموم الفطرية تعود لعائلة trichothecenes وقلق كبير على صحة الإنسان 4. استخدام الأجسام المضادة لاستنساخ عبر التفاعل مع 100 ٪ من نحو 2 و HT - 2 - T يسمح للكشف عن السموم في وقت واحد على حد سواء مع حساسية مماثلة 5. الخطوة الأولى للمقايسة لدينا هي الخطوة طلاء أين نحن شل HT2 - KLH السم المتقارن على السطح من الخرز المغناطيسي. بعد خطوة الحجب ، من الضروري تجنب الجواذب غير محددة ، وإضافة ريتوكسيماب يسمح المنافسة بين يجمد HT - 2 و HT - 2 مجانا أو T - 2 موجودة في العينة أو الذائب في محلول قياسي. في نهاية هذه الخطوة من حيث المنافسة ، وكمية من الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ترتبط يجمد HT - 2 سوف تكون متناسبة عكسيا مع كمية من السم في حل العينة. وتستخدم الأجسام المضادة الثانوية المسمى مع الفوسفاتيز القلوية (ا ف ب) للكشف عن الربط بين الأجسام المضادة المحددة ويجمد HT - 2. يتم تنفيذ الخطوة النهائية قياس ألقت عليه قسامة التعليق حبة المغناطيسي ، والمقابلة لحل محدد / نموذج قياسي ، على سطح القطب الشاشة المطبوعة في العمل ، ويتم يجمد الخرز المغناطيسي ومركزة عن طريق المغناطيس وضعت على وجه التحديد في إطار الشاشة المطبوعة الكهربائي. بعد دقيقتين من الحضانة بين حبات المغناطيسي وركيزة لأب ، يتم الكشف عن المنتج الأنزيمية التي Voltammetry نبض التفاضلية (DPV) باستخدام أداة محمولة (PalmSens) قادرة أيضا على بدء تلقائيا eight قياسات ضمن فاصل زمني من بضع ثوان.

Watch this Scientific Journal Video about ELIME Enzyme Linked Immuno Magnetic Electrochemical Method for Mycotoxin Detection at JoVE.com

ELIME Enzyme Linked Immuno Magnetic Electrochemical Method for Mycotoxin Detection

ويتجلى بروتوكول للكشف عن trichothecenes (السموم الفطرية للقلق على الصحة البشرية) باستخدام أسلوب الفحص وضعت حديثا على أساس أسلوب immunochemical تنافسية وكشف الكهروكيميائية النهائي.

ELIME (انزيم مرتبط المناعي المغناطيسي الكهروكيميائية) طرق الكشف عن السموم الفطرية

Immunoassays are a valid alternative to the more expensive and time consuming quantitative HPLC or GC1, 2 methods for the screening detection of hazardous ...

Research

JoVE Journal

Biology

ELIME (Enzyme Linked Immuno Magnetic Electrochemical) Method for Mycotoxin Detection

Detection of Protein Ubiquitination

اكتشاف بروتين Ubiquitination

Ubiquitination, the covalent attachment of the polypeptide ubiquitin to target proteins, is a key posttranslational modification carried out by a set of ...

Isolation of Labile Multi-protein Complexes by in vivo Controlled Cellular Cross-Linking and Immuno-magnetic Affinity Chromatography

Isolation of Labile Multi-protein Complexes by in vivo Controlled Cellular Cross-Linking and Immuno-magnetic Affinity Chromatography

عزل بروتين المجمعات المتعددة التي كتبها عطوب في الجسم الحي الشواهد الخلوية عبر ربط والمناعة المغناطيسي اللوني التقارب

The dynamic nature of cellular machineries is frequently built on transient and/or weak protein associations. These low affinity interactions preclude ...

Pulse-chase Analysis of N-linked Sugar Chains from Glycoproteins in Mammalian Cells

نبض مطاردة تحليل سلاسل السكر N - الموصولة من جليكوبروتينات في خلايا الثدييات

Attachment of the Glc3Man9GlcNAc2 precursor oligosaccharide to nascent polypeptides in the ER is a common modification for secretory proteins. Although ...

Rapid Homogeneous Detection of Biological Assays Using Magnetic Modulation Biosensing System

متجانسة الكشف السريع عن طريق فحوصات البيولوجي المغناطيسي نظام Biosensing التحوير

A magnetic modulation biosensing system (MMB) [1,2] rapidly and homogeneously detected biological targets at low concentrations without any washing or ...

Direct Detection of the Acetate-forming Activity  of the Enzyme Acetate Kinase

الكشف عن مباشرة النشاط خلات تشكيل لأنزيم كيناز خلات

Acetate kinase, a member of the acetate and sugar kinase-Hsp70-actin (ASKHA) enzyme superfamily1-5, is responsible for the reversible phosphorylation of ...

Electroantennographic Bioassay as a Screening Tool for Host Plant Volatiles

Electroantennographic الأحيائي كأداة فحص لمواد متطايرة النبات المضيف

Plant volatiles play an important role in plant-insect interactions. Herbivorous insects use plant volatiles, known as kairomones, to locate their host ...

qPCR Is a Sensitive and Rapid Method for Detection of Cytomegaloviral DNA in Formalin-fixed, Paraffin-embedded Biopsy Tissue

QPCR هو أسلوب حساس وسريع للكشف عن الحمض النووي من Cytomegaloviral في الفورمالين الثابتة، جزءا لا يتجزأ من البارافين-الأنسجة خزعة

It is crucial to identify cytomegalovirus (CMV) infection in the gastrointestinal (GI) tract of immunosuppressed patients, given their greater risk for ...

Multi-enzyme Screening Using a High-throughput Genetic Enzyme Screening System

متعدد انزيم الفحص باستخدام عالية الإنتاجية نظام فحص انزيم الوراثية

The recent development of a high-throughput single-cell assay technique enables the screening of novel enzymes based on functional activities from a ...

Nuclei Isolation from Whole Tissue using a Detergent and Enzyme-Free Method

عزل النوى عن الأنسجة الكاملة باستخدام المنظفات وطريقة خالية من الانزيم

High-throughput transcriptome and epigenome profiling requires preparation of a single cell or single nuclei suspension. Preparation of the suspension ...

Preparing and Rearing Axenic Insects with Tissue Cultured Seedlings for Host-Gut Microbiota Interaction Studies of the Leaf Beetle

إعداد وتربية الحشرات المحورية مع الشتلات المستزرعة في الأنسجة لدراسات تفاعل الميكروبات بين الأمعاء المضيفة لخنفساء الأوراق

Insect guts are colonized by diverse bacteria that can profoundly impact the host&#39;s physiological traits. Introducing a particular bacterial strain ...