Name: live dissection of drosophila embryos: streamlined methods for screening mutant collections by antibody staining
Uploaded: 2009-12-29T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Dissection of Drosophila Embryos: Streamlined Methods for Screening Mutant Collections by Antibody Staining at JoVE.com

Мы благодарим Ники Фокс и Алоизия Шмид за их вклад в развитие этих протоколов. Эта работа была поддержана NIH RO1 предоставить KZ, NS28182.

Введение Дрозофилы эмбрионов между этапами 14 и 17 эмбрионального развития может быть легко расчлененный для создания &quot;филе&quot; препаратов. В этих препаратов, центральной нервной системы (ЦНС) проходит по середине, и в окружении теле стены. Кишка удаляется. При окрас...

<ol>
	<li>Patel, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+neuronal+subsets+and+other+cell+types+in+whole-mount+Drosophila+embryos+and+larvae+using+antibody+probes.">Imaging neuronal subsets and other cell types in whole-mount Drosophila embryos and larvae using antibody probes.</a> Methods Cell Biol. 44, 445-487 (1994).</li><li>Desai, C. J., Gindhart, J. G., Goldstein, L. S., Zinn, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptor+tyrosine+phosphatases+are+required+for+motor+axon+guidance+in+the+Drosophila+embryo.">Receptor tyrosine phosphatases are required for motor axon guidance in the Drosophila embryo.</a> Cell. 84, 599-609 (1996).</li><li>Sun, Q., Schindelholz, B., Knirr, M., Schmid, A., Zinn, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+genetic+interactions+among+four+receptor+tyrosine+phosphatases+regulate+axon+guidance+in+Drosophila.">Complex genetic interactions among four receptor tyrosine phosphatases regulate axon guidance in Drosophila.</a> Molecular and cellular neurosciences. 17, 274-291 (2001).</li><li>Schmid, A., Schindelholz, B., Zinn, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combinatorial+RNAi:+a+method+for+evaluating+the+functions+of+gene+families+in+Drosophila.">Combinatorial RNAi: a method for evaluating the functions of gene families in Drosophila.</a> Trends in neurosciences. 25, 71-74 (2002).</li><li>Fox, A. N., Zinn, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+heparan+sulfate+proteoglycan+syndecan+is+an+in+vivo+ligand+for+the+Drosophila+LAR+receptor+tyrosine+phosphatase.">The heparan sulfate proteoglycan syndecan is an in vivo ligand for the Drosophila LAR receptor tyrosine phosphatase.</a> Curr Biol. 15, 1701-1711 (2005).</li></ol>

Мы надеемся, что это видео демонстрация показала наши методы для живых рассечение эмбриона и окрашивания достаточно подробно, что теперь они могут быть легко выполнен любым лицом, которое имеет некоторый опыт дрозофилы генетики и эмбриологии. Конечно, значительную практику все е?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Borosilicate Tubing With Filament </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sutter Instrument</td>
<td>BF120-60-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Narishige model PC-10 needle puller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Narishige</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Tubes pulled using a heater level of 58.9</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

live dissection of drosophila embryos: streamlined methods for screening mutant collections by antibody staining

Дрозофилы эмбрионов между этапами 14 и 17 эмбрионального развития может быть легко расчлененный для создания &quot;филе&quot; препаратов. В этих препаратов, центральная нервная система работает по середине, и в окружении теле стены. Многие различные фенотипы были изучены с помощью таких препаратов. В большинстве случаев, филе были получены путем рассечения антител окрашенных фиксированных целом монтажа эмбрионов. Эти «фиксированные вскрытия&quot; есть некоторые недостатки. Они отнимают много времени для выполнения, а это трудно разобраться мутант (GFP-отрицательный) эмбрионы от акций, в которых мутации хромосом сохраняется в течение GFP балансировки. С 2002 года наша группа ведет дефицит и внематочной экраны выражение для идентификации лигандов для детей-сирот рецепторов. Для того, чтобы сделать это, мы разработали обтекаемый протоколов для живых рассечение эмбриона и антител окрашивание коллекций, содержащих сотни симметричные линии. Мы пришли к выводу, что это значительно более эффективным для изучения фенотипов в больших коллекций запасы живой рассечение, чем фиксированной рассечение. Использование протокола, описанные здесь, один обученный человек может экрана до 10 строк в день в течение фенотипы, рассматривая 4-7 мутантных эмбрионов из каждой строки под соединение микроскопа. Это позволяет идентифицировать мутации присвоении тонкие, низко-фенотипы пенетрантностью, так как до 70 hemisegments в строке засчитываются при большом увеличении с 40X воды погружения линз.

Watch this Scientific Journal Video about Live Dissection of Drosophila Embryos: Streamlined Methods for Screening Mutant Collections by Antibody Staining at JoVE.com

Live Dissection of Drosophila Embryos: Streamlined Methods for Screening Mutant Collections by Antibody Staining

Мы описываем обтекаемый протокол для создания &quot;филе&quot; препараты эмбрионов дрозофилы конкретных генотипов. Этот протокол позволяет эффективного выполнения различных генетических экранов. Она также позволяет отличную визуализацию структур в конце эмбриона.

Живая Препарирование Drosophila Эмбрионы: Упрощенная методы скрининга Мутант Коллекции антител Окрашивание

Drosophila embryos between stages 14 and 17 of embryonic development can be readily dissected to generate "fillet" preparations.  In these preparations, ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live Dissection of Drosophila Embryos: Streamlined Methods for Screening Mutant Collections by Antibody Staining

Dissection of Drosophila Ovaries

Препарирование дрозофилы Яичники

Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos

Препарирование 6,5 Эмбрионы DPC мышь

Analysis of gene expression patterns during early stages of mammalian embryonic development can provide important clues about gene function, cell-cell ...

Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

Метод полного окрашивания антител горе в Чик

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Drosophila Larval NMJ Dissection

Дрозофилы личинок NMJ Dissection

The Drosophila neuromuscular junction (NMJ) is an established model system used for the study of synaptic development and plasticity. The widespread use ...

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

Подготовка Drosophila Эмбрионы для Live-визуализации с использованием висячей капли протокола

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

Preparation of Drosophila Polytene Chromosome Squashes for Antibody Labeling

Подготовка политенных хромосом Drosophila Кабачки для антител маркировки

Drosophila has long been a favorite model system for studying the relationship between chromatin structure and gene regulation due to the cytological ...

In-vivo Centrifugation of Drosophila Embryos

In-vivo Centrifugation of Drosophila Embryos

В естественных условиях центрифугирования эмбрионов дрозофилы

A major strategy for purifying and isolating different types of intracellular organelles is to separate them from each other based on differences in ...

Upright Imaging of Drosophila Embryos

Upright Imaging of Drosophila Embryos

Вертикальная съемка Drosophila Эмбрионы

Several well-known morphogenetic gradients and cellular movements occur along the dorsal/ventral axis of the Drosophila embryo. However, the current ...

RNAi Interference by dsRNA Injection into Drosophila Embryos

RNAi Interference by dsRNA Injection into Drosophila Embryos

RNAi Вмешательство инъекций в дсРНК Drosophila Эмбрионы

Genetic screening is one of the most powerful methods available for gaining insights into complex biological process 1. Over the years many improvements ...

Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries

Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries

Разбор и Окрашивание Drosophila Личинок Яичники

Many organs depend on stem cells for their development during embryogenesis and for maintenance or repair during adult life. Understanding how stem cells ...