Name: automated microfluidic blood lysis protocol for enrichment of circulating nucleated cells
Uploaded: 2009-12-31T14:00:00
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La recherche a été soutenue par le Prix Wallace H. Coulter Fondation en début de carrière dans la recherche translationnelle. Merci à Tim Andrews, Hématologie / oncologie pédiatrique, pour aider à la collecte de l&#39;échantillon sanguin. Aussi, grâce à Dr Sam Wellhausen, Core cytométrie en flux, James Graham Brown Cancer Center, pour les aider à exploiter des échantillons par cytométrie en flux.

Partie 1. Fabrication de dispositifs microfluidiques Un moule maître de silicium de l&#39;appareil lyse microfluidique a été créé en utilisant des techniques de photolithographie avec l&#39;équipement de l&#39;Université de Louisville salle blanche [1]. AutoCAD (Autodesk, Inc, San Rafael, Californie) a été utilisée pour générer un masque de transparence (Fineline Imaging, Colorado Springs, CO) pour créer des répliques négatives des canaux. L&#39;appareil a été fabriqué lyse m...

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	<li>White, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+application+of+microfluidic+leukocyte+enrichment+protocol+in+mild+phenotype+sickle+cell+disease+(SCD.">Clinical application of microfluidic leukocyte enrichment protocol in mild phenotype sickle cell disease (SCD.</a> Biomedical Microdevices. 11 (2), 477-483 (2009).</li><li>Sethu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+Flow+Microfluidic+Device+for+Rapid+Erythrocyte+Lysis.">Continuous Flow Microfluidic Device for Rapid Erythrocyte Lysis.</a> Anal. Chem. 76 (21), 6247-6253 (2004).</li></ol>

Un protocole de microfluidique automatisée lyse de sang n&#39;a été rapporté. Dans le protocole sont des étapes importantes à noter. Dans la section P.2.1, il est important de jeter le flacon de sang recueillies pour la première que l&#39;échantillon contient des cellules endothéliales matures délogé agissant comme de faux positifs. De plus, assurez-vous d&#39;exécuter l&#39;échantillon de sang dans l&#39;heure de la collecte. Amorçage du dispositif microfluidique dans la section P.2.2, il est important de...

automated microfluidic blood lysis protocol for enrichment of circulating nucleated cells

Dans ce rapport, le protocole d&#39;un dispositif automatisé de sang microfluidique lyse est détaillée. Circulants des cellules nucléées (CNC), y compris les leucocytes et les cellules endothéliales, de fournir une plateforme idéale pour une mise à jour le statut de la condition immunitaire d&#39;un individu. Le protocole permet microfluidique pour l&#39;enrichissement de CNC, sans perte de cellules sélectives et de la variabilité due à la préparation d&#39;échantillons par l&#39;utilisateur médiation étapes. Brièvement, le protocole comprend la fabrication de dispositifs, de la collecte de l&#39;échantillon, configuration de l&#39;appareil, et courir le sang dans la chambre microfluidique. Dans le dispositif de sang total est rapidement mélangé avec de l&#39;eau déminéralisée pendant environ 10 secondes dans un canal de 50 microns x 150 microns microfluidique. En ce moment érythrocytes sont lysés durée en raison des conditions hypotoniques. Structures chevrons sur le fond du canal d&#39;assurer un mélange complet et l&#39;exposition des cellules à un environnement constant. Cellules restantes sont retournés aux conditions isotoniques à la sortie de l&#39;appareil, fixe à l&#39;aide de paraformaldéhyde à 2%, centrifugé pour séparer les débris érythrocytaires du CNC, et en suspension dans du tampon de flux pour la coloration et l&#39;analyse par cytométrie en flux. Les résultats montrent propres parcelles de cytométrie en flux de dispersion avec les populations CNC sauvé. Signification de ce dispositif et le protocole vient à l&#39;étude et la compréhension de la pathogenèse de la maladie par l&#39;analyse des populations de CNC. Ainsi, l&#39;automatisation, l&#39;efficacité et la simplicité du protocole de microfluidique sont démontrés.

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Automated Microfluidic Blood Lysis Protocol for Enrichment of Circulating Nucleated Cells

Un dispositif automatisé microfluidique a été développé pour faire circuler l&#39;enrichissement de cellules nucléées du sang périphérique via lyse des globules rouges qui assure l&#39;isolement de l&#39;échantillon de haute qualité sans perte de cellules.

Automated Protocole microfluidiques lyse du sang pour l&#39;enrichissement de cellules circulantes nucléées

In this report the protocol for an automated microfluidic blood lysis device is detailed. Circulating nucleated cells (CNCs), including leukocytes and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies

Enrichissement des cellules NK du sang humain avec le Kit de RosetteSep StemCell Technologies

Natural killer (NK) cells are large granular cytotoxic lymphocytes that belong to the innate immune system and play major roles in fighting against cancer ...

Recherche

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Microfluidic Applications for Disposable Diagnostics

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In this interview, Dr. Klapperich discusses the fabrication of thermoplastic microfluidic devices and their application for development of new ...

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The human gastrointestinal (GI) tract is a unique environment in which intestinal epithelial cells and non-pathogenic (commensal) bacteria coexist. It has ...

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Endothelial cells provide a useful research model in many areas of vascular biology. Since its first isolation 1, human umbilical vein endothelial cells ...

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Génération et de la Culture du sang excroissance des cellules endothéliales de sang périphérique humain

Historically, the limited availability of primary endothelial cells from patients with vascular disorders has hindered the study of the molecular ...

Immunofluorescence Analysis of Endogenous and Exogenous Centromere-kinetochore Proteins

Protéines immunofluorescence Analyse des endogènes et exogènes Centromere-kinétochoriens

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Using Microfluidic Devices to Measure Lifespan and Cellular Phenotypes in Single Budding Yeast Cells

L&#39;utilisation des dispositifs microfluidiques pour mesurer et cellulaire Lifespan dans Phenotypes simples cellules de levure de bourgeonnement

Budding yeast Saccharomyces cerevisiae is an important model organism in aging research. Genetic studies have revealed many genes with conserved effects ...

A Rapid Automated Protocol for Muscle Fiber Population Analysis in Rat Muscle Cross Sections Using Myosin Heavy Chain Immunohistochemistry

Un protocole automatisé pour l&#39;analyse rapide de la population de fibre musculaire chez le rat Muscle Sections Cross Utilisation myosine chaîne lourde immunohistochimie

Quantification of muscle fiber populations provides a deeper insight into the effects of disease, trauma, and various other influences on skeletal muscle ...

A Protocol for Using Gene Set Enrichment Analysis to Identify the Appropriate Animal Model for Translational Research

Un protocole pour l’utilisation de gènes série d’analyses d’enrichissement pour identifier le modèle Animal approprié de recherche translationnelle

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Isolation of CD4+ T-cells and Analysis of Circulating T-follicular Helper (cTfh) Cell Subsets from Peripheral Blood Using 6-color Flow Cytometry

Isolation of CD4+ T-cells and Analysis of Circulating T-follicular Helper cTfh Cell Subsets from Peripheral Blood Using 6-color Flow Cytometry

Isolement des CD4+ T-cellules et analyse de circulation folliculaire T Helper (cTfh) des sous-ensembles de cellules de sang périphérique à l’aide 6-color Flow Cytometry

Aberrant T-follicular helper (Tfh) cell activity is detectable in autoimmune conditions and their presence is associated with clinical outcomes when the ...