Name: automated microfluidic blood lysis protocol for enrichment of circulating nucleated cells
Uploaded: 2009-12-31T14:00:00
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La ricerca è stata sostenuta dal Premio H. Wallace Coulter carriera Fondazione All&#39;inizio della Ricerca Traslazionale. Grazie a Tim Andrews, Pediatric Hematology / Oncology, per aiutare con la raccolta del sangue del campione. Anche grazie al dottor Sam Wellhausen, Citometria a flusso core, James Graham Brown Cancer Center, per aiutare con l&#39;esecuzione di campioni citometria a flusso.

Parte 1. Dispositivo di fabbricazione Microfluidic Uno stampo in silicone maestro del dispositivo lisi microfluidi è stato creato utilizzando le normali tecniche di fotolitografia con l&#39;attrezzatura presso l&#39;Università di Louisville camera bianca [1]. AutoCAD (Autodesk, Inc., San Rafael, CA) è stato utilizzato per generare una maschera di trasparenza (Fineline Imaging, Colorado Springs, CO) per creare repliche negative dei canali. Il dispositivo lisi microfluidica è stato realizzat...

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	<li>White, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+application+of+microfluidic+leukocyte+enrichment+protocol+in+mild+phenotype+sickle+cell+disease+(SCD.">Clinical application of microfluidic leukocyte enrichment protocol in mild phenotype sickle cell disease (SCD.</a> Biomedical Microdevices. 11 (2), 477-483 (2009).</li><li>Sethu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+Flow+Microfluidic+Device+for+Rapid+Erythrocyte+Lysis.">Continuous Flow Microfluidic Device for Rapid Erythrocyte Lysis.</a> Anal. Chem. 76 (21), 6247-6253 (2004).</li></ol>

Un sistema automatizzato microfluidici protocollo di lisi del sangue è stata riportata. All&#39;interno del protocollo sono passaggi critici degni di nota. Nella sezione P.2.1, è importante per scartare il flaconcino prima sangue raccolto, come il campione contiene sloggiato cellule mature endoteliali in qualità di falsi positivi. Inoltre, assicurarsi di eseguire il campione di sangue entro un&#39;ora dalla raccolta. Priming il dispositivo a microfluidi nella sezione P.2.2, è importante per liberare inizialmente del...

automated microfluidic blood lysis protocol for enrichment of circulating nucleated cells

In tale relazione il protocollo per un dispositivo automatico microfluidi lisi del sangue è dettagliata. Circolanti cellule nucleate (CNC), tra leucociti e cellule endoteliali, offrono una piattaforma ideale per lo stato aggiornato sullo stato immunitario di un individuo. Il protocollo consente di microfluidica per l&#39;arricchimento di CNC, senza perdita di cellule selettive e preparazione variabilità del campione a causa di user-mediata passi. In breve, il protocollo prevede fabbricazione del dispositivo, la raccolta dei campioni, l&#39;installazione del dispositivo e l&#39;esecuzione del sangue attraverso la camera di microfluidica. All&#39;interno del dispositivo di sangue intero si sta rapidamente miscelato con acqua deionizzata per circa 10 secondi in un micron 50 x 150 micron canale microfluidica. In questo arco di tempo eritrociti vengono lisati a causa delle condizioni ipotoniche. Strutture a spina di pesce sul fondo del canale garantire completa miscelazione e l&#39;esposizione delle cellule ad un ambiente costante. Cellule rimanenti vengono restituiti alle condizioni isotonica all&#39;uscita del dispositivo, fisso con 2% paraformaldeide, centrifugato per separare i detriti degli eritrociti dal CNC, e sospese in tampone di flusso per la colorazione e analisi mediante citometria a flusso. I risultati mostrano trame citometria a flusso pulito dispersione con popolazioni CNC salvato. Significato di questo dispositivo e il protocollo entra nello studio e nella comprensione della patogenesi della malattia attraverso l&#39;analisi delle popolazioni CNC. Quindi, l&#39;automazione, l&#39;efficacia e la semplicità del protocollo microfluidica sono dimostrati.

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Automated Microfluidic Blood Lysis Protocol for Enrichment of Circulating Nucleated Cells

Un dispositivo automatico microfluidi è stato sviluppato per la circolazione di arricchimento delle cellule nucleate del sangue periferico attraverso la lisi degli eritrociti che garantisce l&#39;isolamento del campione di alta qualità senza perdita di cellule.

Automatizzato Microfluidic Lysis protocollo di sangue per l&#39;arricchimento di cellule nucleate circolanti

In this report the protocol for an automated microfluidic blood lysis device is detailed. Circulating nucleated cells (CNCs), including leukocytes and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies

Arricchimento di cellule NK dal sangue umano con il kit RosetteSep Technologies StemCell

Natural killer (NK) cells are large granular cytotoxic lymphocytes that belong to the innate immune system and play major roles in fighting against cancer ...

Ricerca

Biologia

Microfluidic Co-culture of Epithelial Cells and Bacteria for Investigating Soluble Signal-mediated Interactions

Microfluidica Co-coltura di cellule epiteliali e batteri per le indagini solubile del segnale mediato da Interazioni

The human gastrointestinal (GI) tract is a unique environment in which intestinal epithelial cells and non-pathogenic (commensal) bacteria coexist. It has ...

Isolation and Culture of Pulmonary Endothelial Cells from Neonatal Mice

Isolamento e la coltura di cellule endoteliali polmonari da topi neonati

Endothelial cells provide a useful research model in many areas of vascular biology. Since its first isolation 1, human umbilical vein endothelial cells ...

Immunofluorescence Analysis of Endogenous and Exogenous Centromere-kinetochore Proteins

Le proteine ​​immunofluorescenza di endogeni ed esogeni Centromere-cinetocoro

"Centromeres" and "kinetochores" refer to the site where chromosomes associate with the spindle during cell division. Direct visualization of ...

Using Microfluidic Devices to Measure Lifespan and Cellular Phenotypes in Single Budding Yeast Cells

Uso di dispositivi microfluidici misurare la durata della vita e cellulare fenotipi in singole cellule di lievito in erba

Budding yeast Saccharomyces cerevisiae is an important model organism in aging research. Genetic studies have revealed many genes with conserved effects ...

A Rapid Automated Protocol for Muscle Fiber Population Analysis in Rat Muscle Cross Sections Using Myosin Heavy Chain Immunohistochemistry

Un rapido protocollo automatizzato per Fibra muscolare Analisi Popolazione nel ratto muscolari sezioni trasversali utilizzando una catena pesante della miosina immunoistochimica

Quantification of muscle fiber populations provides a deeper insight into the effects of disease, trauma, and various other influences on skeletal muscle ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

Un&#39;interfaccia utente grafica per il monitoraggio assistito della concentrazione di proteine ​​in protrusioni cellulari dinamiche

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

A Protocol for Using Gene Set Enrichment Analysis to Identify the Appropriate Animal Model for Translational Research

Un protocollo per l'utilizzo di Gene imposta analisi di arricchimento per identificare il modello animale adeguato per la ricerca traslazionale

Recent studies that compared transcriptomic datasets of human diseases with datasets from mouse models using traditional gene-to-gene comparison ...

Isolation of CD4+ T-cells and Analysis of Circulating T-follicular Helper (cTfh) Cell Subsets from Peripheral Blood Using 6-color Flow Cytometry

Isolation of CD4+ T-cells and Analysis of Circulating T-follicular Helper cTfh Cell Subsets from Peripheral Blood Using 6-color Flow Cytometry

Isolamento di CD4+ T-cellule e analisi della circolazione follicolare T Helper (cTfh) sottoinsiemi di cellule da sangue periferico mediante citometria a flusso di 6 colori

Aberrant T-follicular helper (Tfh) cell activity is detectable in autoimmune conditions and their presence is associated with clinical outcomes when the ...

Isolation and Enrichment of Human Lung Epithelial Progenitor Cells for Organoid Culture

Isolamento e arricchimento di cellule progenitrici epiteliali polmonari umane per la coltura di organoidi

Epithelial organoid models serve as valuable tools to study the basic biology of an organ system and for disease modeling. When grown as organoids, ...