Name: automated microfluidic blood lysis protocol for enrichment of circulating nucleated cells
Uploaded: 2009-12-31T14:00:00
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연구는 Translational 연구의 월러스 H. 쿨터 재단 조기 경력 수상에 의해 지원되었습니다. 혈액 샘플 수집과 관련하여 도움이 팀 앤드루스, 소아 혈액 / 종양학에 감사합니다. 또한 박사 샘 Wellhausen, 유동세포계측법 코어, 유동세포계측법 샘플을 실행에 대한 도움이 제임스 그레이엄 브라운 암 센터에 감사드립니다.

1 부. Microfluidic 장치 제조 microfluidic 용해 장치의 실리콘 마스터 금형은 루이빌 청정실 대학에서 장비 표준 photolithographic 기술을 사용하여 만들어진 [1]. 의 AutoCAD는 (오토 데스크, 주식 회사, 산 라파엘, CA) 채널의 부정적인 복제본을 만듭니다 (Fineline 이미징, 콜로라도 스프링스, CO) 투명 마스크를 생성하기 위해 사용되었습니다. microfluidic 용해 장치는 탄성 폴리 (dimethylsiloxane) (; ...

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	<li>White, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+application+of+microfluidic+leukocyte+enrichment+protocol+in+mild+phenotype+sickle+cell+disease+(SCD.">Clinical application of microfluidic leukocyte enrichment protocol in mild phenotype sickle cell disease (SCD.</a> Biomedical Microdevices. 11 (2), 477-483 (2009).</li><li>Sethu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+Flow+Microfluidic+Device+for+Rapid+Erythrocyte+Lysis.">Continuous Flow Microfluidic Device for Rapid Erythrocyte Lysis.</a> Anal. Chem. 76 (21), 6247-6253 (2004).</li></ol>

자동 microfluidic 혈액 용해 프로토콜이보고되었습니다. 프로토콜 내에서 협조할 중요한 단계입니다. 섹션 P.2.1에서는, 그것은 샘플 dislodged 성숙 내피 세포를 포함하고 잘못된 반응과 같은 역할을 모은 최초의 혈액 약병을 폐기하는 것이 중요합니다. 또한 수집 시간 이내에 혈액 샘플을 실행할 수 있는지 확인하십시오. 섹션 P.2.2에 마중물 microfluidic 장치를, 그것은 처음에 거품을 제거하는 것이 중요...

automated microfluidic blood lysis protocol for enrichment of circulating nucleated cells

이 보고서에서는 자동 microfluidic 혈액 용해 장치에 대한 프로토콜 세부 있습니다. leukocytes과 내피 세포를 포함한 세포 nucleated (CNCs), 순환, 개인의 면역 상태에 업데이트 상태를 이상적인 플랫폼을 제공합니다. microfluidic 프로토콜은 선택적 세포 손실 및 사용자 중재 단계에 따라 샘플 준비 변화없이 CNCs의 농축을 허용합니다. 간단히, 프로토콜은 장치 제조, 샘플 수집, 장치 설치 및 microfluidic 챔버를 통해 혈액을 실행을 포함합니다. 장치 내의 모든 혈액이 빠르게 50 미크론 X 150 마이크론 microfluidic 채널에서 약 10 초 동안 탈이온수와 혼합됩니다. 이 시간에 걸쳐의 적혈구는 hypotonic 사정에 따라 lysed 있습니다. 채널의 하단에 헤링본 구조는 철저하게 혼합하고 지속적인 환경에 세포의 노출을 보장합니다. 남은 세포는 장치의 출구에서 isotonic 조건에 반환 2 % paraformaldehyde를 사용하여 고정 CNCs에서 적혈구 파편을 분리 centrifuged 및 유동세포계측법에 의해 얼룩 및 분석을위한 흐름 버퍼에 일시 중지됩니다. 결과 저장 CNC의 인구 깨끗한 유동세포계측법의 스캐터 플롯을 보여줍니다. 이 장치와 프로토콜의 의미는 CNC의 인구 분석하여 질병 pathogenesis의 연구 및 이해된다. 따라서 자동화, 효율성, 그리고 microfluidic 프로토콜의 단순는 증명하고 있습니다.

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Automated Microfluidic Blood Lysis Protocol for Enrichment of Circulating Nucleated Cells

자동 microfluidic 장치는 세포 손실없이 고품질의 샘플의 절연을 보장 적혈구 용해를 통해 말초 혈액에서 nucleated 세포 농축을 순환하기 위해 개발되었습니다.

Nucleated 셀을 순환의 강화를위한 자동 Microfluidic 혈액 용해 프로토콜

In this report the protocol for an automated microfluidic blood lysis device is detailed. Circulating nucleated cells (CNCs), including leukocytes and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies

StemCell 기술에서 RosetteSep 키트와 함께 인간의 피를에서 NK 세포의 농축

Natural killer (NK) cells are large granular cytotoxic lymphocytes that belong to the innate immune system and play major roles in fighting against cancer ...

연구

생물학

Microfluidic Co-culture of Epithelial Cells and Bacteria for Investigating Soluble Signal-mediated Interactions

Microfluidic 가용성식이 중재 신호의 상호 작용을 조사하는 상피 세포 박테리아의 공동 문화

The human gastrointestinal (GI) tract is a unique environment in which intestinal epithelial cells and non-pathogenic (commensal) bacteria coexist. It has ...

Isolation and Culture of Pulmonary Endothelial Cells from Neonatal Mice

신생아 마우스의 폐 내피 세포의 분리 및 문화

Endothelial cells provide a useful research model in many areas of vascular biology. Since its first isolation 1, human umbilical vein endothelial cells ...

Immunofluorescence Analysis of Endogenous and Exogenous Centromere-kinetochore Proteins

내생의 면역 형광 분석 및 외인성 센트로 - 동원체 단백질

"Centromeres" and "kinetochores" refer to the site where chromosomes associate with the spindle during cell division. Direct visualization of ...

Using Microfluidic Devices to Measure Lifespan and Cellular Phenotypes in Single Budding Yeast Cells

마이크로 유체 장치를 사용하면 단일 신진 효모 세포의 수명과 세포 표현형을 측정하는

Budding yeast Saccharomyces cerevisiae is an important model organism in aging research. Genetic studies have revealed many genes with conserved effects ...

A Rapid Automated Protocol for Muscle Fiber Population Analysis in Rat Muscle Cross Sections Using Myosin Heavy Chain Immunohistochemistry

마이 오신 중쇄 면역를 사용하여 쥐의 근육 크로스 섹션에서 근육 섬유 인구 분석을위한 신속한 자동화 프로토콜

Quantification of muscle fiber populations provides a deeper insight into the effects of disease, trauma, and various other influences on skeletal muscle ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

동적 세포 돌출부에서 소프트웨어를 이용한 단백질 농도 추적을위한 그래픽 사용자 인터페이스

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

A Protocol for Using Gene Set Enrichment Analysis to Identify the Appropriate Animal Model for Translational Research

유전자를 사용 하 여 프로토콜 변환 연구에 대 한 적절 한 동물 모델을 식별 하기 위해 농축 분석 설정

Recent studies that compared transcriptomic datasets of human diseases with datasets from mouse models using traditional gene-to-gene comparison ...

Isolation of CD4+ T-cells and Analysis of Circulating T-follicular Helper (cTfh) Cell Subsets from Peripheral Blood Using 6-color Flow Cytometry

Isolation of CD4+ T-cells and Analysis of Circulating T-follicular Helper cTfh Cell Subsets from Peripheral Blood Using 6-color Flow Cytometry

CD4의 격리+ T-세포 및 분석의 순환 T-follicular 도우미 (cTfh) 6 컬러 Flow Cytometry 주변 혈액을 사용 하 여에서 셀 하위 집합

Aberrant T-follicular helper (Tfh) cell activity is detectable in autoimmune conditions and their presence is associated with clinical outcomes when the ...

Isolation and Enrichment of Human Lung Epithelial Progenitor Cells for Organoid Culture

오가노이드 배양을 위한 인간 폐 상피 전구 세포의 분리 및 농축

Epithelial organoid models serve as valuable tools to study the basic biology of an organ system and for disease modeling. When grown as organoids, ...