Name: automated microfluidic blood lysis protocol for enrichment of circulating nucleated cells
Uploaded: 2009-12-31T14:00:00
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Pesquisa tem sido apoiada pela Coulter H. Wallace Foundation Prémio Carreira No início de Pesquisa Translacional. Graças a Tim Andrews, Pediátrica Hematologia / Oncologia, para a ajuda com a coleta de amostra de sangue. Também graças ao Dr. Sam Wellhausen, Core Citometria de Fluxo, James Graham Brown Cancer Center, para ajudar com o funcionamento de amostras de citometria de fluxo.

Parte 1. Fabricação de dispositivos microfluídicos Um molde mestre de silício do dispositivo lise microfluídicos foi criado usando técnicas de fotolitografia com o equipamento na Universidade de Louisville salas limpas [1]. AutoCAD (Autodesk, Inc., San Rafael, CA) foi utilizado para gerar uma máscara de transparência (Fineline Imaging, Colorado Springs, CO) para criar réplicas negativas dos canais. O dispositivo foi fabricado lise microfluídica do molde mestre de silício usando téc...

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	<li>White, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+application+of+microfluidic+leukocyte+enrichment+protocol+in+mild+phenotype+sickle+cell+disease+(SCD.">Clinical application of microfluidic leukocyte enrichment protocol in mild phenotype sickle cell disease (SCD.</a> Biomedical Microdevices. 11 (2), 477-483 (2009).</li><li>Sethu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+Flow+Microfluidic+Device+for+Rapid+Erythrocyte+Lysis.">Continuous Flow Microfluidic Device for Rapid Erythrocyte Lysis.</a> Anal. Chem. 76 (21), 6247-6253 (2004).</li></ol>

Um protocolo de lise automatizado microfluídicos de sangue tem sido relatado. No âmbito do protocolo são passos críticos dignos de nota. Na seção P.2.1, é importante para descartar o frasco de sangue coletadas primeira vez que a amostra contém células endoteliais desalojado madura agindo como falsos positivos. Certifique-se também para executar o amostra de sangue dentro de uma hora da coleta. Priming o dispositivo microfluídicos na seção p.2.2, é importante inicialmente livrar das bolhas. Além disso, dev...

automated microfluidic blood lysis protocol for enrichment of circulating nucleated cells

Neste relatório, o protocolo para um dispositivo de lise microfluídicos sangue automatizado é detalhado. Circulantes de células nucleadas (CNCs), incluindo leucócitos e células endoteliais, fornecem a plataforma ideal para um status atualizado sobre o estado imunológico de um indivíduo. O protocolo permite microfluídicos para o enriquecimento de CNCs sem perda seletiva de células e preparação de amostras a variabilidade devido ao usuário mediada por etapas. Resumidamente, o protocolo inclui a fabricação de dispositivos, coleta de amostras, a configuração de dispositivos e executando o sangue através da câmara microfluídicos. Dentro do dispositivo de sangue total é rapidamente misturada com água deionizada por cerca de 10 segundos em um x 50 150 micron micron canais microfluídicos. Neste tempo eritrócitos são lisados ​​período devido às condições hipotônica. Estruturas de espinha de peixe na parte inferior do canal de garantir a mistura completa e exposição de células a um ambiente constante. Células restantes são devolvidos às condições isotônicas na saída do dispositivo, fixa usando paraformaldeído 2%, centrifugado para separar fragmentos de eritrócitos de CNCs, e suspenso em tampão de fluxo para a coloração e análise por citometria de fluxo. Os resultados mostram limpa fluxo parcelas citometria de dispersão com populações CNC salvo. Importância deste dispositivo e protocolo vem no estudo e compreensão da patogênese da doença através da análise de populações CNC. Por isso, a automação, a eficácia ea simplicidade do protocolo microfluídicos são demonstradas.

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Automated Microfluidic Blood Lysis Protocol for Enrichment of Circulating Nucleated Cells

Um dispositivo automático microfluídicos foi desenvolvido para a circulação de enriquecimento de células nucleadas do sangue periférico, através de lise de eritrócitos que garante o isolamento de amostras de alta qualidade sem perda de células.

Protocolo de Lise automatizado microfluídicos de sangue para Enriquecimento de células nucleadas circulantes

In this report the protocol for an automated microfluidic blood lysis device is detailed. Circulating nucleated cells (CNCs), including leukocytes and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies

Enriquecimento das células NK do sangue humano com o Kit RosetteSep de StemCell Technologies

Natural killer (NK) cells are large granular cytotoxic lymphocytes that belong to the innate immune system and play major roles in fighting against cancer ...

Biologia

Microfluidic Co-culture of Epithelial Cells and Bacteria for Investigating Soluble Signal-mediated Interactions

Microfluídicos Co-cultura de células epiteliais e bactérias para a Investigação Solúvel sinal mediada por interações

The human gastrointestinal (GI) tract is a unique environment in which intestinal epithelial cells and non-pathogenic (commensal) bacteria coexist. It has ...

Isolation and Culture of Pulmonary Endothelial Cells from Neonatal Mice

Isolamento e cultura de células endoteliais pulmonares de camundongos Neonatal

Endothelial cells provide a useful research model in many areas of vascular biology. Since its first isolation 1, human umbilical vein endothelial cells ...

Immunofluorescence Analysis of Endogenous and Exogenous Centromere-kinetochore Proteins

Proteínas Análise de imunofluorescência de endógenos e exógenos Centromere-cinetócoro

"Centromeres" and "kinetochores" refer to the site where chromosomes associate with the spindle during cell division. Direct visualization of ...

Using Microfluidic Devices to Measure Lifespan and Cellular Phenotypes in Single Budding Yeast Cells

Usando dispositivos microfluídicos medir Longevidade e Celular fenótipos em células individuais levedura de brotamento

Budding yeast Saccharomyces cerevisiae is an important model organism in aging research. Genetic studies have revealed many genes with conserved effects ...

A Rapid Automated Protocol for Muscle Fiber Population Analysis in Rat Muscle Cross Sections Using Myosin Heavy Chain Immunohistochemistry

Um Protocolo Automatizado Rápido para Muscle Fiber Análise População em músculo secções transversais Usando Cadeia miosina pesada Imunohistoquímica

Quantification of muscle fiber populations provides a deeper insight into the effects of disease, trauma, and various other influences on skeletal muscle ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

Uma interface de usuário gráfica para rastreamento assistido por software da concentração de proteínas em protrusões celulares dinâmicas

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

A Protocol for Using Gene Set Enrichment Analysis to Identify the Appropriate Animal Model for Translational Research

Um protocolo para o uso de Gene definir análise de enriquecimento para identificar o modelo Animal adequado para investigação de translação

Recent studies that compared transcriptomic datasets of human diseases with datasets from mouse models using traditional gene-to-gene comparison ...

Isolation of CD4+ T-cells and Analysis of Circulating T-follicular Helper (cTfh) Cell Subsets from Peripheral Blood Using 6-color Flow Cytometry

Isolation of CD4+ T-cells and Analysis of Circulating T-follicular Helper cTfh Cell Subsets from Peripheral Blood Using 6-color Flow Cytometry

Isolamento de CD4+ T-células e análise de circulação folicular-T Helper (cTfh) célula subconjuntos de citometria de fluxo de 6 cores usando o sangue periférico

Aberrant T-follicular helper (Tfh) cell activity is detectable in autoimmune conditions and their presence is associated with clinical outcomes when the ...

Isolation and Enrichment of Human Lung Epithelial Progenitor Cells for Organoid Culture

Isolamento e enriquecimento de células progenitoras epiteliais pulmonares humanas para a cultura organoide

Epithelial organoid models serve as valuable tools to study the basic biology of an organ system and for disease modeling. When grown as organoids, ...