Name: automated microfluidic blood lysis protocol for enrichment of circulating nucleated cells
Uploaded: 2009-12-31T14:00:00
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La investigación ha sido apoyado por el Premio Wallace H. Coulter Carrera Fundación principios de la investigación traslacional. Gracias a Tim Andrews, Hematología / Oncología Pediátrica, para ayudar con la recolección de muestras de sangre. También gracias al Dr. Sam Wellhausen, Core Citometría de flujo, James Graham Brown Cancer Center, en busca de ayuda con el funcionamiento de las muestras de citometría de flujo.

Parte 1. Fabricación de dispositivos de microfluídica Un molde maestro de silicio del dispositivo de microfluidos lisis fue creado usando técnicas de fotolitografía con el equipo en la Universidad de Louisville sala blanca [1]. AutoCAD (Autodesk, Inc., San Rafael, CA) se utilizó para generar una máscara de transparencia (Fineline Imaging, Colorado Springs, CO) para crear réplicas negativas de los canales. El dispositivo de microfluidos lisis fue fabricado a partir del molde maestro de s...

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	<li>White, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+application+of+microfluidic+leukocyte+enrichment+protocol+in+mild+phenotype+sickle+cell+disease+(SCD.">Clinical application of microfluidic leukocyte enrichment protocol in mild phenotype sickle cell disease (SCD.</a> Biomedical Microdevices. 11 (2), 477-483 (2009).</li><li>Sethu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+Flow+Microfluidic+Device+for+Rapid+Erythrocyte+Lysis.">Continuous Flow Microfluidic Device for Rapid Erythrocyte Lysis.</a> Anal. Chem. 76 (21), 6247-6253 (2004).</li></ol>

Un sistema automatizado de protocolo de microfluidos lisis de sangre ha sido reportado. Dentro del protocolo son pasos críticos dignos de mención. En la sección P.2.1, es importante desechar el frasco de sangre recogen la primera vez que la muestra contiene desalojados células endoteliales maduras que actúan como falsos positivos. También asegúrese de ejecutar la muestra de sangre una hora después de la recolección. Cebado del dispositivo de microfluidos en el apartado P.2.2, es importante para librar al princi...

automated microfluidic blood lysis protocol for enrichment of circulating nucleated cells

En este informe, el protocolo de un sistema automatizado de dispositivo de microfluidos lisis de sangre se detalla. Distribución de células nucleadas (CNC), incluyendo los leucocitos y las células endoteliales, proporcionan una plataforma ideal para un estado actualizado sobre el estado inmunitario de un individuo. El protocolo permite a los microfluidos para el enriquecimiento de la CNC, sin pérdida selectiva de células y la variabilidad de preparación de muestras, debido a los pasos mediada por el usuario. En pocas palabras, el protocolo incluye la fabricación de dispositivos, recolección de muestras, la configuración del dispositivo y la ejecución de la sangre a través de la cámara de microfluidos. Dentro del dispositivo de sangre entera se mezcla rápidamente con agua desionizada durante aproximadamente 10 segundos en un canal de 50 micrones x 150 micrones de microfluidos. En este tiempo los eritrocitos se lisan lapso debido a las condiciones hipotónicas. Estructuras de espina de pescado en la parte inferior del canal que se mezcle bien y la exposición de las células a un medio ambiente constante. Las células restantes se devuelven a condiciones isotónicas a la salida del dispositivo, fijo con paraformaldehído al 2%, se centrifuga para separar los residuos de eritrocitos de CNC, y suspendido en buffer de flujo para la tinción y análisis por citometría de flujo. Los resultados muestran el flujo de los diagramas de dispersión limpia citometría con poblaciones CNC salvo. Importancia de este dispositivo y el protocolo se presenta en el estudio y la comprensión de la patogénesis de la enfermedad mediante el análisis de las poblaciones de CNC. Por lo tanto, la automatización, la eficacia y la simplicidad del protocolo de microfluidos son demostrados.

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Automated Microfluidic Blood Lysis Protocol for Enrichment of Circulating Nucleated Cells

Un dispositivo de microfluidos automatizado fue desarrollado para la circulación de enriquecimiento de células nucleadas de sangre periférica mediante lisis de los eritrocitos que garantiza el aislamiento de la muestra de alta calidad sin pérdida de células.

Automatizada de sangre de microfluidos Protocolo de lisis para el Enriquecimiento de la circulación las células nucleadas

In this report the protocol for an automated microfluidic blood lysis device is detailed. Circulating nucleated cells (CNCs), including leukocytes and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies

Enriquecimiento de las células NK a partir de sangre humana con el Kit de RosetteSep de Tecnologías de la StemCell

Natural killer (NK) cells are large granular cytotoxic lymphocytes that belong to the innate immune system and play major roles in fighting against cancer ...

Investigación

Biología

Microfluidic Co-culture of Epithelial Cells and Bacteria for Investigating Soluble Signal-mediated Interactions

Microfluidos Co-cultivo de células epiteliales y bacterias para la Investigación de la señal mediada Soluble Interacciones

The human gastrointestinal (GI) tract is a unique environment in which intestinal epithelial cells and non-pathogenic (commensal) bacteria coexist. It has ...

Isolation and Culture of Pulmonary Endothelial Cells from Neonatal Mice

Aislamiento y cultivo de células endoteliales pulmonares de ratones recién nacidos

Endothelial cells provide a useful research model in many areas of vascular biology. Since its first isolation 1, human umbilical vein endothelial cells ...

Immunofluorescence Analysis of Endogenous and Exogenous Centromere-kinetochore Proteins

Las proteínas Análisis de inmunofluorescencia de endógenos y exógenos Centrómero-cinetocoro

"Centromeres" and "kinetochores" refer to the site where chromosomes associate with the spindle during cell division. Direct visualization of ...

Using Microfluidic Devices to Measure Lifespan and Cellular Phenotypes in Single Budding Yeast Cells

El uso de dispositivos de microfluidos para Medir Lifespan y Celular fenotipos en células individuales levadura en ciernes

Budding yeast Saccharomyces cerevisiae is an important model organism in aging research. Genetic studies have revealed many genes with conserved effects ...

A Rapid Automated Protocol for Muscle Fiber Population Analysis in Rat Muscle Cross Sections Using Myosin Heavy Chain Immunohistochemistry

Un Protocolo Automatizado Rápido de Fibra Análisis Población en músculo de rata Secciones representativas Uso de la cadena pesada de miosina inmunohistoquímica

Quantification of muscle fiber populations provides a deeper insight into the effects of disease, trauma, and various other influences on skeletal muscle ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

Una interfaz gráfica de usuario para el seguimiento asistido por software de la concentración de proteínas en protones dinámicos celulares

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

A Protocol for Using Gene Set Enrichment Analysis to Identify the Appropriate Animal Model for Translational Research

Un protocolo para el uso de gen Set enriquecimiento análisis para identificar el modelo Animal adecuado para la investigación traslacional

Recent studies that compared transcriptomic datasets of human diseases with datasets from mouse models using traditional gene-to-gene comparison ...

Isolation of CD4+ T-cells and Analysis of Circulating T-follicular Helper (cTfh) Cell Subsets from Peripheral Blood Using 6-color Flow Cytometry

Isolation of CD4+ T-cells and Analysis of Circulating T-follicular Helper cTfh Cell Subsets from Peripheral Blood Using 6-color Flow Cytometry

Aislamiento de CD4+ las células de T y análisis de circulación folicular T Helper (cTfh) subconjuntos de la célula del uso de sangre periférica citometría de flujo de 6 colores

Aberrant T-follicular helper (Tfh) cell activity is detectable in autoimmune conditions and their presence is associated with clinical outcomes when the ...

Isolation and Enrichment of Human Lung Epithelial Progenitor Cells for Organoid Culture

Aislamiento y enriquecimiento de células progenitoras epiteliales pulmonares humanas para cultivo de organoides

Epithelial organoid models serve as valuable tools to study the basic biology of an organ system and for disease modeling. When grown as organoids, ...