Name: automated microfluidic blood lysis protocol for enrichment of circulating nucleated cells
Uploaded: 2009-12-31T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Automated Microfluidic Blood Lysis Protocol for Enrichment of Circulating Nucleated Cells at JoVE.com

Forskningen har fått stöd från Wallace H. Coulter stiftelsen tidiga karriär Award i translationell forskning. Tack vare Tim Andrews, Pediatric hematologi / onkologi, för hjälp med blod provtagning. Tack även till Dr Sam Wellhausen, flödescytometri Core, James Graham Brown Cancer Center, för hjälp med att köra prover flödescytometri.

Del 1. Mikroflödessystem Komponentframställning En kisel mästare form av mikroflödessystem lys-enheten skapades med hjälp av vanliga fotolitografiska tekniker med utrustning i University of Louisville renrum [1]. AutoCAD (Autodesk, Inc., San Rafael, Kalifornien) användes för att generera en öppenhet mask (Fineline Imaging, Colorado Springs, CO) för att skapa negativa repliker av kanaler. Den mikroflödessystem lys enhet var tillverkat av kisel mästare formen med mjuka litografiska te...

<ol>
	<li>White, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+application+of+microfluidic+leukocyte+enrichment+protocol+in+mild+phenotype+sickle+cell+disease+(SCD.">Clinical application of microfluidic leukocyte enrichment protocol in mild phenotype sickle cell disease (SCD.</a> Biomedical Microdevices. 11 (2), 477-483 (2009).</li><li>Sethu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+Flow+Microfluidic+Device+for+Rapid+Erythrocyte+Lysis.">Continuous Flow Microfluidic Device for Rapid Erythrocyte Lysis.</a> Anal. Chem. 76 (21), 6247-6253 (2004).</li></ol>

En automatiserad mikroflödessystem blod lys-protokollet har rapporterats. I protokollet är kritiska steg värt att notera. I avsnitt P.2.1 är det viktigt att göra den första blod flaskan som samlats in som provet innehåller rubbas mogna endotelceller agerar som falska positiva. Se också till att driva blodprovet inom en timme efter provtagning. Kontroll av mikroflödessystem enheten i avsnitt P.2.2 är det viktigt att först bli av med bubblor. Dessutom bör man undvika att införa bubblor när du sätter nya spr...

automated microfluidic blood lysis protocol for enrichment of circulating nucleated cells

I denna rapport protokollet för en automatiserad mikroflödessystem blod lys enheten är detaljerad. Cirkulerande celler med kärnor (CNC), inklusive leukocyter och endotelceller, ger en idealisk plattform för en uppdaterad status på immunförsvaret tillstånd en individ. Den mikroflödessystem protokollet tillåter anrikning av CNC-system utan selektiva cell förlust och provberedning variationer beroende på användarens-medierad steg. Kortfattat innehåller Protocol Device tillverkning, provtagning, Enhetsinställningar och köra blod genom mikroflödessystem kammaren. Inom enheten helblod snabbt blandas med avjoniserat vatten i ca 10 sekunder i en 50 micron x 150 micron mikroflödessystem kanal. I denna tidsperiod erytrocyter lyseras på grund av hypoton förhållanden. Herringbone strukturer på botten av kanalen säkerställa omsorgsfull blandning och exponering av celler med en konstant miljö. Resterande celler tillbaka till isoton förhållandena vid utgången av enheten, fast med 2% paraformaldehyd, centrifugeras för att separera erytrocyt skräp från CNC-system, och suspenderade i flödet buffert för färgning och analys med flödescytometri. Resultaten visar rena flödet tomter cytometry scatter med CNC sparade populationer. Betydelsen av denna enhet och protokoll levereras i studien och förståelse för sjukdomen patogenes genom analys av CNC-populationer. Därför är automatisering, effektivitet och enkelhet mikroflödessystem protokollet visade.

Watch this Scientific Journal Video about Automated Microfluidic Blood Lysis Protocol for Enrichment of Circulating Nucleated Cells at JoVE.com

Automated Microfluidic Blood Lysis Protocol for Enrichment of Circulating Nucleated Cells

En automatiserad mikroflödessystem enhet har utvecklats för att pumpa runt kärnförsedda cell anrikning från perifert blod via erytrocyt lys som garanterar isolering av hög kvalitet prov utan cell förlust.

Automatiserad Mikroflödessystem Blod Lysis protokoll för anrikning av cirkulerande celler med kärnor

In this report the protocol for an automated microfluidic blood lysis device is detailed. Circulating nucleated cells (CNCs), including leukocytes and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies

Anrikning av NK-celler från mänskligt blod med RosetteSep Kit från StemCell Technologies

Natural killer (NK) cells are large granular cytotoxic lymphocytes that belong to the innate immune system and play major roles in fighting against cancer ...

Microfluidic Co-culture of Epithelial Cells and Bacteria for Investigating Soluble Signal-mediated Interactions

Mikroflödessystem Co-kultur av epitelceller och bakterier för att utreda Löslig Signal-medierade interaktioner

The human gastrointestinal (GI) tract is a unique environment in which intestinal epithelial cells and non-pathogenic (commensal) bacteria coexist. It has ...

Isolation and Culture of Pulmonary Endothelial Cells from Neonatal Mice

Isolering och odling av pulmonell endotelceller från neonatala möss

Endothelial cells provide a useful research model in many areas of vascular biology. Since its first isolation 1, human umbilical vein endothelial cells ...

Immunofluorescence Analysis of Endogenous and Exogenous Centromere-kinetochore Proteins

Immunofluorescens Analys av endogena och exogena centromer-kinetochore proteiner

"Centromeres" and "kinetochores" refer to the site where chromosomes associate with the spindle during cell division. Direct visualization of ...

Using Microfluidic Devices to Measure Lifespan and Cellular Phenotypes in Single Budding Yeast Cells

Använda mikroflödessystem enheter för att mäta livslängd och Cellular fenotyper i Single Budding jästceller

Budding yeast Saccharomyces cerevisiae is an important model organism in aging research. Genetic studies have revealed many genes with conserved effects ...

A Rapid Automated Protocol for Muscle Fiber Population Analysis in Rat Muscle Cross Sections Using Myosin Heavy Chain Immunohistochemistry

En Rapid Automatiserad Protokoll för Muscle Fiber Population Analysis i råttmuskel Cross sektioner med hjälp tunga kedjan från myosin Immunohistokemi

Quantification of muscle fiber populations provides a deeper insight into the effects of disease, trauma, and various other influences on skeletal muscle ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

En grafisk användargränssnitt för programvaruassisterad spårning av proteinkoncentration i dynamiska cellulära protrusioner

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

A Protocol for Using Gene Set Enrichment Analysis to Identify the Appropriate Animal Model for Translational Research

Ett protokoll för att använda gen Set-anrikning analys identifiera den lämplig djurmodell för translationell forskning

Recent studies that compared transcriptomic datasets of human diseases with datasets from mouse models using traditional gene-to-gene comparison ...

Isolation of CD4+ T-cells and Analysis of Circulating T-follicular Helper (cTfh) Cell Subsets from Peripheral Blood Using 6-color Flow Cytometry

Isolation of CD4+ T-cells and Analysis of Circulating T-follicular Helper cTfh Cell Subsets from Peripheral Blood Using 6-color Flow Cytometry

Isolering av CD4+ T-celler och analys av cirkulerande T-follikulär Helper (cTfh) Cell Subsets från perifert blod använder 6-färg flöda flödescytometri

Aberrant T-follicular helper (Tfh) cell activity is detectable in autoimmune conditions and their presence is associated with clinical outcomes when the ...

Isolation and Enrichment of Human Lung Epithelial Progenitor Cells for Organoid Culture

Isolering och anrikning av humana lungepitelceller för organoidkultur

Epithelial organoid models serve as valuable tools to study the basic biology of an organ system and for disease modeling. When grown as organoids, ...