Name: automated microfluidic blood lysis protocol for enrichment of circulating nucleated cells
Uploaded: 2009-12-31T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Automated Microfluidic Blood Lysis Protocol for Enrichment of Circulating Nucleated Cells at JoVE.com

Araştırma Translasyonel Araştırma Wallace H. Coulter Vakfı Erken Kariyer Ödülü tarafından desteklenmektedir. Tim Andrews, Pediatrik Hematoloji / Onkoloji, kan örneği toplama konusunda yardım için teşekkür ederiz. Ayrıca Dr. Sam Wellhausen, Sitometrisi Core, James Graham Brown Kanser Merkezi, flow sitometri örnekleri çalışan yardım için teşekkürler.

Bölüm 1. Mikroakışkan cihaz imalat Mikroakışkan lizis cihazın bir silikon master kalıp, Louisville temiz Üniversitesi ekipman standart fotolitografik teknikleri kullanılarak yaratıldı [1]. AutoCAD (Autodesk Inc, San Rafael, CA) kanalları negatif kopyaları oluşturmak için bir saydamlık maskesi (Fineline Görüntüleme, Colorado Springs, CO) oluşturmak için kullanılır oldu. Elastomer poli (dimethylsiloxane) (Dow Corning, Midland PDMS) ile yumuşak litografik teknikleri kulla...

<ol>
	<li>White, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+application+of+microfluidic+leukocyte+enrichment+protocol+in+mild+phenotype+sickle+cell+disease+(SCD.">Clinical application of microfluidic leukocyte enrichment protocol in mild phenotype sickle cell disease (SCD.</a> Biomedical Microdevices. 11 (2), 477-483 (2009).</li><li>Sethu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+Flow+Microfluidic+Device+for+Rapid+Erythrocyte+Lysis.">Continuous Flow Microfluidic Device for Rapid Erythrocyte Lysis.</a> Anal. Chem. 76 (21), 6247-6253 (2004).</li></ol>

Otomatik bir mikroakışkan kan lizis protokol bildirilmiştir. Protokol kapsamında fazlalaştı kritik adımlar. P.2.1 bölümü, örnek yerinden olgun endotel hücreleri içeren yanlış pozitif olarak hareket olarak toplanan ilk kan şişe atmak için önemlidir. Ayrıca toplama bir saat içinde kan örneği çalıştırmak için emin olun. Astar bölümü P.2.2 mikroakışkan cihaz, başlangıçta baloncuklar kurtulmak için önemlidir. Ayrıca, bir protokol boyunca iğne şırınga takarken kabarcıkları almaktan...

automated microfluidic blood lysis protocol for enrichment of circulating nucleated cells

Bu raporda, otomatik bir mikroakışkan kan parçalama cihaz için protokol ayrıntılı. Lökosit ve endotel hücreleri içeren çekirdekli hücreleri (CNCs), Sirkülasyon, bireyin bağışıklık durumuna güncelleştirilmiş bir durum için ideal bir platform sağlar. Mikroakışkan protokolü, seçici hücre kaybı ve kullanıcı-aracılı adımları nedeniyle numune hazırlama değişkenliği olmadan CNCs zenginleşmesine olanak sağlar. Kısaca, protokol cihaz imalat, örnek toplama, cihaz kurulumu ve mikroakışkan haznesinden kan çalıştıran içerir. Cihaz içinde tam kan hızla yaklaşık 10 saniye 50 mikron x 150 mikron mikroakışkan kanal için deiyonize su ile karıştırılır. Bu süre içinde a eritrositlerin hipotonik koşulları nedeniyle parçalanmış. Kanalın alt Herringbone yapıları tam karıştırma ve sabit bir ortama hücreleri maruz kalma sağlar. Kalan hücreleri izotonik koşulları, cihazın çıkışında iade, 2% paraformaldehid kullanarak sabit CNCs eritrosit enkaz ayırmak için santrifüj ve akışı, tampon boyama ve flow sitometri ile analiz için askıya. Sonuçlar kaydedilir CNC nüfusa sahip temiz akış sitometri dağılım araziler göstermektedir. Bu cihaz ve protokol önemi CNC popülasyonlarının analizi ile hastalığın patogenezinde çalışma ve anlayış geliyor. Bu nedenle, otomasyon, etkinliği ve mikroakışkan protokol basitliği göstermiştir.

Watch this Scientific Journal Video about Automated Microfluidic Blood Lysis Protocol for Enrichment of Circulating Nucleated Cells at JoVE.com

Automated Microfluidic Blood Lysis Protocol for Enrichment of Circulating Nucleated Cells

Çekirdekli hücre zenginleştirme hücre kaybı olmadan yüksek kaliteli örnek izolasyonu sağlar eritrosit lizis ile periferik kan dolaşımını sağlamak için otomatik bir mikroakışkan cihaz geliştirildi.

Çekirdekli Hücreler Sirkülasyon zenginleştirilmesi için Otomatik mikroakışkan Kan Lizis Protokolü

In this report the protocol for an automated microfluidic blood lysis device is detailed. Circulating nucleated cells (CNCs), including leukocytes and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies

İnsan Kanı StemCell Teknolojileri RosetteSep Kit ile gelen NK Hücreleri zenginleştirilmesi

Natural killer (NK) cells are large granular cytotoxic lymphocytes that belong to the innate immune system and play major roles in fighting against cancer ...

Biyoloji

Microfluidic Applications for Disposable Diagnostics

Tek kullanımlık Diagnostics mikroakışkan Uygulamaları

In this interview, Dr. Klapperich discusses the fabrication of thermoplastic microfluidic devices and their application for development of new ...

Microfluidic Co-culture of Epithelial Cells and Bacteria for Investigating Soluble Signal-mediated Interactions

Çözünür Sinyal aracılı Etkileşimleri Araştırılması için Epitel Hücreleri ve Bakteriler mikroakışkan Co-kültür

The human gastrointestinal (GI) tract is a unique environment in which intestinal epithelial cells and non-pathogenic (commensal) bacteria coexist. It has ...

Isolation and Culture of Pulmonary Endothelial Cells from Neonatal Mice

Yenidoğan Fareler Pulmoner Endotel Hücreleri İzolasyon ve Kültür

Endothelial cells provide a useful research model in many areas of vascular biology. Since its first isolation 1, human umbilical vein endothelial cells ...

Generation and Culture of Blood Outgrowth Endothelial Cells from Human Peripheral Blood

İnsan çevresel kanından üretilmesi ve kültür Blood üremesi Endotel Hücreleri

Historically, the limited availability of primary endothelial cells from patients with vascular disorders has hindered the study of the molecular ...

Immunofluorescence Analysis of Endogenous and Exogenous Centromere-kinetochore Proteins

Endojen ve İmmünofloresan Analizi ve Eksojen Sentromer-kinetochore Proteinler

"Centromeres" and "kinetochores" refer to the site where chromosomes associate with the spindle during cell division. Direct visualization of ...

Using Microfluidic Devices to Measure Lifespan and Cellular Phenotypes in Single Budding Yeast Cells

Mikroakışkan Aygıtlar Kullanma Tek Budding Maya Hücreleri ömrü ve Hücresel fenotipleri Ölçmek için

Budding yeast Saccharomyces cerevisiae is an important model organism in aging research. Genetic studies have revealed many genes with conserved effects ...

A Rapid Automated Protocol for Muscle Fiber Population Analysis in Rat Muscle Cross Sections Using Myosin Heavy Chain Immunohistochemistry

Miyosin Ağır Zincir İmünohistokimya kullanma Sıçan kas Çapraz Bölüm kas Elyaf Nüfus Analizi İçin Hızlı Otomatik Protokolü

Quantification of muscle fiber populations provides a deeper insight into the effects of disease, trauma, and various other influences on skeletal muscle ...

A Protocol for Using Gene Set Enrichment Analysis to Identify the Appropriate Animal Model for Translational Research

Gen kullanmak için bir protokol translasyonel araştırma için uygun hayvan modeli belirlemek için zenginleştirme çözümlemesi ayarla

Recent studies that compared transcriptomic datasets of human diseases with datasets from mouse models using traditional gene-to-gene comparison ...

Isolation of CD4+ T-cells and Analysis of Circulating T-follicular Helper (cTfh) Cell Subsets from Peripheral Blood Using 6-color Flow Cytometry

Isolation of CD4+ T-cells and Analysis of Circulating T-follicular Helper cTfh Cell Subsets from Peripheral Blood Using 6-color Flow Cytometry

CD4 yalıtım+ T-hücreleri ve T foliküler Yardımcısı (cTfh) hücre alt kümeleri üzerinden periferik kan kullanarak 6-renk Akış Sitometresi Analizi, dolaşan

Aberrant T-follicular helper (Tfh) cell activity is detectable in autoimmune conditions and their presence is associated with clinical outcomes when the ...