Name: obtaining hemocytes from the hawaiian bobtail squid euprymna scolopes and observing their adherence to symbiotic and non-symbiotic bacteria
Uploaded: 2010-02-11T04:52:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Obtaining Hemocytes from the Hawaiian Bobtail Squid Euprymna scolopes and Observing their Adherence to Symbiotic and Non-Symbiotic Bacteria at JoVE.com

Les sources de financement: Université du Connecticut Research Foundation et le Département de Biologie Moléculaire et Cellulaire à SVN, Sigma Xi Grant-in-Aid de recherche et Antonio H. et R. Majorie Romano Graduate Education Fellowship pour AJC

<ol><li> Préparer 500 ml de 0,22 um, stérilisée par filtration d&#39;eau de mer artificielle (FSW; salinité 35 ppt). Filtre d&#39;eau de mer artificielle ou naturelle à travers un filtre de 0,22 micron um pour éliminer les particules et les bactéries. </li><li> Anesthetize un adulte Hawaiian bobtail squid (Euprymna scolopes) en le plaçant dans une solution à 2% d&#39;éthanol dans FSW. Placez l&#39;animal dans l&#39;anesthésie pendant environ 10 minutes. Le calmar cessera de natation et ne sera pas répondre activement au tou...

<ol>
	<li>Koropatnick, T. A., Kimbell, J. R., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+of+host+hemocytes+during+the+initiation+of+the+squid-Vibrio+symbiosis.">Responses of host hemocytes during the initiation of the squid-Vibrio symbiosis.</a> Biol. Bull. 212, 29-39 (2007).</li><li>McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unseen+forces:+the+influence+of+bacteria+on+animal+development.">Unseen forces: the influence of bacteria on animal development.</a> Dev. Biol. 242, 1-14 (2002).</li><li>McFall-Ngai, M. J., Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symbiont+recognition+and+subsequent+morphogenesis+as+early+events+in+an+animal-bacterial+mutualism.">Symbiont recognition and subsequent morphogenesis as early events in an animal-bacterial mutualism.</a> Science. 254, 1491-1494 (1991).</li><li>Nyholm, S. V., Stewart, J. J., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recognition+between+symbiotic+Vibrio+fischeri+and+the+haemocytes+of+Euprymna+scolopes.">Recognition between symbiotic Vibrio fischeri and the haemocytes of Euprymna scolopes.</a> Environ. Microbiol. 11, 483-493 (2009).</li><li>Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+winnowing:+establishing+the+squid-Vibrio+symbiosis.">The winnowing: establishing the squid-Vibrio symbiosis.</a> Nat. Rev. Microbiol. 2, 632-642 (2004).</li><li>Nyholm, S. V., Stabb, E. V., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+an+animal-bacterial+association:+recruiting+symbiotic+Vibrios+from+the+environment.">Establishment of an animal-bacterial association: recruiting symbiotic Vibrios from the environment.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 97, 10231-10235 (2000).</li><li>Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sampling+the+light-organ+microenvironment+of+Euprymna+scolopes:+description+of+a+population+of+host+cells+in+association+with+the+bacterial+symbiont+Vibrio+fischeri.">Sampling the light-organ microenvironment of Euprymna scolopes: description of a population of host cells in association with the bacterial symbiont Vibrio fischeri.</a> Biol Bull. 195, 89-97 (1998).</li><li>Visick, K. L., Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vibrio+fischeri+and+its+host:+it+takes+two+to+tango.">Vibrio fischeri and its host: it takes two to tango.</a> Curr. Opin. Microbiol. 9, 632-638 (2006).</li></ol>

Les études concernant le rôle du système immunitaire dans la médiation de la signalisation moléculaire entre les bactéries bénéfiques et leurs hôtes ont, ces dernières années, apporté une contribution significative à notre compréhension de la co-évolution des eucaryotes avec leur microflore. Le système squid / vibrion a fait ses preuves en tant que système modèle souple pour répondre aux questions fondamentales dans ce domaine 2,3,5,6,8. La lumière de l&#39;organe de scolopes calm...

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		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Lab-Tek chambered #1.0 borosilicate coverglass system (8-chambers)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo-Fisher Scientific</td>
<td>155411</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>26.5 G 1ml latex-free insulin syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Becton, Dickinson and Company</td>
<td>C34551</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell Tracker Orange</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>C34551</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>SteREO Discovery V20 Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Zeiss</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>SP2 Confocal Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

obtaining hemocytes from the hawaiian bobtail squid euprymna scolopes and observing their adherence to symbiotic and non-symbiotic bacteria

Les études concernant le rôle du système immunitaire dans la médiation de la signalisation moléculaire entre les bactéries bénéfiques et leurs hôtes ont, ces dernières années, apporté une contribution significative à notre compréhension de la co-évolution des eucaryotes avec leur microflore. L&#39;association symbiotique entre les calmars Hawaiian Bobtail,<em&gt; Scolopes Euprymna</em&gt; Et la bactérie bioluminescente<em&gt; Vibrio fischeri</em&gt; A été utilisé comme un système modèle pour comprendre les effets des bactéries bénéfiques sur le développement des animaux. Des études récentes ont montré que les macrophages, comme hémocytes, la seule composante innée cellulaire de l&#39;hôte calmar système immunitaire, jouent probablement un rôle important dans la médiation de l&#39;établissement et le maintien de cette association. Ce protocole va montrer comment obtenir des hémocytes de<em&gt; E. scolopes</em&gt; Et ensuite utiliser ces cellules dans des dosages de liaison bactérienne. Adulte calmars sont d&#39;abord anesthésiés avant d&#39;hémolymphe est recueillie par une seringue par le vaisseau sanguin principal céphalique. Les hémocytes hôte, contenues dans l&#39;hémolymphe extraites, sont respectées lamelles de verre cloisonné et ensuite exposés à la protéine fluorescente verte marquée symbiotique<em&gt; Vibrio fischeri</em&gt; Et non-symbiotique<em&gt; Vibrio harveyi</em&gt;. Les hémocytes sont contre avec un colorant fluorescent (Cell Tracker Orange, Invitrogen), puis visualisé par microscopie fluorescente.

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Obtaining Hemocytes from the Hawaiian Bobtail Squid Euprymna scolopes and Observing their Adherence to Symbiotic and Non-Symbiotic Bacteria

Cette vidéo vous montrera comment obtenir des hémocytes (cellules sanguines) de l&#39;Hawaiian calmars bobtail,<em&gt; Scolopes Euprymna</em&gt; Pour une utilisation dans des dosages biologiques et d&#39;adhésion cellulaire bactérienne. Hémocytes seront colorées avec un colorant fluorescent et exposés à la GFP-étiquetée bactéries.

Obtention hémocytes de l&#39;Hawaiian Bobtail Squid Scolopes Euprymna Et en observant leur adhésion aux bactéries symbiotiques et non symbiotiques

Studies concerning the role of the immune system in mediating molecular signaling between beneficial bacteria and their hosts have, in recent years, made ...

Research

JoVE Journal

Biology

Obtaining Hemocytes from the Hawaiian Bobtail Squid Euprymna scolopes and Observing their Adherence to Symbiotic and Non-Symbiotic Bacteria

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The eggs of Xenopus laevis intact, lysed, and/or fractionated are useful for a wide variety of experiments. This protocol shows how to induce egg laying, ...

Recherche

Biologie

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Obtention d&#39;ARN de haute qualité provenant des populations cellule unique de tissus post-mortem du cerveau de l&#39;homme

We proposed to investigate the gray matter reduction in the superior temporal gyrus seen in schizophrenia patients, by interrogating gene expression ...

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Un procédé d&#39;extraction Pigments de Squid<em&gt; Doryteuthis pealeii</em

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Isolement de myocytes auriculaires et ventriculaires murins de haute qualité pour des mesures simultanées des transitoires Ca2+ et du courant calcique de type L

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