Name: imaging mismatch repair and cellular responses to dna damage in bacillus subtilis
Uploaded: 2010-02-08T17:30:00
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लेखकों के लिए डीआरएस का धन्यवाद करना चाहते हैं. Philina एस ली और शुरू में प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी में लास प्रशिक्षण के लिए एलन डी. ग्रॉसमैन. लेखकों को भी डीआरएस धन्यवाद. मेलानी Berkmen और इमेजिंग के लिए मदद और सुझावों के लिए Hajime कोबायाशी. यह काम साहित्य, विज्ञान और कला के कॉलेज से और मिशिगन विश्वविद्यालय में आण्विक सेलुलर, और विकासात्मक जीवविज्ञान विभाग से शुरू हुआ धन के द्वारा समर्थित किया गया था.

माइक्रोस्कोपी के लिए कोशिकाओं के बढ़ते संस्कृतियों 1. इमेजिंग के लिए पहले एक या दो दिन, बी तैयार subtilis आप कल्पना करना चाहते हैं translational संलयन प्रोटीन युक्त तनाव. कदम 1A और 1B के ट्रायल के दौर जो ?...

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	<li>Hardwood, C. R., Cutting, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Biological Methods for Bacillus. , (1990).</li><li>Berkmen, M. B., Grossman, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+and+temporal+organization+of+the+Bacillus+subtilis+replication+cycle.">Spatial and temporal organization of the Bacillus subtilis replication cycle.</a> Mol. Microbiol. 62, 57-71 (2006).</li><li>Simmons, L. A., Grossman, A. D., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clp+and+Lon+proteases+occupy+distinct+subcellular+positions+in+Bacillus+subtilis.">Clp and Lon proteases occupy distinct subcellular positions in Bacillus subtilis.</a> J. Bacteriol. 190, 6758-6768 (2008).</li><li>Simmons, L. A., Grossman, A. D., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replication+is+required+for+the+RecA+localization+response+to+DNA+damage+in+Bacillus+subtilis.">Replication is required for the RecA localization response to DNA damage in Bacillus subtilis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 104, 1360-1365 (2007).</li><li>Simmons, L. A., Davies, B. W., Grossman, A. D., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=b+Clamp+Directs+Localization+of+Mismatch+Repair+in+Bacillus+subtilis.">b Clamp Directs Localization of Mismatch Repair in Bacillus subtilis.</a> Mol. Cell. 29, 291-301 (2008).</li><li>Simmons, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+responses+to+double-strand+breaks+between+Escherichia+coli+and+Bacillus+subtilis+reveals+different+requirements+for+SOS+induction.">Comparison of responses to double-strand breaks between Escherichia coli and Bacillus subtilis reveals different requirements for SOS induction.</a> J. Bacteriol. 191, 1152-1161 (2009).</li><li>Smith, B. T., Grossman, A. D., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+mismatch+repair+in+bacterial+cells.">Visualization of mismatch repair in bacterial cells.</a> Mol. Cell. 8, 1197-1206 (2001).</li></ol>

परीक्षण और त्रुटि के लिए प्रत्येक तनाव के लिए उच्चतम गुणवत्ता छवियों के लिए जोखिम की स्थिति को खोजने के लिए आवश्यक हैं, हम पाते हैं कि एक millisecond सफेद प्रकाश छवियों के लिए उपयुक्त है, जबकि 100 से 2000 एमएस के जोख?...

विशिष्ट समाधान 1 व्यंजनों: 10x S7 के 50 लवण 0.5 एम MOPS 100 मिमी अमोनियम सल्फेट 50 मिमी पोटेशियम फॉस्फेट अकेले आधार का बाँझ फ़िल्टर, और लपेटो पन्नी में 50 मीडिया के भंडारण के लिए पहले S7 100x धातु 0.2 एम 2 MgCl 70 मिमी 2 CaCl 5 मिमी 2 MnCl 0.1 मिमी 2 ZnCl 100 μg / एमएल Thiamine एचसीएल 2 मिमी एचसीएल 0.5 मिमी 3 FeCl * DH 2 अंतिम मात्रा ओ * 3 FeCl पिछले जोड़ा जाना चाहिए, वर्षा को रोकने के. फिल्टर नसबंदी के बाद, पन्नी में लपेटो 100x धातु समाधान. S7 के 50 मीडिया 1x 50 लवण S7 1x धातु 1% ग्लूकोज 0.1% ग्लूटामेट 40 μg / एमएल Tryptophan 40 μg / एमएल फेनिलएलनिन आसुत एच 2 अंतिम मात्रा करने के लिए हे 10x Spizizens (ग्राम एल /) 151.4 मिमी अमोनियम सल्फेट (20g / एल) 803.8 मिमी पोटेशियम फॉस्फेट अकेले आधार का (140g / एल) 440.9 मिमी पोटेशियम फॉस्फेट Dibasic (60g / एल) 34.0 मिमी सोडियम साइट्रेट (10g / एल) 16.6 मिमी MgSO 4 (2 जी / एल) DH 2 अंतिम मात्रा ओ बाँझ फ़िल्टर

imaging mismatch repair and cellular responses to dna damage in bacillus subtilis

दोनों prokaryotes और eukaryotes शारीरिक परिवर्तनों का एक जटिल सेट के माध्यम से डीएनए की क्षति का जवाब. जीन अभिव्यक्ति, मौजूदा प्रोटीन के पुनर्वितरण, और नए प्रोटीन परिसरों की विधानसभा में बदलाव डीएनए घावों और बेमेल डीएनए आधार जोड़े की एक किस्म के द्वारा प्रेरित किया जा सकता है. प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी visualizing और बढ़ाता डीएनए घावों और जटिल subcellular वास्तुकला के भीतर एक जीवित कोशिका के डीएनए प्रतिकृति स्थिति की निगरानी के लिए इन और अन्य प्रतिक्रियाओं के लिए एक शक्तिशाली प्रायोगिक उपकरण के रूप में इस्तेमाल किया गया है. यह फ्लोरोसेंट संवाददाता प्रोटीन और डीएनए प्रतिकृति और मशीनरी की मरम्मत के घटकों के बीच translational fusions cues निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया गया है कि लक्ष्य डीएनए उनके आत्मीय घावों की मरम्मत प्रोटीन<em&gt; Vivo में</em&gt; और समझने के लिए कैसे इन प्रोटीनों बैक्टीरियल कोशिकाओं के भीतर का आयोजन कर रहे हैं. इसके अलावा, transcriptional और translational डीएनए क्षति inducible प्रमोटरों से जुड़े fusions से पता चला है जो आबादी के भीतर कोशिकाओं genotoxic तनाव प्रतिक्रियाओं सक्रिय है. इस समीक्षा में, हम प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग एकल बैक्टीरियल कोशिकाओं में डीएनए की मरम्मत और डीएनए प्रतिकृति परिसरों के विधानसभा छवि के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं. विशेष रूप में, इस काम बेमेल मरम्मत प्रोटीन इमेजिंग, मुताबिक़ पुनर्संयोजन, डीएनए प्रतिकृति और एक मुसीबत का इशारा inducible प्रोटीन में पर ध्यान केंद्रित<em&gt; बेसिलस subtilis</em&gt;. यहाँ वर्णित प्रक्रियाओं के सभी आसानी से इमेजिंग बैक्टीरियल प्रजातियों की एक किस्म में प्रोटीन परिसरों के लिए उत्तरदायी हैं.

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Imaging Mismatch Repair and Cellular Responses to DNA Damage in Bacillus subtilis

एक विस्तृत प्रोटोकॉल इमेजिंग के लिए डीएनए की मरम्मत परिसरों के वास्तविक समय में गठन में वर्णित है<em&gt; बेसिलस subtilis</em&gt; कोशिकाओं.

इमेजिंग बेमेल मरम्मत और डीएनए में नुकसान के लिए सेलुलर प्रतिक्रियाएँ बेसिलस subtilis</em

Both prokaryotes and eukaryotes respond to DNA damage through a complex set of physiological changes. Alterations in gene expression, the redistribution ...

Research

JoVE Journal

Biology

Imaging Mismatch Repair and Cellular Responses to DNA Damage in Bacillus subtilis

Two- and Three-Dimensional Live Cell Imaging of DNA Damage Response Proteins

दो और तीन आयामी डीएनए क्षति प्रतिक्रिया प्रोटीन की लाइव सेल इमेजिंग

Double-strand breaks (DSBs) are the most deleterious DNA lesions a cell can encounter. If left unrepaired, DSBs harbor great potential to generate ...

Imaging Cell Membrane Injury and Subcellular Processes Involved in Repair

इमेजिंग सेल झिल्ली चोट और मरम्मत में शामिल Subcellular प्रक्रियाओं

The ability of injured cells to heal is a fundamental cellular process, but cellular and molecular mechanisms involved in healing injured cells are poorly ...

Real-time Imaging of Single Engineered RNA Transcripts in Living Cells Using Ratiometric Bimolecular Beacons

Ratiometric bimolecular संकेतकों का उपयोग जीवित कोशिकाओं में एकल इंजीनियर शाही सेना टेप के वास्तविक समय इमेजिंग

The growing realization that both the temporal and spatial regulation of gene expression can have important consequences on cell function has led to the ...

gDNA Enrichment by a Transposase-based Technology for NGS Analysis of the Whole Sequence of BRCA1, BRCA2, and 9 Genes Involved in DNA Damage Repair

gDNA Enrichment by a Transposase-based Technology for NGS Analysis of the Whole Sequence of BRCA1, BRCA2, and 9 Genes Involved in DNA Damage Repair

के पूरे दृश्य की NGS विश्लेषण के लिए एक Transposase आधारित प्रौद्योगिकी द्वारा gDNA संवर्धन<em&gt; बीआरसीए 1</em&gt;,<em&gt; बीआरसीए 2</emडीएनए क्षति की मरम्मत में शामिल&gt;, और 9 जीन

The widespread use of Next Generation Sequencing has opened up new avenues for cancer research and diagnosis. NGS will bring huge amounts of new data on ...

Visualization of miniSOG Tagged DNA Repair Proteins in Combination with Electron Spectroscopic Imaging (ESI)

Visualization of miniSOG Tagged DNA Repair Proteins in Combination with Electron Spectroscopic Imaging ESI

इलेक्ट्रॉन स्पेक्ट्रोस्कोपी इमेजिंग के साथ संयोजन में miniSOG गईं डीएनए मरम्मत प्रोटीन के दृश्य (ईएसआई)

The limits to optical resolution and the challenge of identifying specific protein populations in transmission electron microscopy have been obstacles in ...

Measuring DNA Damage and Repair in Mouse Splenocytes After Chronic In Vivo Exposure to Very Low Doses of Beta- and Gamma-Radiation

Measuring DNA Damage and Repair in Mouse Splenocytes After Chronic In Vivo Exposure to Very Low Doses of Beta- and Gamma-Radiation

जीर्ण बाद माउस Splenocytes डीएनए में नुकसान और मरम्मत मापने<em&gt; Vivo</em&gt; बीटा और गामा विकिरण की बहुत कम मात्रा के संपर्क में

Low dose radiation exposure may produce a variety of biological effects that are different in quantity and quality from the effects produced by high ...

Genome-wide Mapping of Drug-DNA Interactions in Cells with COSMIC (Crosslinking of Small Molecules to Isolate Chromatin)

Genome-wide Mapping of Drug-DNA Interactions in Cells with COSMIC Crosslinking of Small Molecules to Isolate Chromatin

लौकिक के साथ कोशिकाओं में ड्रग-डीएनए सहभागिता के जीनोम चौड़ा मानचित्रण (छोटे अणुओं की crosslinking Chromatin को अलग करने के लिए)

The genome is the target of some of the most effective chemotherapeutics, but most of these drugs lack DNA sequence specificity, which leads to ...

In Vivo Alkaline Comet Assay and Enzyme-modified Alkaline Comet Assay for Measuring DNA Strand Breaks and Oxidative DNA Damage in Rat Liver

In Vivo Alkaline Comet Assay and Enzyme-modified Alkaline Comet Assay for Measuring DNA Strand Breaks and Oxidative DNA Damage in Rat Liver

मापने डीएनए किनारा टूट जाता है और ऑक्सीडेटिव डीएनए में नुकसान चूहा जिगर में विवो क्षारीय धूमकेतु परख और एंजाइम संशोधित क्षारीय धूमकेतु परख में

Unrepaired DNA damage can lead to genetic instability, which in turn may enhance cancer development. Therefore, identifying potential DNA damaging agents ...

Investigating the Detrimental Effects of Low Pressure Plasma Sterilization on the Survival of Bacillus subtilis Spores Using Live Cell Microscopy

Investigating the Detrimental Effects of Low Pressure Plasma Sterilization on the Survival of Bacillus subtilis Spores Using Live Cell Microscopy

लाइव सेल माइक्रोस्कोपी का उपयोग कर बैसिलस सबटिलिस बीजाणुओं के अस्तित्व पर कम दबाव प्लाज्मा नसबंदी के हानिकारक प्रभावों की जांच

Plasma sterilization is a promising alternative to conventional sterilization methods for industrial, clinical, and spaceflight purposes. Low pressure ...

Single-cell Microfluidic Analysis of Bacillus subtilis

Single-cell Microfluidic Analysis of Bacillus subtilis

बैसिलस सबटिलिस के एकल-कक्ष Microfluidic विश्लेषण

Microfluidic technology overcomes many of the limitations to traditional analytical methods in microbiology. Unlike bulk-culture methods, it offers ...