Name: imaging mismatch repair and cellular responses to dna damage in bacillus subtilis
Uploaded: 2010-02-08T17:30:00
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저자 DRS 감사하고 싶습니다. 처음 형광 현미경으로 마이크로 훈련을위한 Philina S. 리 앨런 D. 그로스맨. 저자는 또한 DRS 감사합니다. 도움말 및 팁 이미징 용 멜라니 Berkmen와 하지메 고바야시. 이 작품은 문학, 과학 예술 대학에서와 미시간 대학에서 분자 세포 및 발달 생물학의학과에서 자금 업을 시작하여 지원했다.

현미경에 대한 세포의 성장 문화 1. 하루나 이틀 전에 영상에, B. 준비 subtilis는 시각화하려는 translational 융합 단백질을 포함하는 변형. 단계 1A와 1B의 평가판 반올림 성장 상태가 변형 최고의 영상을 제공하는 결정하기 위해 필요합니다. 대부분의 경우, 세포는 지수 성장 단계에서 몇 군데해야합니다. <ol class="ualpha"><li> 일부 B. 들어 subtilis의 변종 (때문에 ...

<ol>
	<li>Hardwood, C. R., Cutting, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Biological Methods for Bacillus. , (1990).</li><li>Berkmen, M. B., Grossman, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+and+temporal+organization+of+the+Bacillus+subtilis+replication+cycle.">Spatial and temporal organization of the Bacillus subtilis replication cycle.</a> Mol. Microbiol. 62, 57-71 (2006).</li><li>Simmons, L. A., Grossman, A. D., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clp+and+Lon+proteases+occupy+distinct+subcellular+positions+in+Bacillus+subtilis.">Clp and Lon proteases occupy distinct subcellular positions in Bacillus subtilis.</a> J. Bacteriol. 190, 6758-6768 (2008).</li><li>Simmons, L. A., Grossman, A. D., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replication+is+required+for+the+RecA+localization+response+to+DNA+damage+in+Bacillus+subtilis.">Replication is required for the RecA localization response to DNA damage in Bacillus subtilis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 104, 1360-1365 (2007).</li><li>Simmons, L. A., Davies, B. W., Grossman, A. D., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=b+Clamp+Directs+Localization+of+Mismatch+Repair+in+Bacillus+subtilis.">b Clamp Directs Localization of Mismatch Repair in Bacillus subtilis.</a> Mol. Cell. 29, 291-301 (2008).</li><li>Simmons, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+responses+to+double-strand+breaks+between+Escherichia+coli+and+Bacillus+subtilis+reveals+different+requirements+for+SOS+induction.">Comparison of responses to double-strand breaks between Escherichia coli and Bacillus subtilis reveals different requirements for SOS induction.</a> J. Bacteriol. 191, 1152-1161 (2009).</li><li>Smith, B. T., Grossman, A. D., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+mismatch+repair+in+bacterial+cells.">Visualization of mismatch repair in bacterial cells.</a> Mol. Cell. 8, 1197-1206 (2001).</li></ol>

시행 착오는 각 변형에 대한 최고 품질의 이미지에 대한 노출 조건을 찾을 필요, 100-2000 MS의 노출은 GFP (FITC)와 FM4 - 64에 적합한 반면 우리는 1 밀리초는 하얀 빛을 이미지에 적합한 것을 발견 (TRITC ) 이미지. 노출 시간은 사용되는 이미징 장비에 따라 달라집니다. 여러 변종이 동일한 슬라이드에있는 경우에는 패드 국경에서 세포의 패드 품질과 확산은 스트레인 차별 복잡있을 수 있기 때문에 우리?...

특정 솔루션 조리법 1 : 10X S7 50 염 0.5 M의 맙스 100 MM의 질산 황산 50 MM 인산 칼륨 일염기의 소독 필터, 사전 스토리지 포장 S7 박 50 미디어 100x 금속 0.2 M MgCl 2 70 MM CaCl 2 5 MM MnCl 2 0.1 MM ZnCl 2 100 μg / ML 티아민 HCL 이 MM HCL 0.5 MM FeCl 3 * 최종 볼륨 DH 2 O * FeCl 3 석출을 방지하기 위해, 마지막으로 추가되어야합니다. 호일에 필터 살균 후, 랩 100x 금속 솔루션입니다. S7 50 미디어 1X S7 50 염 1X 메탈 1 % 포도당 0.1 %의 글루 탐 산염 40 μg / ML 트립토판 40 μg / ML 페닐알라닌 최종 볼륨에 소주 H 2 O 10X Spizizens (g / L) 151.4 MM의 질산 황산 (20g / L) 803.8 MM 인산 칼륨 일염기의 (140g / L) 440.9 MM 인산 칼륨 이염 (60g / L) 34.0 MM 나트륨 구연 산염 (10g / L) 16.6 MM MgSO 4 (2g / L) 최종 볼륨 DH 2 O 소독 필터

imaging mismatch repair and cellular responses to dna damage in bacillus subtilis

모두 prokaryotes와 eukaryotes는 생리적 변화 복잡한 설정을 통해 DNA 손상에 대응. 유전자 표현, 기존의 단백질의 재배포, 새로운 단백질 단지의 어셈블리에 변경이 DNA의 병변과 일치하지 않는 DNA 기본 쌍 다양한 자극에 의​​해 수 있습니다. 형광 현미경은 DNA의 병변과 살아있는 세포의 복잡한 subcellular 구조 내의 DNA 복제 상태를 모니터링하기 위해 이러한 행위나 기타 가능한 답변을 시각화하고 quantifying을위한 강력한 실험 도구로 사용되고 있습니다. 형광 기자 단백질과 DNA 복제 및 복구 기계의 구성 요소 사이의 Translational fusions는 단서를 결정하는 데 사용되었다는 그들의 동족의 병변을 대상 DNA 수리 단백질<em&gt; 생체내에</em&gt; 이러한 단백질이 세균의 세포 내에 구성되는 방법을 이해합니다. 또한, DNA의 손상 inducible의 발기인에 연결되어 transcriptional과 translational fusions는 인구 내에서 세포가 genotoxic 스트레스 반응을 활성화하는 공개했습니다. 이 리뷰에서는, 우리는 이미지를 DNA 수리 및 단일 박테리아 세포의 DNA 복제 단지의 어셈블리를 형광 현미경을 사용하여에 대한 자세한 프로토콜을 제공합니다. 특히,이 작품은 영상 불일치 복구 단백질, 상동 재조합, DNA 복제 및 SOS - inducible 단백질에 초점을 맞추고<em&gt; 바실러스 subtilis</em&gt;. 여기에서 설명한 절차의 모든 세균 종의 다양한 영상 단백질 단지에 대해 쉽게 의무가 있습니다.

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Imaging Mismatch Repair and Cellular Responses to DNA Damage in Bacillus subtilis

자세한 프로토콜은 이미징을 위해 DNA 수리 단지의 실시간 형성을 설명<em&gt; 바실러스 subtilis</em&gt; 세포.

이미징 불일치 복구 및 DNA의 손상 세포 응답 바실러스 subtilis</em

Both prokaryotes and eukaryotes respond to DNA damage through a complex set of physiological changes. Alterations in gene expression, the redistribution ...

Research

JoVE Journal

Biology

Imaging Mismatch Repair and Cellular Responses to DNA Damage in Bacillus subtilis

Two- and Three-Dimensional Live Cell Imaging of DNA Damage Response Proteins

DNA의 손상 응답 단백질의 2와 3 차원 라이브 셀 이미징

Double-strand breaks (DSBs) are the most deleterious DNA lesions a cell can encounter. If left unrepaired, DSBs harbor great potential to generate ...

연구

생물학

Imaging Cell Membrane Injury and Subcellular Processes Involved in Repair

이미징 세포 막 상해 및 수리에 관여하는 세포 내 프로세스

The ability of injured cells to heal is a fundamental cellular process, but cellular and molecular mechanisms involved in healing injured cells are poorly ...

Real-time Imaging of Single Engineered RNA Transcripts in Living Cells Using Ratiometric Bimolecular Beacons

비례 생체 분자 비콘을 사용하여 살아있는 세포의 단일 엔지니어링 RNA 성적 증명서의 실시간 영상

The growing realization that both the temporal and spatial regulation of gene expression can have important consequences on cell function has led to the ...

gDNA Enrichment by a Transposase-based Technology for NGS Analysis of the Whole Sequence of BRCA1, BRCA2, and 9 Genes Involved in DNA Damage Repair

gDNA Enrichment by a Transposase-based Technology for NGS Analysis of the Whole Sequence of BRCA1, BRCA2, and 9 Genes Involved in DNA Damage Repair

의 전체 순서의 NGS 분석을위한 Transposase 기반 기술에 의해 gDNA를 농축<em&gt; BRCA1</em&gt;<em&gt; BRCA2</emDNA 손상 복구에 참여&gt;, 9 유전자

The widespread use of Next Generation Sequencing has opened up new avenues for cancer research and diagnosis. NGS will bring huge amounts of new data on ...

Visualization of miniSOG Tagged DNA Repair Proteins in Combination with Electron Spectroscopic Imaging (ESI)

Visualization of miniSOG Tagged DNA Repair Proteins in Combination with Electron Spectroscopic Imaging ESI

전자 분광 이미징과 결합 miniSOG 태그 DNA 복구 단백질의 시각화 (ESI)

The limits to optical resolution and the challenge of identifying specific protein populations in transmission electron microscopy have been obstacles in ...

Measuring DNA Damage and Repair in Mouse Splenocytes After Chronic In Vivo Exposure to Very Low Doses of Beta- and Gamma-Radiation

Measuring DNA Damage and Repair in Mouse Splenocytes After Chronic In Vivo Exposure to Very Low Doses of Beta- and Gamma-Radiation

만성 후 마우스 비장 세포에서 DNA 손상 및 복구를 측정<em&gt; 생체</em&gt; 베타와 감마 방사선의 매우 낮은 복용량에 노출

Low dose radiation exposure may produce a variety of biological effects that are different in quantity and quality from the effects produced by high ...

Genome-wide Mapping of Drug-DNA Interactions in Cells with COSMIC (Crosslinking of Small Molecules to Isolate Chromatin)

Genome-wide Mapping of Drug-DNA Interactions in Cells with COSMIC Crosslinking of Small Molecules to Isolate Chromatin

COSMIC와 세포의 약물-DNA 상호 작용의 게놈 넓은 매핑 (작은 분자의 가교는 염색질을 분리)

The genome is the target of some of the most effective chemotherapeutics, but most of these drugs lack DNA sequence specificity, which leads to ...

In Vivo Alkaline Comet Assay and Enzyme-modified Alkaline Comet Assay for Measuring DNA Strand Breaks and Oxidative DNA Damage in Rat Liver

In Vivo Alkaline Comet Assay and Enzyme-modified Alkaline Comet Assay for Measuring DNA Strand Breaks and Oxidative DNA Damage in Rat Liver

쥐 간에서 DNA 가닥 나누기 및 산화 적 DNA 손상을 측정하기위한 생체 알카라인 혜성 분석 및 효소 수정 알카라인 혜성 분석에서

Unrepaired DNA damage can lead to genetic instability, which in turn may enhance cancer development. Therefore, identifying potential DNA damaging agents ...

Investigating the Detrimental Effects of Low Pressure Plasma Sterilization on the Survival of Bacillus subtilis Spores Using Live Cell Microscopy

Investigating the Detrimental Effects of Low Pressure Plasma Sterilization on the Survival of Bacillus subtilis Spores Using Live Cell Microscopy

해로운 효과의 낮은 압력 플라즈마 살 균 새 균의 subtilis 포자를 사용 하 여 라이브 셀 현미경의 생존에 조사

Plasma sterilization is a promising alternative to conventional sterilization methods for industrial, clinical, and spaceflight purposes. Low pressure ...

Single-cell Microfluidic Analysis of Bacillus subtilis

Single-cell Microfluidic Analysis of Bacillus subtilis

새 균의 subtilis 의 단일 셀 미세 분석

Microfluidic technology overcomes many of the limitations to traditional analytical methods in microbiology. Unlike bulk-culture methods, it offers ...