Name: multicolor flow cytometry analyses of cellular immune response in rhesus macaques
Uploaded: 2010-04-22T17:35:00
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डॉ. प्रमोद Nehete और श्रीमती भारती Nehete मकाक रक्त और PBMC नमूने के लिए, इस काम आंशिक रूप से NIH अनुदान ऐ 46969 से धन द्वारा समर्थित किया गया, और सभी सेल संस्कृति मीडिया सेंट्रल मीडिया प्रयोगशाला द्वारा उत्पादित किए गए थे, जो NIH अनुदान CA द्वारा वित्त पोषित है 16672.

1) सेल तैयारी और प्रतिजनी उत्तेजना, 2) सतह मार्कर धुंधला हो जाना, 3) Intracellular साइटोकाइन धुंधला हो जाना और 4) प्रवाह cytometry के रूप में के रूप में अच्छी तरह से टी कोशिकाओं की कुल स्मृति सबसेट का विस्तृत प्ररूपी और कार?...

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	<li>Ogg, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+of+HIV-1-specific+cytotoxic+T+lymphocytes+and+plasma+load+of+viral+RNA.">Quantitation of HIV-1-specific cytotoxic T lymphocytes and plasma load of viral RNA.</a> Science. 279, 2103-2106 (1998).</li><li>Borrow, P., Lewicki, H., Hahn, B. H., Shaw, G. M., Oldstone, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-specific+CD8++cytotoxic+T-lymphocyte+activity+associated+with+control+of+viremia+in+primary+human+immunodeficiency+virus+type+1+infection.">Virus-specific CD8+ cytotoxic T-lymphocyte activity associated with control of viremia in primary human immunodeficiency virus type 1 infection.</a> J Virol. 68, 6103-6110 (1994).</li><li>Koup, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+association+of+cellular+immune+responses+with+the+initial+control+of+viremia+in+primary+human+immunodeficiency+virus+type+1+syndrome.">Temporal association of cellular immune responses with the initial control of viremia in primary human immunodeficiency virus type 1 syndrome.</a> J Virol. 68, 4650-4655 (1994).</li><li>Walker, J. M., Maecker, H. T., Maino, V. C., Picker, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicolor+flow+cytometric+analysis+in+SIV-infected+rhesus+macaque.">Multicolor flow cytometric analysis in SIV-infected rhesus macaque.</a> Methods Cell Biol. 75, 535-557 (2004).</li><li>Pitcher, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+homeostasis+of+T+cell+memory+in+rhesus+macaque.">Development and homeostasis of T cell memory in rhesus macaque.</a> J Immunol. 168, 29-43 (2002).</li><li>Jung, T., Schauer, U., Heusser, C., Neumann, C., Rieger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+intracellular+cytokines+by+flow+cytometry.">Detection of intracellular cytokines by flow cytometry.</a> J Immunol Methods. 159, 197-207 (1993).</li><li>Keeney, T. S., Nomura, L. E., Maecker, H. T., Sastry, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+analysis+of+macaque+whole+blood+for+antigen-specific+intracellular+cytokine+production+by+T+lymphocytes.">Flow cytometric analysis of macaque whole blood for antigen-specific intracellular cytokine production by T lymphocytes.</a> J Med Primatol. 32, 23-30 (2003).</li><li>Gauduin, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+intracellular+cytokine+staining+for+the+quantitation+of+antigen-specific+CD4++T+cell+responses+in+rhesus+macaques.">Optimization of intracellular cytokine staining for the quantitation of antigen-specific CD4+ T cell responses in rhesus macaques.</a> J Immunol Methods. 288, 61-79 (2004).</li><li>Baumgarth, N., Roederer, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+approach+to+multicolor+flow+cytometry+for+immunophenotyping.">A practical approach to multicolor flow cytometry for immunophenotyping.</a> J Immunol Methods. 243, 77-97 (2000).</li><li>De Rosa, S. C., Herzenberg, L. A., Roederer, M. 1. 1. -. c. o. l. o. r. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=13-parameter+flow+cytometry:+identification+of+human+naive+T+cells+by+phenotype,+function,+and+T-cell+receptor+diversity.">13-parameter flow cytometry: identification of human naive T cells by phenotype, function, and T-cell receptor diversity.</a> Nat Med. 7, 245-248 (2001).</li><li>Tung, J. W., Parks, D. R., Moore, W. A., Herzenberg, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+approaches+to+fluorescence+compensation+and+visualization+of+FACS+data.">New approaches to fluorescence compensation and visualization of FACS data.</a> Clin Immunol. 110, 277-283 (2004).</li></ol>

समाधान और buffers <ul><li> Ficoll Hypaque (Histopaquen +१,०७७, सिग्मा Aldrich, सेंट लुइस, MO) </li><li> RPMI-1640 मध्यम (HyClone प्रयोगशालाओं, लोगान, केन्द्र शासित प्रदेशों) </li><li> भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS), (HyClone प्रयोगशालाओं, लोगान, केन्द्र शासित प्रदेशों) </li><li> एल glutamine (सिग्मा Aldrich, सेंट लुइस, MO) </li><li> पेनिसिलीन / स्ट्रेप्टोमाइसिन (Invitrogen, Carlsbad, CA) </li><li> Trypan नीले अभिकर्मक (सिग्मा Aldrich, सेंट लुइस, MO) </li><li> 50 मिमी Tris, 8.6 पीएच, और फ़िल्टर 4 बजे दुकान डिग्री सेल्सियस </li><li> Dulbecco पीबीएस (DPBS, Ca2/Mg2-free, जीवन प्रौद्योगिकियों, रॉकविल, एमडी) </li><li> फ्लो धोने बफर: 2% FBS साथ DPBS पूरक, 4 बजे दुकान डिग्री सेल्सियस </li><li> बी.डी. / Cytofix Cytoperm फिक्सेशन / Permeabilization समाधान किट (बी.डी. बायोसाइंसेज, सैन जोस, CA) </li></ul> सक्रियकरण एजेंट <ul><li> Phorbol 12-myristate 13 (पीएमए) एसीटेट (सिग्मा Aldrich, सेंट लुइस, MO) </li><li> Ionomycin (सिग्मा Aldrich, सेंट लुइस, MO) </li><li> Costimulatory MAB CD49d, क्लोन 9F10 (बी.डी. बायोसाइंसेज, सैन जोस, CA) </li><li> आत्मीयता शुद्ध एंटीबॉडी (अब) एफ बकरी विरोधी माउस आईजीजी (एच एल +) के 2 टुकड़े (कियर्केगार्ड और पेरी प्रयोगशाला, Gaithersburg, एमडी) </li><li> विशिष्ट सक्रियकरण एजेंट पेप्टाइड पूल, एक पेप्टाइड, या पूरे प्रोटीन शामिल हो सकते हैं </li></ul> Cytokine स्राव inhibitors <ul><li> Brefedin एक (BFA, सिग्मा Aldrich, सेंट लुइस, MO) </li><li> Golgi प्लग वैकल्पिक रूप से इस्तेमाल किया जा सकता है (बी.डी. बायोसाइंसेज, सैन जोस, CA) </li></ul> एंटीबॉडी <ul><li> लाइव / मृत fixable एक्वा फ्लोरोसेंट दाग किट (Invitrogen, Carlsbad, CA) </li><li> (SP34-2) पीई Cy7, CD3 (बी.डी. बायोसाइंसेज, सैन जोस, CA) </li><li> सीडी 4 प्रशांत (OKT4), नीले, (eBiosciences (सैन डिएगो, CA) </li><li> CD8 Alexa700 (RPA-T8), (बी.डी. बायोसाइंसेज, सैन जोस, CA) </li><li> (L293) PerCP cy5.5, CD28 (सैन जोस, CA बी.डी. बायोसाइंसेज) </li><li> CD95 (DX2 APC), (बी.डी. बायोसाइंसेज, सैन जोस, CA) </li><li> IFN FITC (B27), (बी.डी. बायोसाइंसेज, सैन जोस, CA) </li><li> आईएल -2 (MQ1 17H12), पीई, (बी.डी. बायोसाइंसेज, सैन जोस, CA) </li></ul>

multicolor flow cytometry analyses of cellular immune response in rhesus macaques

रीसस मकाक मॉडल वर्तमान रोगजनन समझ करने के लिए सम्मान के साथ एचआईवी एड्स के लिए सबसे अच्छा उपलब्ध टीकों और चिकित्सा विज्ञान के विकास के लिए के रूप में अच्छी तरह के रूप में मॉडल<sup1,2,3&gt;</sup&gt;. यहाँ, हम सेलुलर प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं का विस्तृत प्ररूपी और कार्यात्मक विश्लेषण, विशेष रूप से intracellular CD4 द्वारा cytokine उत्पादन + और CD8 + टी कोशिकाओं के रूप में के रूप में अच्छी तरह से व्यक्तिगत स्मृति सबसेट के लिए एक विधि का वर्णन. हम दोनों CD4 में इंटरफेरॉन गामा के उत्पादन के लिए सटीक मात्रात्मक और गुणात्मक उपायों (INF) और interleukin (आईएल) -2 प्राप्त + और CD8 + टी रीसस मकाक PMA प्लस ionomycin (PMA मैं +) के साथ उत्तेजित PBMC से कोशिकाओं. साइटोकाइन प्रोफाइल स्मृति कोशिकाओं के विभिन्न सबसेट में अलग थे. इसके अलावा, इस प्रोटोकॉल हमें संवेदनशीलता प्रदान करने के लिए भी विशिष्ट प्रतिजन CD4 की मामूली भिन्न प्रदर्शित + और CD8 + टी PBMC नमूने के भीतर रीसस एचआईवी लिफाफा पेप्टाइड कॉकटेल हमारी प्रयोगशाला में विकसित टीके के साथ प्रतिरक्षित मकाक से सेल सबसेट. बहुरंगा प्रवाह cytometry तकनीक को ठीक से टी कोशिकाओं के विभिन्न आबादी की पहचान के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है<sup4,5&gt;</sup&gt; Cytokine उत्पादन क्षमता के साथ<sup6&gt;</sup&gt; गैर विशिष्ट प्रतिजन या विशिष्ट उत्तेजना के बाद<sup5,7&gt;</sup&gt;.

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Multicolor Flow Cytometry Analyses of Cellular Immune Response in Rhesus Macaques

हम कुल के रूप में अच्छी तरह के रूप में सीडी 4 + और CD8 + टी कोशिकाओं, रीसस मकाक में एचआईवी / एड्स के टीके के अध्ययन के लिए आदर्श मॉडल की स्मृति सबसेट का विस्तृत प्ररूपी और कार्यात्मक लक्षण वर्णन के लिए बहुरंगा प्रवाह cytometry की उपयोगिता प्रदर्शित करता है.

रीसस मकाक में सेलुलर प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के बहुरंगा प्रवाह cytometry विश्लेषण

The rhesus macaque model is currently the best available model for HIV-AIDS with respect to understanding the pathogenesis as well as for the development ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measuring Calpain Activity in Fixed and Living Cells by Flow Cytometry

फिक्स्ड और जीवित कोशिकाओं में प्रवाह cytometry द्वारा Calpain गतिविधि को मापने

Calpains are ubiquitous intracellular, calcium-sensitive, neutral cysteine proteases 1. Calpains play crucial roles in many physiological processes, ...

Seven Steps to Stellate Cells

सात कदम कक्ष तारामय

Hepatic stellate cells are liver-resident  cells of star-like morphology and are located in the space of Disse between  liver sinusoidal endothelial cells ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

प्रतिरक्षा कोशिकाओं के भीतर murine aortas Cytometry विश्लेषण फ्लो

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

मानवीय इन विट्रो में इम्यून असंतुलन का एक प्रारंभिक राज्य की मान्यता के लिए स्क्रीनिंग उपकरण के रूप में दमन

Regulatory T cells (Tregs) are critical mediators of immune tolerance to self-antigens. In addition, they are crucial regulators of the immune response ...

Detection of Fluorescent Nanoparticle Interactions with Primary Immune Cell Subpopulations by Flow Cytometry

फ्लो द्वारा प्राथमिक प्रतिरक्षा सेल subpopulations साथ फ्लोरोसेंट Nanoparticle बातचीत का पता लगाने

Engineered nanoparticles are endowed with very promising properties for therapeutic and diagnostic purposes. This work describes a fast and reliable ...

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

वेस्ट नील वायरस उत्परिवर्ती तनाव संक्रमण को Myd88 की मध्यस्थता सेलुलर प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के इन विट्रो विश्लेषण में

An attenuated West Nile virus (WNV), a nonstructural (NS) 4B-P38G mutant, induced higher innate cytokine and T cell responses than the wild-type WNV in ...

Analysis of Simian Immunodeficiency Virus-specific CD8+ T-cells in Rhesus Macaques by Peptide-MHC-I Tetramer Staining

Analysis of Simian Immunodeficiency Virus-specific CD8+ T-cells in Rhesus Macaques by Peptide-MHC-I Tetramer Staining

सिमीयन इम्यूनो वायरस-विशिष्ट CD8 का विश्लेषण<sup&gt; +</sup&gt; रीसस मकाक में टी-कोशिकाओं पेप्टाइड MHC-मैं tetramer धुंधला द्वारा

Peptide-major histocompatibility complex class I (pMHC-I) tetramers have been an invaluable tool to study CD8+ T-cell responses. Because these reagents ...

Qualitative and Quantitative Analysis of the Immune Synapse in the Human System Using Imaging Flow Cytometry

इमेजिंग प्रवाह Cytometry का उपयोग कर मानव प्रणाली में प्रतिरक्षा Synapse के गुणात्मक और मात्रात्मक विश्लेषण

The immune synapse is the area of communication between T cells and antigen-presenting cells (APCs). T cells polarize surface receptors and proteins ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

अलगाव और इन विट्रो संस्कृति Murine और मानव वायुकोशीय मैक्रोफेज

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Single-cell Quantitation of mRNA and Surface Protein Expression in Simian Immunodeficiency Virus-infected CD4+ T Cells Isolated from Rhesus macaques

Single-cell Quantitation of mRNA and Surface Protein Expression in Simian Immunodeficiency Virus-infected CD4+ T Cells Isolated from Rhesus macaques

Simian इम्यूनो वायरस में mRNA और सतह प्रोटीन अभिव्यक्ति की एकल-कोशिका Quantitation-संक्रमित CD4+ टी कोशिकाओं को रीसस मकाक से पृथक कर

Single-cell analysis is an important tool for dissecting heterogeneous populations of cells. The identification and isolation of rare cells can be ...