Name: multicolor flow cytometry analyses of cellular immune response in rhesus macaques
Uploaded: 2010-04-22T17:35:00
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짧은 꼬리 원숭이 혈액과 PBMC 샘플 박사 프라 모드 Nehete 부부 바티 Nehete,이 작품은 부분적으로 NIH 부여 AI 46,969의 자금에 의해 지원되었고, 모든 세포 배양 매체는 중앙 미디어 연구소에 의해 생산되었다, NIH 부여 CA에 의해 자금 지원됩니다 16672.

1) 셀 준비와 antigenic의 자극, 2) 표면 마커 얼룩, 3) 세포 시토킨 얼룩과 4) 유동세포계측법 : 총뿐만 아니라 T 세포의 메모리 하위 집합의 세부 phenotypic 및 기능 분석에 대한 절차는 네 부분으로 나눌 수 분석합니다. 1. 세포 준비와 antigenic의 자극 <ol><li> 두 신선하게 격리뿐만 아니라 cryo 보존된 말초혈 mononuclear 세포 (PBMC)가이 프로토콜에 사용되었습니다. PBMC는 Ficoll - Hypaque (His...

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	<li>Ogg, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+of+HIV-1-specific+cytotoxic+T+lymphocytes+and+plasma+load+of+viral+RNA.">Quantitation of HIV-1-specific cytotoxic T lymphocytes and plasma load of viral RNA.</a> Science. 279, 2103-2106 (1998).</li><li>Borrow, P., Lewicki, H., Hahn, B. H., Shaw, G. M., Oldstone, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-specific+CD8++cytotoxic+T-lymphocyte+activity+associated+with+control+of+viremia+in+primary+human+immunodeficiency+virus+type+1+infection.">Virus-specific CD8+ cytotoxic T-lymphocyte activity associated with control of viremia in primary human immunodeficiency virus type 1 infection.</a> J Virol. 68, 6103-6110 (1994).</li><li>Koup, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+association+of+cellular+immune+responses+with+the+initial+control+of+viremia+in+primary+human+immunodeficiency+virus+type+1+syndrome.">Temporal association of cellular immune responses with the initial control of viremia in primary human immunodeficiency virus type 1 syndrome.</a> J Virol. 68, 4650-4655 (1994).</li><li>Walker, J. M., Maecker, H. T., Maino, V. C., Picker, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicolor+flow+cytometric+analysis+in+SIV-infected+rhesus+macaque.">Multicolor flow cytometric analysis in SIV-infected rhesus macaque.</a> Methods Cell Biol. 75, 535-557 (2004).</li><li>Pitcher, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+homeostasis+of+T+cell+memory+in+rhesus+macaque.">Development and homeostasis of T cell memory in rhesus macaque.</a> J Immunol. 168, 29-43 (2002).</li><li>Jung, T., Schauer, U., Heusser, C., Neumann, C., Rieger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+intracellular+cytokines+by+flow+cytometry.">Detection of intracellular cytokines by flow cytometry.</a> J Immunol Methods. 159, 197-207 (1993).</li><li>Keeney, T. S., Nomura, L. E., Maecker, H. T., Sastry, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+analysis+of+macaque+whole+blood+for+antigen-specific+intracellular+cytokine+production+by+T+lymphocytes.">Flow cytometric analysis of macaque whole blood for antigen-specific intracellular cytokine production by T lymphocytes.</a> J Med Primatol. 32, 23-30 (2003).</li><li>Gauduin, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+intracellular+cytokine+staining+for+the+quantitation+of+antigen-specific+CD4++T+cell+responses+in+rhesus+macaques.">Optimization of intracellular cytokine staining for the quantitation of antigen-specific CD4+ T cell responses in rhesus macaques.</a> J Immunol Methods. 288, 61-79 (2004).</li><li>Baumgarth, N., Roederer, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+approach+to+multicolor+flow+cytometry+for+immunophenotyping.">A practical approach to multicolor flow cytometry for immunophenotyping.</a> J Immunol Methods. 243, 77-97 (2000).</li><li>De Rosa, S. C., Herzenberg, L. A., Roederer, M. 1. 1. -. c. o. l. o. r. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=13-parameter+flow+cytometry:+identification+of+human+naive+T+cells+by+phenotype,+function,+and+T-cell+receptor+diversity.">13-parameter flow cytometry: identification of human naive T cells by phenotype, function, and T-cell receptor diversity.</a> Nat Med. 7, 245-248 (2001).</li><li>Tung, J. W., Parks, D. R., Moore, W. A., Herzenberg, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+approaches+to+fluorescence+compensation+and+visualization+of+FACS+data.">New approaches to fluorescence compensation and visualization of FACS data.</a> Clin Immunol. 110, 277-283 (2004).</li></ol>

솔루션 및 버퍼 <ul><li> Ficoll - Hypaque (Histopaquen - 1077, 시그마 - 알드리치, 세인트 루이스, MO) </li><li> RPMI - 1640 배지 (HyClone 실험실, 로건, UT) </li><li> 태아 소 혈청 (FBS), (HyClone 실험실, 로건, UT) </li><li> L - 글루타민 (시그마 - 알드리치, 세인트 루이스, MO) </li><li> 페니실린은 / 스트렙토 마이신 (Invitrogen, 칼스 배드, CA) </li><li> Trypan 파란색 시약 (시그마 - 알드리치, 세인트 루이스, MO) </li><li> 50 MM 트리스, PH 8.6, 4 필터링과 가게 ° C </li><li> Dulbecco의 PBS (DPBS, Ca2/Mg2-free, 생명 기술, 락빌, MD) </li><li> 흐름 세척 버퍼 : 2% FBS와 DPBS 보완, 4 저장 ° C </li><li> BD Cytofix / Cytoperm 고정 / Permeabilization 솔루션 키트 (BD Biosciences, 산호세, CA) </li></ul> 활성화 요원 <ul><li> Phorbol 12 - myristate 13 - 아세테이트 (PMA) (시그마 - 알드리치, 세인트 루이스, MO) </li><li> Ionomycin (시그마 - 알드리치, 세인트 루이스, MO) </li><li> Costimulatory mAb CD49d, 클론 9F10 (BD Biosciences, 산호세, CA) </li><li> 친화력 정화 항체 F (AB) 염소 방지 마우스 IgG (H + L) 2 조각 (Kierkegaard 및 페리 연구소, 게이 더 스버그, MD) </li><li> 특정 인증 요원들은 펩타이드 수영장, 단일 펩티드, 또는 전체 단백질을 포함시킬 수 </li></ul> 시토킨 분비 억제제 <ul><li> Brefedin A (BFA, 시그마 - 알드리치, 세인트 루이스, MO) </li><li> 잠돌군 Zz 플러그는 (; 산호세, CA BD Biosciences) 또는 사용할 수 있습니다 </li></ul> 항체 <ul><li> 죽은 / 라이브 고칠수 아쿠아 형광 얼룩 키트 (Invitrogen, 칼스 배드, CA) </li><li> 인 경우에는 3 번 CD에 들어 PE - Cy7 (SP34 - 2), (BD Biosciences, 산호세, CA) </li><li> CD4 태평양 블루 (OKT4), (eBiosciences (샌디에고, CA) </li><li> CD8 Alexa700 (RPA - T8), (BD Biosciences, 산호세, CA) </li><li> CD28 PerCP - cy5.5 (L293), (BD Biosciences, 산호세, CA) </li><li> CD95 APC (DX2), (BD Biosciences, 산호세, CA) </li><li> IFN - FITC (B27), (BD Biosciences, 산호세, CA) </li><li> IL - 2 PE (MQ1 - 17H12), (BD Biosciences, 산호세, CA) </li></ul>

multicolor flow cytometry analyses of cellular immune response in rhesus macaques

붉은 털원숭이 짧은 꼬리 원숭이 모델은 현재 백신 및 치료제의 개발을위한 최상의 사용할 수있는 pathogenesis을 이해와 관련하여 HIV - AIDS에 대한 모델뿐 아니라<sup&gt; 1,2,3</sup&gt;. 여기, 우리는 세포 면역 반응에 대한 자세한 phenotypic 및 기능 분석, CD4 세포에 의해 구체적으로 시토킨 생산 +와 CD8 + T 세포뿐만 아니라 개별 메모리 하위 집합에 대한 방법을 설명합니다. 우리는 모두 CD4에서 인터페론 감마의 생산에 대한 정확한 양적 및 질적 조치 (INF -)와 인터루킨 (IL) -2를 취득 +와 CD8 + T PMA 플러스 ionomycin (PMA + I)를 자극 붉은 털원숭이 짧은 꼬리 원숭이 PBMC에서 세포. 시토킨 프로파일 메모리 세포의 서로 다른 하위 집합에서 다른되었습니다. 또한,이 프로토콜은 항원 특정 CD4의도 작은 분수를 입증하기 위해 우리에게 감도를 제공하는 +와 CD8 + 우리 연구실에서 개발된 HIV 봉투 펩타이드 칵테일 백신과 예방 접종을 붉은 털원숭이 짧은 꼬리 원숭이에서 PBMC 샘플 내의 T 세포 집합. 여러 가지 빛깔의의 유동세포계측법 기술 정확하게 T 세포의 다른 인구를 식별하는 강력한 도구입니다<sup&gt; 4,5</sup&gt; 시토킨 생산 기능이있는<sup&gt; 6</sup&gt; 불특정 또는 특정 항원 자극에 따라<sup&gt; 5,7</sup&gt;.

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Multicolor Flow Cytometry Analyses of Cellular Immune Response in Rhesus Macaques

우리는 총뿐만 아니라 붉은 털원숭이 짧은 꼬리 원숭이의 CD4 +와 CD8 + T 세포, HIV / AIDS 백신 연구를위한 이상적인 모델의 메모리 하위 집합에 대한 자세한 phenotypic와 기능 특성에 대한 여러 가지 빛깔의의 유동세포계측법의 유틸리티를 보여줍니다.

붉은 털원숭이 짧은 꼬리 원숭이의 세포 면역 반응의 여러 가지 빛깔의의 유동세포계측법의 분석

The rhesus macaque model is currently the best available model for HIV-AIDS with respect to understanding the pathogenesis as well as for the development ...

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사람의 체외에서</em면역 불균형의 초기 국가의 인정을위한 심사 도구를> 억제

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Detection of Fluorescent Nanoparticle Interactions with Primary Immune Cell Subpopulations by Flow Cytometry

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Analysis of Simian Immunodeficiency Virus-specific CD8+ T-cells in Rhesus Macaques by Peptide-MHC-I Tetramer Staining

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유인원 면역 결핍 바이러스 특정 CD8 분석<sup&gt; +</sup&gt; 펩티드 - MHC-I 테트라 머 염색에 의해 붉은 털 원숭이의 T 세포

Peptide-major histocompatibility complex class I (pMHC-I) tetramers have been an invaluable tool to study CD8+ T-cell responses. Because these reagents ...

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Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

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Single-cell Quantitation of mRNA and Surface Protein Expression in Simian Immunodeficiency Virus-infected CD4+ T Cells Isolated from Rhesus macaques

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단일 셀 정량 mRNA와 유인원 면역 결핍 바이러스에 감염 된 CD4에 표면 단백질 표정+ T 세포 격리에서 붉은 털 원숭이

Single-cell analysis is an important tool for dissecting heterogeneous populations of cells. The identification and isolation of rare cells can be ...