Name: performing and processing fna of anterior fat pad for amyloid
Uploaded: 2010-10-30T17:00:00
Duration: 9 min 41 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid at JoVE.com

نشكر السيدة بوني Phetteplace ، RN للمساعدة خلال الرسوم البيانية الفيديو المظاهرة FNAB الداخلي.

مقدمة الداء النشواني الجهازية هي مرض شديدة التباين الذي يشير إلى ترسب خارج الخلية من البروتينات المختلفة التي يشار إليها باسم اميلويد. ترسب هذه الألياف اميلويد بيتا مع تكوين ثنيات يؤدي إلى العروض سريرية مختلفة اعتمادا على الأجهزة المعنية. يشار إلى أن أكثر مظاهر ذات الصلة سريريا الداء النشواني النظامية عندما يكون هناك تورط الأجهزة الحيوية مثل القلب ، الكبد ، و / أو الكلى. تاريخيا ، سوف تحتاج فحص هذه الأجهزة المعنية لإثبات وجود أميلويد. نفذت هذه الإجراءات الغازية باعتدال على مخاطر كبيرة بما في ذلك النزف. ومنذ ذلك الحين الدهون تطلع لوحة معروضة لتوفير وسيلة موثوقة وموسع للكشف عن الداء النشواني اميلويد في المنهجية 1. هذا الإجراء غير قابلة للمقارنة أساسا لشفط الدهون من الدهون تحت الجلد في جدار البطن الأمامي تحت تخدير موضعي لاسترداد نسيج ليفي شحمي لتقييم الودائع اميلويد شحيحة في جدران الأوعية الدموية الصغيرة 2. الأسلوب الأكثر استخداما لتحديد اميلويد في الأنسجة ما زال سمة نمط الانكسار التفاح الأخضر عندما ينظر الكونغو أقسام حمراء ملطخة هي تصور تحت المجهر الضوء المستقطب 3. عندما يتم تنفيذ الدهون تطلع لوحة ، يمكن القيام بقع حمراء على الكونغو الشرائح طخت إما مباشرة أو الاستعدادات كتلة خلية من خلايا الأنسجة الدهنية يستنشق. ومع ذلك ، والمرضى في المراحل المبكرة من الداء النشواني والودائع اميلويد ضئيلة ، مما يقلل كثيرا من حساسية الكونغو الحمراء الملطخة المقاطع كتلة الخلية 4،5. تقييم التركيبية من الدهون عن طريق لوحة aspirates المجهر الإلكتروني وأفضل استنساخ وتحسين الحساسية 4. ولذلك ، فمن المستحسن أن يقدم كل aspirates منصة الدهون لإعداد كلا من كتلة الخلية لأداء والمجهر الإلكتروني 2. الدهون تطلع سادة هو التكلفة المنخفضة نسبيا وطريقة موسع من أجل الحصول على الأنسجة لتشخيص الداء النشواني النظامية. توضح هذه المقالة إجراء الشفط الدهون سادة جنبا إلى جنب مع تفاصيل حول تجهيز العينة لتقديم نموذج لكلا تلوين أحمر الكونغو والتقييم التركيبية بواسطة المجهر الإلكتروني. في هذا الفيديو ، ونظهر هذا الإجراء استنساخه وبسيطة لاسترداد مواد التشخيص الأمثل. 1. أداء FNA من الدهون لوحة الأمامية ألف التخدير للمنطقة المحلية (الشكل 1 و 2) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مسحات الكحول أو عامل تنظيف البشرة التي تفضلها مؤسسة معينة ، وتنظيف الجلد في المنطقة السفلى من البطن رباعي الوحشي على خط الوسط وتحت السرة (الشكل 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العلامة منطقة المعينية الشكل حوالي 2 بوصة × 2 كما هو مبين في الشكل 1 مع قلم الوسم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح ما يقرب من 10 مل من 1 ٪ ليدوكائين بإبرة 18G. إرفاق 25G 1 ½ بوصة إلى إبرة المحقنة. إزالة أي الهواء المحبوس من خلال الاستفادة من حقنة تستقيم أثناء الضغط على المكبس حتى يتم الاستغناء عن أي وسائل فقاعات الهواء موجودة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير على طول حدود المنطقة المعينية التي شهدت بالفعل كما هو مبين في الشكل 2. تبدأ بإدخال إبرة 25G فقط تحت الجلد في النقطة (أ) ، ودفع بعناية الإبرة تحت الجلد إلى نقطة عاشرا تنسحب على المكبس حقنة لضمان ان كنت لا داخل السفينة. ثم دفع ببطء الغطاس التسلل الى ما يصل الى 2.5 مل من الليدوكائين (حوالي ربع من يدوكائين في محقنة 10 مل) ، في حين سحب الإبرة إلى النقطة (أ) من دون السماح الإبرة يخرج من الجلد عند النقطة (أ) (الشكل 2a3). مع الإبرة لا تزال تحت الجلد تغيير الاتجاه نحو النقطة Y (الشكل 2a4) ، ودفع الإبرة تحت الجلد إلى النقطة Y (الشكل 2b1). كما كان من قبل ، تأكد من أن الإبرة ليست في وعاء والاستغناء عن ما يقرب من 2.5 مل من الليدوكائين ببطء بينما سحب الإبرة من خلال النقطة (أ) (الشكل من خلال 2b3 2b4) كرر خطوات مماثلة بدءا من النقطة (ب) وصرفها من تحت الجلد يدوكائين B يشير إلى وباء لX Y (من خلال الشكل 2c1 2d4). منع النزف من عذاب ألف وباء بحلول التطبيق الحازم لقياس قطعة معقمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكنك الآن أن تحقق المنطقة تخدير عن طريق لمس برفق الجلد داخل المعيني تخدير بواسطة غيض / زاوية قطعة الشاش والقطن ، وبمقارنة مع الجلد unanesthetized المجاورة. </li></ol> باء المسرحية الدهون تطلع لوحة (الشكل 3) (قد تطبيق تخدير موضعي قبل أداء تطلع منصة الدهون يمكن تجاوزه ، اعتمادا على الأفضليات الإقليمية والفردية ، ويمكن استكمال إجراءات FNAB يؤديها بشكل صحيح لتطلع الأمامي وسادة من الدهون في واحد وخز ، ولكن اعتمادا على عتبة الألم من المريض والمناورة من الإبرة 18G ذهابا وإيابا إلى الأنسجة تحت الجلد والدهون نسبيا distresالغناء. وصف أسلوب التخدير هنا يحقق التأثير في عذاب مع اثنين فقط ويحول دون الإصابة 25G إبرة الألم التسامح مع محسنة لهذا الإجراء.) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التجمع 18G 1 ½ بوصة على إبرة حقنة 10 مل. تحميل التجمع حقنة ذات إبرة حقنة في قبضة (&quot;FNAB قبضة / بندقية&quot;) للتطبيق السليم والإفراج عن فراغ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج غيض من الإبرة في الدهون تحت الجلد داخل منطقة المعيني تطهير وتخدير (الشكل 3A). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التراجع الكامل للالمكبس من المحاقن مع إبرة تدخل في النسيج تحت الجلد لتوليد الفراغ (الشكل 3B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المحافظة على الفراغ والمناورة الإبرة ذهابا وإيابا في اتجاهات مختلفة في لالدهون تحت الجلد (الشكل 3C خلال 3I). وينبغي أن يكون كل شوط أطول فترة ممكنة مع طول الإبرة المحدد دون السماح للخروج الإبرة من الجلد. الحد الأقصى لأخذ العينات ويتحقق من خلال تغيير الاتجاه مع كل السكتة الدماغية (الشكل 3I). فمن المهم للحفاظ على اتجاه إبرة عرضية إلى المصلية وموازية لسطح الجلد لتجنب ثقب في التجويف البريتوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نسيج ليفي شحمي يتراكم في المحاقن. يتم استرداد ما يكفي مرة واحدة شظايا نسيج ليفي شحمي (ما يصل إلى 1 مل من الدم الغني شظايا العينة المختلطة) ، والإفراج عن فراغ تماما ، وإزالة الإبرة (الشكل 3K). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> والمريض أو مساعد الضغط على المنطقة شركة الداخلي مع لوحة من الشاش لمنع تسرب الدم. </li></ol> 2. تجهيز العينات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان ما لا يقل عن 5-6 أجزاء من نسيج ليفي شحمي في حل غلوتارالدهيد عن المجهر الإلكتروني (الشكل 4B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اعتمادا على بروتوكول المؤسسية ، قد تكون أعدت مسحات قليل من نسيج ليفي شحمي الشظايا التي نشرها بين شريحتين (الشكل 4A). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ولا يسمح للمواد المتبقية لجلطة في المحاقن (وهذا قد يستغرق 5-7 دقائق ، اعتمادا على الوقت تخثر) (الشكل 4C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح 10 ٪ في الفورمالين المحقنة بحيث يتم فكها نسيج ليفي شحمي متخدر مواد من جدار المحاقن والتعويم (الشكل 4C2). إزالة المكبس من المحاقن (الشكل 4C3) ونقل الأنسجة ليفي شحمي متخدر في حاوية في الفورمالين 10 ٪ من النهاية المفتوحة للحقنة المعاكس نهاية فوهة الشكل (4C4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التسمية الحاويات بشكل مناسب وتقديم غلوتارالدهيد عن المجهر الإلكتروني والفورمالين للباب H &amp; E والكونغو وصمة عار لتقييم الحمراء تحت المجهر الاستقطاب. إذا كان قد أعد مسحات ، قد يتم معالجتها وفقا لبروتوكول المختبر الفردية. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. تخدير المنطقة المراد لوحة FNAB من الدهون الأمامي. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig2.jpg" alt="الشكل 2" /> الشكل 2. تخدير للمنطقة المحلية. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig3.jpg" alt="الشكل 3" /> الشكل 3. أداء FNAB من الدهون لوحة الأمامية. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig4.jpg" alt="الشكل 4" /> الشكل 4. تجهيز اللوحة الأمامية الدهون نضح لتقديمها إلى مختبر للكشف عن رواسب أميلويد. 3. ممثل النتائج <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig5.jpg" alt="الشكل 5" /> الشكل 5. اميلويد في جدار الأوعية الدموية الصغيرة في أنسجة شظايا ليفي شحمي. الفورمالين والمجهزة ، جزءا لا يتجزأ من نسيج ليفي شحمي البارافين ملون باللون الأحمر والكونغو ، والتي بحثها الاستقطاب المجهر الضوئي. اميلويد في جدار الأوعية الدموية الصغيرة يظهر التفاح الأخضر الانكسار (أبيض السهم). <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig6.jpg" alt="الشكل 6" /> الشكل 6. الأنسجة التي تفتقر الداء النشواني. والانكسار التفاح الأخضر غائب في أنسجة المريض مختلفة دون الداء النشواني. الزرقاء الانكسار (أبيض السهم) من ألياف الكولاجين ، وعادة ما تكون موجودة في جميع العينات تقريبا. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig7.jpg" alt="الشكل 7" /> الشكل 7. بما يتفق مع اميلويد في الدم جدار الوعاء الدموي ييفات. مجهرية إلكترون من مستقيم ، غير متفرعة ، بطريقة عشوائية متناثرة ييفات قطرها 80-10 نانومتر التي شكلتها أميلويد في الدم جدار الوعاء الدموي.

<ol>
	<li>Westermark, P., Stenkvist, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+the+diagnosis+of+systemic+amyloidosis.">A new method for the diagnosis of systemic amyloidosis.</a> Arch Intern Med. 132, 522-523 (1973).</li><li>Devata, S., Hari, P., Markelova, N., Li, R., Shidham, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detecting+AL+Amyloid+in+Abdominal+fat+pad+aspirates:+Is+Congo+red+sufficient?.">Detecting AL Amyloid in Abdominal fat pad aspirates: Is Congo red sufficient?.</a> Amyloid. , .</li><li>Merlini, G., Bellotti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Mechanisms+of+Amyloidosis.">Molecular Mechanisms of Amyloidosis.</a> New Engl J Med. 349 (6), 583-596 (2003).</li><li>Shidham, V. B., Kumar, N., Cihlar, K., Varsegi, G., Markelova, N., Li, R., Hari, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fine+needle+aspiration+of+abdominal+fat+pad+for+diagnosis+of+early+amyloidosis:+How+can+the+clinical+role+of+the+test+be+improved?.">Fine needle aspiration of abdominal fat pad for diagnosis of early amyloidosis: How can the clinical role of the test be improved?.</a> Mod Pathol. 20, 1A-380A (2007).</li><li>Halloush, R., Lavrovskaya, E., Mody, D., Lager, D., Truong, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+typing+of+systemic+amyloidosis:+The+role+of+abdominal+fat+pad+fine+needle+aspiration.">Diagnosis and typing of systemic amyloidosis: The role of abdominal fat pad fine needle aspiration.</a> Cytojournal. 6, 24-24 (2010).</li><li>Hazenberg, I. I., Rijswijk, C. V. a. n., H, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+Accuracy+of+Subcutaneous+Abdominal+Fat+Tissue+Aspiration+for+Detecting+Systemic+Amyloidosis+and+Its+Utility+in+Clinical+Practice.">Diagnostic Accuracy of Subcutaneous Abdominal Fat Tissue Aspiration for Detecting Systemic Amyloidosis and Its Utility in Clinical Practice.</a> Arthritis Rheum. , 54-546 (2006).</li><li>Guy, C. D., Jones, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abdominal+fat+pad+aspiration+biopsy+for+tissue+confirmation+of+systemic+amyloidosis:+specificity,+positive+predictive+value,+and+diagnostic+pitfalls.">Abdominal fat pad aspiration biopsy for tissue confirmation of systemic amyloidosis: specificity, positive predictive value, and diagnostic pitfalls.</a> Diagn Cytopathol. 24, 181-185 (2001).</li><li>Westermark, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosing+Amyloidosis.">Diagnosing Amyloidosis.</a> Scand J Rheumatol Suppl. 24, 327-329 (1995).</li><li>Linke, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+Sensitive+Diagnosis+of+Amyloid+and+Various+Amyloid+Syndromes+Using+Congo+Red+Fluorescence.">Highly Sensitive Diagnosis of Amyloid and Various Amyloid Syndromes Using Congo Red Fluorescence.</a> Virchow Arch. 436, 439-448 (2000).</li><li>Giorgadze, T. A., Shiina, N., Baloch, Z. W., Tomaszewski, J. E., Gupta, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+detection+of+amyloid+in+fat+pad+aspiration:+an+evaluation+of+Congo+red+stain+by+fluorescent+microscopy.">Improved detection of amyloid in fat pad aspiration: an evaluation of Congo red stain by fluorescent microscopy.</a> Diagn Cytopathol. 31, 300-306 (2004).</li><li>DeMay, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fine+Needle+Aspiration+Biopsy.">Fine Needle Aspiration Biopsy.</a> The Art &#38; Science of Cytopathology. , 465-46 (1996).</li><li>Arbustini, E., Vrga, L., Concardi, M., Pallandini, G., Obici, L., Merlini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+and+Immuno-electron+Microscopy+of+Abdominal+Fat+Identifies+and+Characterizes+Amyloid+Fibrils+in+Suspected+Cardiac+Amyloidosis.">Electron and Immuno-electron Microscopy of Abdominal Fat Identifies and Characterizes Amyloid Fibrils in Suspected Cardiac Amyloidosis.</a> Amyloid. 9, 108-114 (2002).</li></ol>

وعادة ما يتحقق تشخيص الداء النشواني مع خزعة من أنسجة الأعضاء المصابة مثل الكلى والكبد ، و / أو القلب. هذا النهج لم تسفر تشخيصية عالية ، ومع ذلك ، والغازية قد تترافق مع مضاعفات منها نزيف 2. ويفضل المستقيم ، لثوي ، والخزعات نخاع العظم لتشخيص المرض مع اقتراب نسبيا أقل الغازية في 1960s 6،7،8. وأفيد في البطن تطلع منصة الدهون في عام 1973 باعتبارها آمنة والداخلي ، مينيملي بسيطة ، وأقل تكلفة لتشخيص الداء النشواني أنسجة النظامية 1. ومع ذلك ، لا تفاصيل للإجراءات ونهج لمعالجة العينة استرجاع ذكرت متماسك. هذا الفيديو ، والمادة ووصف الإجراء خطوة بخطوة. هذا النهج للكشف عن التطلع لوحة اميلويد في الدهون ، وعلى نحو مماثل ، هي أيضا ليست موحدة تماما مع عدد قليل من الدراسات المقارنة وتقييم المناهج المختلفة 1،5،6،7،8. تقييم الأمامي aspirates منصة الدهون مع تلوين أحمر الكونغو أقل حساسية مع انخفاض استنساخ بين الفاحصين وخاصة في الحالات المبكرة من الداء النشواني مع الودائع اميلويد شحيحة 5. المناعية على أداء الفورمالين أقسام البارافين جزءا لا يتجزأ من كتلة الخلايا الثابتة وتم الإبلاغ عن مضان أحمر الكونغو التي أجريت على الخلايا مسحات لتحسين حساسية التشخيص 9،10. المجهر الإلكتروني يحسن من الكشف والتعرف على الألياف اميلويد شحيحة في جدران الأوعية الدموية الصغيرة في أنسجة ليفي شحمي في aspirates منصة الدهون 4 ، 5. استنادا إلى هذه المعلومات ، توضح هذه المقالة تجهيز العينات لإعداد كتل الخلية (لتقييم الكونغو الحمراء الملطخة المقاطع زنزانة تحت المجهر لاستقطاب التشخيص التفاح الأخضر الانكسار ، وكذلك لالمناعية كما هو مبين) والمجهر الإلكتروني. ومع ذلك ، اعتمادا على النهج المحدد لتقييم العينة عن اميلويد ، قد تعرض لتشويه إعداد الخلايا ، الخلية كتلة التحضير والتجهيز للفحص المجهري الإلكترون. بعض المختبرات إجراء اختبارات على مسحات محضرة من نسيج ليفي شحمي شظايا يستنشق وملون بلون أحمر الكونغو لدراسة 10 مضان. عموما في وقت متأخر من الداء النشواني ، قد المجهر الضوئي المجهري مع أحمر الكونغو الاستقطاب يكون كافيا ، ولكن في المراحل المبكرة من المرض تلوين أحمر الكونغو مع استقطاب المجهري على أبواب الزنزانات أقل حساسية وموثوقة لوحة aspirates الدهون 4،5،11 . ويمكن استخدام بقع الخاصة الأخرى بما في ذلك T Thioflavin مع قيود مماثلة. مناهج أخرى للكشف عن اميلويد تشمل تقييم مسحات نضح لاميلويد مع المجهري أحمر الكونغو الاستقطاب ومضان 10. تجربتنا في هذا الأسلوب هو أقل دقة. تقييم الأوعية الدموية في الدهون لوحة اميلويد بواسطة المجهر الإلكتروني يتغلب على هذه القيود 4،11. وقد أبلغ توصيف مزيد من اميلويد بواسطة المجهر immunoelectron 12 ، ولكن هذه الطرق قد لا تكون متاحة على نطاق واسع في وضع الرعاية غير العالي. ويمكن تصنيف الإبر المستخدمة لتنفيذ الإجراءات وفقا لتطلع على قياس الأحجام في الدقيقة (21 - 25G) ، والمتوسطة (18 20G) ، وكبيرة (على سبيل المثال - 14G) 11. وقد تم الإبلاغ عن تطلعات الأمامي وسادة من الدهون التي سيتم تنفيذها باستخدام مقاييس متفاوتة تراوحت بين المتوسطة (من 18 إلى 20G) إلى 2،10 (21 إلى 22G) غرامة. ويستنشق معظم الآفات الشامل مع الإبر قياس أدق (مثل 25G) للحصول على الخلايا مسحات جيدة مع يمر إضافية مع الإبرة أوسع مقياس (مثل 18G) لاسترداد عينة إضافية للكتل الخلية. خلال اللوحة الأمامية تطلع الدهون والأنسجة ليفي شحمي متماسكة لا نضح جيدا مع الإبر الدقيقة. كتلة الخلية إعداد والمجهر الإلكتروني هامة لتقييم جدران الأوعية الدموية الصغيرة في أنسجة شظايا ليفي شحمي في aspirates الدهون. ينصح الإبر أوسع مقياس (مثل 18G) لانتاج مواد كافية التشخيص 2،10. وهذا الإجراء هو الذي يضاهي FNAB التقليدية ، ويشار إلى منصة الدهون الطموح كما FNAB حتى ولو يمكن استخدام الإبر أوسع مقياس لأداء ذلك 5.

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/index/details.stp?id=1747">Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid</a>. There was an error with an author's name. The author's last name had a typo and was corrected to:
Safwan S. Jaradeh
instead of:
Safwan S. Jardeh

Erratum: Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid

مسحات الكحول ، وقطع من الشاش ، وسم القلم ، 10 مل المحاقن X2 ، 1 ٪ ليدوكائين (مخدر موضعي ، وإذا تم استخدام يدوكائين وحدها ، فإنه يسبب حرقان الأولية بعد تقطير ، ويمكن منع ذلك باستخدام خليط 1:1 من 1 ٪ يدوكائين و 1 ٪ من الصوديوم وكربونات ثنائي) ، قياس 18 (G) 1 ½ بوصة الإبر X2 (لأداء FNAB) ، 25G إبرة 1 ½ بوصة (لحقن مخدر موضعي) ، فارس صاحب حقنة (&quot;بندقية&quot;) ، ضمادة ، قنينة من غلوتارالدهيد (على المجهر الإلكتروني) ، والحاويات خزعة من 10 ٪ من الفورمالين.

performing and processing fna of anterior fat pad for amyloid

تاريخيا ، تم تنفيذها القلب ، الكبد ، والكلى لإثبات الخزعات الودائع اميلويد في الداء النشواني. منذ السريرية لهذا المرض هو متغير جدا وغير محددة ، والمخاطر المرتبطة بها من هذه الخزعات هي كبيرة جدا بالنسبة للمحصول التشخيص. المواقع الأخرى التي لديها مخاطر أقل خزعة ، مثل الجلد أو اللثة ، هي أيضا الغازية نسبيا وباهظة الثمن. بالإضافة إلى ذلك ، قد تكون هذه الخزعات لا نملك دائما الودائع اميلويد كافية لإثبات التشخيص. وقد أثبتت الدهون تطلع منصة علاقة سريرية جيدة مع انخفاض التكلفة والحد الأدنى من الاعتلال. ومع ذلك ، لا توجد بروتوكولات موحدة لتنفيذ هذا الإجراء أو يستنشق تجهيز العينة ، الأمر الذي يؤدي إلى نتائج وnonreproducible متغير. الطريقة الأكثر استخداما للكشف عن اميلويد في الأنسجة هو الانكسار التفاح الأخضر على أبواب الحمراء الكونغو الملون باستخدام المجهر الاستقطاب. هذا الأسلوب يتطلب إعداد الخلية كتلة من المواد يستنشق. للأسف ، المرضى الذين يلتمسون العلاج في مرحلة مبكرة من الداء النشواني وكميات ضئيلة من الأميلويد مما يقلل كثيرا من حساسية الكونغو الحمراء الملطخة المقاطع كتلة خلية aspirates منصة الدهون. لذا ، ينبغي استغلال التقييم التركيبية لوحة aspirates الدهون عن طريق المجهر الإلكتروني ، نظرا لحساسيتها للكشف عن زيادة اميلويد. هذه المقالة يوضح إجراءات بسيطة وقابلة للتكرار لأداء اللوحة الأمامية تطلع الدهون للكشف عن اميلويد باستخدام كلا تلوين أحمر الكونغو أبواب الزنزانات والمجهر الإلكتروني لتحديد التركيبية.

Watch this Scientific Journal Video about Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid at JoVE.com

Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid

الدهون تطلع سادة هو المفضل ، نهج التكلفة مينيملي ، ومنخفضة بالمقارنة مع الطرق الأخرى للكشف عن اميلويد لتشخيص الداء النشواني النظامية. هذه المقالة الفيديو يوضح الخطوط العريضة لتنفيذ الإجرائية الدهون تطلع سادة مع معالجة مناسبة من العينة لنتائج التشخيص الأمثل.

الأداء ومعالجة FNA من الدهون الأمامية لوحة اميلويد

Historically, heart, liver, and kidney biopsies were performed to demonstrate amyloid deposits in amyloidosis.  Since the clinical presentation of this ...

performing-and-processing-fna-of-anterior-fat-pad-for-amyloid

Research

JoVE Journal

Medicine

Purification and Aggregation of the Amyloid Precursor Protein Intracellular Domain

Amyloid precursor protein (APP) is a type I transmembrane protein associated with the pathogenesis of Alzheimer's disease (AD). APP is characterized by a large extracellular domain and a short cytosolic domain termed the APP intracellular domain (AICD). During maturation through the secretory pathway, APP can be cleaved by proteases termed &alpha;, &beta;, and &gamma;-secretases1. Sequential proteolytic cleavage of APP with &beta; and &gamma;-secretases leads to the production of a small proteolytic peptide, termed A&beta;, which is amyloidogenic and the core constituent of senile plaques. The AICD is also liberated from the membrane after secretase processing, and through interactions with Fe65 and Tip60, can translocate to the nucleus to participate in transcription regulation of multiple target genes2,3. Protein-protein interactions involving the AICD may affect trafficking, processing, and cellular functions of holo-APP and its C-terminal fragments. We have recently shown that AICD can aggregate in vitro, and this process is inhibited by the AD-implicated molecular chaperone ubiquilin-14. Consistent with these findings, the AICD has exposed hydrophobic domains and is intrinsically disordered in vitro5,6, however it obtains stable secondary structure when bound to Fe657. We have proposed that ubiquilin-1 prevents inappropriate inter- and intramolecular interactions of AICD, preventing aggregation in vitro and in intact cells4. While most studies focus on the role of APP in the pathogenesis of AD, the role of AICD in this process is not clear. Expression of AICD has been shown to induce apoptosis8, to modulate signaling pathways9, and to regulate calcium signaling10. Over-expression of AICD and Fe65 in a transgenic mouse model induces Alzheimer's like pathology11, and recently AICD has been detected in brain lysates by western blotting when using appropriate antigen retrieval techniques12. To facilitate structural, biochemical, and biophysical studies of the AICD, we have developed a procedure to produce recombinantly large amounts of highly pure AICD protein. We further describe a method for inducing the in vitro thermal aggregation of AICD and analysis by atomic force microscopy. The methods described are useful for biochemical, biophysical, and structural characterization of the AICD and the effects of molecular chaperones on AICD aggregation.

A method for large-scale purification of the APP intracellular domain (AICD) is described. We also describe methodology to induce in vitro AICD aggregation and visualization by atomic force microscopy. The methods described are useful for biochemical/structural characterization of the AICD and the effects of molecular chaperones on its aggregation.

تنقية وتجميع على البروتين اميلويد السلائف المجال بين الخلايا

Amyloid precursor protein (APP) is a type I transmembrane protein associated with the pathogenesis of Alzheimer's disease (AD). APP is characterized by a ...

Processing of Human Reduction Mammoplasty and Mastectomy Tissues for Cell Culture

Experimental examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated by in vitro culture systems that more accurately model in vivo biology. The use of human derived material for studying cellular differentiation, aging, senescence, and immortalization is particularly advantageous given the many significant molecular differences in these properties between human and commonly utilized rodent cells1-2. Mammary cells present a convenient model system because large quantities of normal and abnormal tissues are available due to the frequency of reduction mammoplasty and mastectomy surgeries.
The mammary gland consists of a complex admixture of many distinct cell types, e.g., epithelial, adipose, mesenchymal, endothelial. The epithelial cells are responsible for the differentiated mammary function of lactation, and are also the origin of the vast majority of human breast cancers. We have developed methods to process mammary gland surgical discard tissues into pure epithelial components as well as mesenchymal cells3. The processed material can be stored frozen indefinitely, or initiated into primary culture. Surgical discard material is transported to the laboratory and manually dissected to enrich for epithelial containing tissue. Subsequent digestion of the dissected tissue using collagenase and hyaluronidase strips stromal material from the epithelia at the basement membrane. The resulting small pieces of the epithelial tree (organoids) can be separated from the digested stroma by sequential filtration on membranes of fixed pore size. Depending upon pore size, fractions can be obtained consisting of larger ductal/alveolar pieces, smaller alveolar clusters, or stromal cells. We have observed superior growth when cultures are initiated as organoids rather than as dissociated single cells. Placement of organoids in culture using low-stress inducing media supports long-term growth of normal HMEC with markers of multiple lineage types (myoepithelial, luminal, progenitor)4-5. Sufficient numbers of cells can be obtained from one individual's tissue to allow extensive experimental examination using standardized cell batches, as well as interrogation using high throughput modalities.
Cultured HMEC have been employed in a wide variety of studies examining the normal processes governing growth, differentiation, aging, and senescence, and how these normal processes are altered during immortal and malignant transformation4-15,16. The effects of growth in the presence of extracellular matrix material, other cell types, and/or 3D culture can be compared with growth on plastic5,15. Cultured HMEC, starting with normal cells, provide an experimentally tractable system to examine factors that may propel or prevent human aging and carcinogenesis.

A method to process human mammary surgical discard material is described. Processed tissue, in the form of organoids, can be stored frozen indefinitely or placed in culture for long-term growth. This method enables experimental examination of normal human epithelial cell biology, and the effects of exogenous perturbations.

تجهيز رأب الثدي لحد من استئصال الثدي والأنسجة البشرية للثقافة الخليوي

Experimental  examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how  normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the functions of proteins involved in oncogenic progression or help to discover new tumor suppressors. In addition, injecting cancer cells into mice with different genotypes might provide a better understanding of the importance of the stromal compartment. Many models may be useful to investigate certain aspects of disease progression but do not recapitulate the entire cancerous process. In contrast, breast cancer cells engraftment to the mammary fat pad of mice better recapitulates the location of the disease and presence of the proper stromal compartment and therefore better mimics human cancerous disease. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into mice orthotopically and explain how to collect tissues to analyse the tumor milieu and metastasis to distant organs. Using this model, many aspects (growth, angiogenesis, and metastasis) of cancer can be investigated simply by providing a proper environment for tumor cells to grow.

Cancer is a complex disease that is influenced by the tissue surrounding the tumor as well as local pro- and anti-inflammatory mediators. Therefore, orthotropic injection models, rather than subcutaneous models may be useful to study cancer progression in a manner that better mimics human pathology.

حقن مثلي من خلايا سرطان الثدي في الثديية الدهون وسادة من الفئران لدراسة نمو الأورام.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft tissue filler as it is readily available, easily obtained, inexpensive, and inherently biocompatible.1 However, despite its burgeoning popularity, fat grafting is hampered by unpredictable results and variable graft survival, with published retention rates ranging anywhere from 10-80%. 1-3
To facilitate investigations on fat grafting, we have therefore developed an animal model that allows for real-time analysis of injected fat volume retention. Briefly, a small cut is made in the scalp of a CD-1 nude mouse and 200-400 &#181;l&#160;of processed lipoaspirate is placed over the skull. The scalp is chosen as the recipient site because of its absence of native subcutaneous fat, and because of the excellent background contrast provided by the calvarium, which aids in the analysis process. Micro-computed tomography (micro-CT) is used to scan the graft at baseline and every two weeks thereafter. The CT images are reconstructed, and an imaging software is used to quantify graft volumes.
Traditionally, techniques to assess fat graft volume have necessitated euthanizing the study animal to provide just a single assessment of graft weight and volume by physical measurement ex vivo. Biochemical and histological comparisons have likewise required the study animal to be euthanized. This described imaging technique offers the advantage of visualizing and objectively quantifying volume at multiple time points after initial grafting without having to sacrifice the study animal. The technique is limited by the size of the graft able to be injected as larger grafts risk skin and fat necrosis. This method has utility for all studies evaluating fat graft viability and volume retention. It is particularly well-suited to providing a visual representation of fat grafts and following changes in volume over time.

Fat grafting is an essential technique for reconstructing soft tissue deficits. However, it remains an unpredictable procedure characterized by variable graft survival. Our goal was to devise a mouse model that utilizes a novel imaging method to compare volume retention between differing techniques of fat graft preparation and delivery.

تقييم الجدوى من الدهون الإنسان الحقن في الفئران عارية مع مايكرو-التصوير المقطعي

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic transplantation of ovarian surface and tubal epithelia include intraperitoneal and intrabursal administration of cells. The respective limitations of these methods include poorly defined location of injected cells and limited space volume. Furthermore, they are poorly suited for long-term structural preservation of transplanted organs. To address these challenges, we have developed an alternative approach, which is based on the introduction of cells and tissue fragments into the mouse fat pad. The mouse ovarian fat pad is located in the immediate vicinity of the ovary and uterine tube (aka oviduct, fallopian tube), and provides a familiar microenvironment for cells and tissues of these organs. In our approach fluorescence-labeled mouse and human cells, and fragments of the uterine tube are engrafted by using minimally traumatic dorsal incision surgery. Transplanted cells and their outgrowths are easily located in the ovarian fat pad for over 40 days. Long-term transplantation of the entire uterine tube allows correct preservation of all principle tissue components, and does not result in adverse side effects, such as fibrosis and inflammation. Our approach should be uniquely applicable for answering important biological questions such as differentiation, regenerative and neoplastic potential of specific cell populations. Furthermore, it should be suitable for studies of microenvironmental factors in normal development and cancer.

We describe an ovarian fad pad transplantation assay suitable for studies of normal and transformed epithelia of the female reproductive tract. The mouse fat pad allows transplantation of large tissue fragments, is easily accessible for surgery and imaging, and provides the most favorable native environment for tissues of M&#252;llerian origin.

زرع في وسادة الفأرة المبيض الدهون

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

Confirmation of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury in Mice Using Surface Pad Electrocardiography

Many animal models have been established for the study of myocardial remodeling and heart failure due to its status as the number one cause of mortality worldwide. In humans, a pathologic occlusion forms in a coronary artery and reperfusion of that occluded artery is considered essential to maintain viability of the myocardium at risk. Although essential for myocardial recovery, reperfusion of the ischemic myocardium creates its own tissue injury. The physiologic response and healing of an ischemia/reperfusion injury is different from a chronic occlusion injury. Myocardial ischemia/reperfusion injury is gaining recognition as a clinically relevant model for myocardial infarction studies. For this reason, parallel animal models of ischemia/reperfusion are vital in advancing the knowledge base regarding myocardial injury. Typically, ischemia of the mouse heart after left anterior descending (LAD) coronary artery occlusion is confirmed by visible pallor of the myocardium below the occlusion (ligature). However, this offers only a subjective way of confirming correct or consistent ligature placement, as there are multiple major arteries that could cause pallor in different myocardial regions. A method of recording electrocardiographic changes to assess correct ligature placement and resultant ischemia as well as reperfusion, to supplement observed myocardial pallor, would help yield consistent infarct sizes in mouse models. In turn, this would help decrease the number of mice used. Additionally, electrocardiographic changes can continue to be recorded non-invasively in a time-dependent fashion after the surgery. This article will demonstrate a method of electrocardiographically confirming myocardial ischemia and reperfusion in real time.

During murine myocardial ischemia/reperfusion surgery, correct placement of the occluding ligature is typically confirmed by visible observation of myocardial pallor. Herein, a method of electrocardiographically confirming ischemia and reperfusion, to supplement observed myocardial pallor, is demonstrated in male C57Bl/6 mice.

تأكيدا لعضلة القلب نقص التروية وضخه إصابة في الفئران عن طريق الكهربائي الوسادة السطحية

Many animal models have been established for the study of myocardial remodeling and heart failure due to its status as the number one cause of mortality ...

Stromal Vascular Fraction-enriched Fat Grafting for the Treatment of Symptomatic End-neuromata

The purpose of this study was to methodically illustrate and highlight the crucial steps of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a novel treatment of symptomatic end-neuromata of peripheral sensory nerves, and in this study, specifically of the superficial branch of the radial nerve (SBRN). Despite a multitude of existing treatments, persistent postoperative pain and common pain relapse are still very common, independent of the procedure assessed. The neuroma is microsurgically excised accordingly to standardized protocol. Instead of the relocation of the regenerating nerve stump in neighboring anatomical structures, such as muscle or bone, a fat graft is applied perifocally and acts as a mechanical barrier. In order to reduce the fat resorption rate and boost the regenerative potential of the graft, the highly concentrated SVF is integrated in the grafting. The SVF is isolated from subcutaneous fat by enzymatic and mechanic separation of the lipoaspirate by a specific commercial isolation system. The SVF-enriched fat graft provides both a mechanical barrier and various biological effects at the cellular level, including improving angiogenesis, inflammation, and fibrosis. Both mechanical and biologic effects help to reduce the disorganized axonal outgrowth of the nerve stump during nerve regeneration and hence prevent the recurrence of painful end-neuromata.

The purpose of the study is to illustrate the technical procedure of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a novel treatment of symptomatic end-neuromata. This technique provides advantages of both the mechanical barrier and the biological action at the cellular level by the processed and concentrated SVF.

Stromal الأوعية الدموية الغنية بكسر الدهون تطعيم لعلاج أعراض نهاية-نيوروماتا

The purpose of this study was to methodically illustrate and highlight the crucial steps of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a ...

Methodology for Sputum Induction and Laboratory Processing

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which is interesting in various respiratory diseases like asthma, chronic obstructive pulmonary disease (COPD), chronic cough, or idiopathic pulmonary fibrosis. This technique is well tolerated, safe and non-invasive, but is currently limited to research services and specialized centers in clinical practice because it is technically demanding, time-consuming, and requires trained staff. The success rate of sputum induction and analysis is about 80%.
Here, we describe the induction and laboratory processing of sputum samples. Sputum is induced by inhalation of hypertonic or isotonic saline with salbutamol. For the processing, we use the whole sputum technique. Dithiothreitol (DTT) is used to allow mucolysis of sputum samples. The primary aim of sputum processing is to obtain a differential cell count to study the cell types present in the airway lumen. Additional analyses may also be performed on sputum supernatant and sputum cells, which may allow further investigation into inflammatory processes and immune mechanisms. Examples include studying mediators in sputum supernatant and performing a large spectrum of analysis on sputum cells such as flow cytometry, genomics, or proteomics.
Finally, representative results of sputum analysis in healthy controls, asthmatics, and COPD patients are presented.

Here we describe the technique of sputum induction. This protocol also explains the sputum processing to perform a differential cell count and to collect sputum supernatant and cells for further analysis.

منهجية الاستقراء البصاق وتجهيز المختبرات

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which ...

Sampling Strategies and Processing of Biobank Tissue Samples from Porcine Biomedical Models

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of genetically modified pig models, and the often-limited number of available animals of these models, establishment of (biobank) collections of adequately processed tissue samples suited for a broad spectrum of subsequent analyses methods, including analyses not specified at the time point of sampling, represent meaningful approaches to take full advantage of the translational value of the model. With respect to the peculiarities of porcine anatomy, comprehensive guidelines have recently been established for standardized generation of representative, high-quality samples from different porcine organs and tissues. These guidelines are essential prerequisites for the reproducibility of results and their comparability between different studies and investigators. The recording of basic data, such as organ weights and volumes, the determination of the sampling locations and of the numbers of tissue samples to be generated, as well as their orientation, size, processing and trimming directions, are relevant factors determining the generalizability and usability of the specimen for molecular, qualitative, and quantitative morphological analyses. Here, an illustrative, practical, step-by-step demonstration of the most important techniques for generation of representative, multi-purpose biobank specimen from porcine tissues is presented. The methods described here include determination of organ/tissue volumes and densities, the application of a volume-weighted systematic random sampling procedure for parenchymal organs by point-counting, determination of the extent of tissue shrinkage related to histological embedding of samples, and generation of randomly oriented samples for quantitative stereological analyses, such as isotropic uniform random (IUR) sections generated by the &#34;Orientator&#34; and &#34;Isector&#34; methods, and vertical uniform random (VUR) sections.

The practical application and performance of methods for generation of representative tissue samples of porcine animal models for a broad spectrum of downstream analyses in biobank projects are demonstrated, including volumetry, systematic random sampling, and differential processing of tissue samples for qualitative and quantitative morphologic and molecular analyses types.

استراتيجيات أخذ العينات وتجهيزها لعينات الأنسجة المصرف البيولوجي من النماذج الطبية الخنزير

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of ...

A Training and Testing System for Performing Vascular Reconstruction In Vitro

Manual vascular reconstruction training is essential for a beginner surgeon. However, an optimal training system for vascular reconstruction in vitro has yet to be developed. In this study, we introduce an in vitro training and testing system using a magnetic anchoring technique with which a trainee can practice manual vascular reconstruction individually. Additionally, this system can also be used to test the quality of the reconstruction. The described system includes a vascular reconstruction training machine, magnetic tractors, and a magnetic suture puller. In this manuscript, we detail an end-to-end vein anastomosis using porcine right and left iliac veins. To identify the potential damage caused by a magnetic suture puller on the suture, we created three groups with six segments of 4-0 polypropylene sutures each: a control group with no intervention on the polypropylene suture, a group in which the polypropylene suture is manually pulled with sterile gloves 20x, and a magnetic puller group in which the magnetic puller pulled the polypropylene suture 20x. These groups were tested by light microscopy and breaking strength tests, and the effect of reconstruction was assessed. In the light microscopy test, the control group was less likely to be damaged (p &#60; 0.05) and the number of damaged points of the manual group and magnetic puller group were similar (p &#62; 0.05). The results of the breaking strength test were compared across groups and no significant difference was observed (p &#62; 0.05). The end-to-end anastomosis of the porcine iliac veins was successfully performed using this training system, and the reconstructed veins could undergo 2.0 kPa perfusion pressure. Using this training and testing system the trainee can practice manual vascular reconstruction in vitro individually with the aid of magnetic tractors and a magnetic suture puller, and the quality of the reconstruction can be tested.

Here we present a training and testing system where a trainee can complete manual vascular reconstruction in vitro individually using a magnetic anchoring technique. The system can also be used to test the quality of reconstruction.

نظام التدريب والاختبار لتنفيذ أعاده بناء الاوعيه الدموية في المختبر

Manual vascular reconstruction training is essential for a beginner surgeon. However, an optimal training system for vascular reconstruction in vitro has ...