Name: performing and processing fna of anterior fat pad for amyloid
Uploaded: 2010-10-30T17:00:00
Duration: 9 min 41 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid at JoVE.com

אנו מודים לגב &#39;בוני Phetteplace, RN לסיוע וידאו גרפים במהלך ההפגנה הליך FNAB.

הקדמה עמילואידוזיס מערכתית היא מחלה משתנה מאוד המתייחס בתצהיר תאיים של חלבונים שונים, כי הם יכונו עמילואיד. הפקדת אלה סיבי עמילואיד עם תצורה קפלים בטא מוביל מצגות קליניים שונים בהתאם לאיברים המעורבים. הביטויים הכי רלוונטיות קלינית של עמילואידוזיס מערכתית מצוינים כאשר יש מעורבות של איברים קריטיים כגון הלב, הכבד, ו / או כליה. מבחינה היסטורית, איברים אלה המעורבים יהיה ביופסיה כדי להפגין נוכחות של עמילואיד. אלה הליכים פולשניים בינוני נשאו סיכון משמעותי, כולל דימום. השאיפה כרית שומן מאז הוכח לספק שיטה אמינה פולשנית לצורך זיהוי של עמילואיד עמילואידוזיס מערכתית 1. הליך זה דומה במהותו ל שאיבת שומן תת עורית של שומן בדופן הבטן הקדמית תחת הרדמה מקומית כדי לאחזר רקמות fibroadipose להערכת פיקדונות עמילואיד דלים בתוך דפנות כלי הדם קטן 2. השיטה מנוצל לרוב לצורך זיהוי עמילואיד ברקמות נשאר דפוס אופייני בצבע ירוק תפוח birefringence לראות כאשר קונגו סעיפים אדום מוכתם הם דמיינו תחת מיקרוסקופ אור מקוטב 3. כאשר השאיפה כרית שומן מתבצע, קונגו כתמים אדומים ניתן לעשות זאת על שקופיות או מרוח ישיר או ההכנות לחסום תא של רקמת השומן aspirated. עם זאת, חולים בשלבים המוקדמים של עמילואידוזיס יש מרבצי העמילואיד דלים, אשר מקטינה באופן משמעותי את הרגישות של קונגו אדום מוכתם לחסום חלקים התא 4,5. הערכה Ultrastructural של aspirates כרית השומן על ידי מיקרוסקופית אלקטרונים יש שחזור טוב יותר רגישות משופרת 4. לכן, מומלץ להגיש את כל aspirates כרית שומן להכנת שתי לחסום תא לביצוע במיקרוסקופ אלקטרונים 2. השאיפה כרית שומן היא עלות נמוכה יחסית, שיטה לא פולשנית להשגת רקמה לאבחון עמילואידוזיס מערכתית. מאמר זה מתאר את הליך שומן שאיפה כרית יחד עם פרטים על עיבוד המדגם להגיש הדגימה עבור מכתים הן קונגו אדום והערכה ultrastructural על ידי מיקרוסקופית אלקטרונים. בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את הליך לשחזור פשוטה כדי לאחזר חומר אבחון אופטימלי. 1. ביצוע FNA של Pad שומן Anterior א הרדמה מקומית של האזור (איור 1 &amp; 2) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש באלכוהול או מטליות לניקוי העור המועדף על ידי סוכן מוסד מסוים, לנקות את העור באזור ברבע התחתון של הבטן לרוחב קו האמצע ומתחת הטבור (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סמן אזור בצורת מעוין על 2 x 2 ס&quot;מ כפי שמוצג עם עט סימון באיור 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב כ 10 מ&quot;ל של 1% לידוקאין עם מחט 18G. צרף 25 גרם ½ 1 אינץ מחט המזרק. הסר את כל האוויר שנלכד על ידי הקשה על מזרק זקוף תוך כדי לחיצה על הבוכנה עד נוזלי הוא חילק ולא בועות אוויר נוכחים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי לאורך גבולות באזור מעוין מסומן כבר כפי שמוצג באיור 2. התחל על ידי החדרת מחט 25 גרם ממש מתחת לעור בנקודה ובזהירות לדחוף את המחט מתחת לעור לנקודה X. משוך לאחור על הבוכנה את המזרק על מנת להבטיח כי אתה לא בתוך כלי. ואז לאט לדחוף את הבוכנה לחדור עד 2.5 מ&quot;ל של לידוקאין (כ ¼ של לידוקאין מזרק 10 מ&quot;ל) ואילו נסיגה המחט לנקודה בלי לתת המחט לצאת העור בנקודה A (איור 2a3). בעזרת המחט עדיין מתחת לעור לשנות את הכיוון לעבר נקודה Y (איור 2a4) ולדחוף את מחט תת עורית לנקודה Y (איור 2b1). כמו קודם, לוודא שהמחט אינה כלי ולחלק כ 2.5 מ&quot;ל של לידוקאין תוך לאט למשוך את המחט דרך הנקודה A (איור דרך 2b3 2b4). חזור על צעדים דומים החל מנקודה B ו מחלק לידוקאין תת עורי מנקודות B ל-B ל-X ו-Y (איור 2c1 דרך 2d4). למנוע דימום מן דקירות A ו-B על ידי חברת יישום של היצירה מד סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כעת אתה יכול לבדוק כי האזור הוא הרדים ידי נוגעות קלות את העור תוך במעויין הרדים ידי קצה / פינת פיסת גזה כותנה, על ידי השוואה עם העור unanesthetized סמוכים. </li></ol> ב ביצוע השאיפה כרית השומן (איור 3) (תוכנות של הרדמה מקומית לפני ביצוע השאיפה כרית שומן ניתן לעקוף, בהתאם להעדפות אזוריים נפרדים. FNAB ההליך מבוצע כראוי השאיפה הקדמי כרית שומן ניתן להשלים דקירה אחת. עם זאת, בהתאם לסף הכאב של המטופל הפרט , תמרון של מחט 18G הלוך ושוב לרקמות שומן תת עורי הוא יחסית distresלשיר. השיטה המתוארת כאן הרדמה משיג את האפקט רק שתי דקירות מחט עם 25 גרם ו מסבה את הכאב עם עמידות משופרת הנוהל). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרכיב מחט 18G ½ 1 ס&quot;מ על מזרק 10 מ&quot;ל. הר הרכבה מזרק מחט באחיזת את המזרק (&quot;אחיזה FNAB / אקדח&quot;) עבור יישום נאות לשחרר ואקום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את קצה המחט לתוך שומן תת עורי בתחום מעוין נקי וחומרי ההרדמה (איור 3a). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסגת באופן מלא על הבוכנה של המזרק עם המחט הוכנס הרקמה התת עורית ליצור ואקום (איור 3 ב). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור על הוואקום ולתמרן את המחט קדימה ואחורה בכיוונים שונים של שומן תת עורי (איור 3c דרך 3i). שבץ כל אחד צריך להיות כמה שיותר זמן עם אורך של מחט שנבחר מבלי לאפשר המחט יוצא של העור. הדגימה המרבית מושגת על ידי שינוי כיוון עם כל חבטה (איור 3i). חשוב לשמור על הכיוון של המחט המשיקים serosa ובמקביל פני העור כדי למנוע ניקוב של חלל הצפק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרקמה fibroadipose מצטבר המזרק. מספיק פעם רקמות fibroadipose שברים (עד 1 מ&quot;ל של דם עשיר הדגימה שברים מעורבים) מאוחזרות, לשחרר את הוואקום לחלוטין ולהסיר את המחט (איור 3k). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האם המטופל או עוזר להפעיל לחץ על המשרד בתחום ההליך עם בלוק גזה כדי למנוע extravasation של דם. </li></ol> 2. הדגימה עיבוד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום לפחות 5-6 שברי הרקמה fibroadipose בפתרון glutaraldehyde עבור במיקרוסקופ אלקטרונים (איור 4 ב). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהתאם לפרוטוקול המוסדי, מריחות כמה קטעי רקמות fibroadipose עשוי להיות מוכן על ידי הפצתם בין שתי שקופיות (איור 4 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החומר הנותר מותר קריש בתוך המזרק (זו עשויה להימשך 5-7 דקות, תלוי בזמן הקרישה) (איור 4 ג&#39;). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב 10% בפורמלין בתוך המזרק כך שהחומר קרוש רקמות fibroadipose הוא סולק מן הקיר של המזרק ואת צף חופשי (איור 4C2). הסר את הבוכנה של המזרק (איור 4C3) ולהעביר את רקמת קרושה fibroadipose לתוך מיכל פורמלין 10% מסוף הפתוח של המזרק מול סוף זרבובית (איור 4C4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לייבל המכולות כראוי ולהגיש את glutaraldehyde עבור במיקרוסקופ אלקטרונים ואת פורמלין עבור H &amp; E סעיף וקונגו כתם אדום להערכת תחת מיקרוסקופ מקטב. אם מריחות מוכנים, הם יכולים להיות מעובד על פי הפרוטוקול של המעבדה בודדים. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig1.jpg" alt="איור 1" /> באיור 1. שטח להיות בהרדמה עבור FNAB של כרית שומן הקדמי. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig2.jpg" alt="איור 2" /> איור 2. הרדמה מקומית של האזור. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig3.jpg" alt="איור 3" /> איור 3. ביצוע FNAB של כרית שומן הקדמי. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig4.jpg" alt="איור 4" /> איור 4. עיבוד של כרית קדמית לשאוב שומן יש להגיש למעבדה לאיתור מרבצי העמילואיד. 3. נציג תוצאות <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig5.jpg" alt="איור 5" /> איור 5. עמילואיד בדופן של כלי דם קטנים שברי הרקמה fibroadipose. רקמות Fibroadipose היה פורמלין, מעובד, פרפין מוטבע, מוכתם קונגו אדום, נבדק על ידי מיקרוסקופ אור מקטב. עמילואיד בדופן של כלי דם קטנים מראה ירוק תפוח birefringence (חץ לבן). <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig6.jpg" alt="איור 6" /> איור 6. רקמות חסר עמילואידוזיס. Birefringence תפוחים ירוקים נעדר ברקמות של חולה אחר ללא עמילואידוזיס. כחול birefringence (חץ לבן) של סיבי קולגן, הם בדרך כלל נוכחים כמעט כל דגימות. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig7.jpg" alt="איור 7" /> איור 7. סיבי עמילואיד בקנה אחד עם דפנות כלי הדם. מיקרוסקופ אלקטרונים של ישר, ללא הסתעפות, מפוזרים באופן אקראי, בקוטר 80-10 ננומטר סיבי עמילואיד נוצר על ידי דפנות כלי הדם.

<ol>
	<li>Westermark, P., Stenkvist, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+the+diagnosis+of+systemic+amyloidosis.">A new method for the diagnosis of systemic amyloidosis.</a> Arch Intern Med. 132, 522-523 (1973).</li><li>Devata, S., Hari, P., Markelova, N., Li, R., Shidham, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detecting+AL+Amyloid+in+Abdominal+fat+pad+aspirates:+Is+Congo+red+sufficient?.">Detecting AL Amyloid in Abdominal fat pad aspirates: Is Congo red sufficient?.</a> Amyloid. , .</li><li>Merlini, G., Bellotti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Mechanisms+of+Amyloidosis.">Molecular Mechanisms of Amyloidosis.</a> New Engl J Med. 349 (6), 583-596 (2003).</li><li>Shidham, V. B., Kumar, N., Cihlar, K., Varsegi, G., Markelova, N., Li, R., Hari, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fine+needle+aspiration+of+abdominal+fat+pad+for+diagnosis+of+early+amyloidosis:+How+can+the+clinical+role+of+the+test+be+improved?.">Fine needle aspiration of abdominal fat pad for diagnosis of early amyloidosis: How can the clinical role of the test be improved?.</a> Mod Pathol. 20, 1A-380A (2007).</li><li>Halloush, R., Lavrovskaya, E., Mody, D., Lager, D., Truong, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+typing+of+systemic+amyloidosis:+The+role+of+abdominal+fat+pad+fine+needle+aspiration.">Diagnosis and typing of systemic amyloidosis: The role of abdominal fat pad fine needle aspiration.</a> Cytojournal. 6, 24-24 (2010).</li><li>Hazenberg, I. I., Rijswijk, C. V. a. n., H, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+Accuracy+of+Subcutaneous+Abdominal+Fat+Tissue+Aspiration+for+Detecting+Systemic+Amyloidosis+and+Its+Utility+in+Clinical+Practice.">Diagnostic Accuracy of Subcutaneous Abdominal Fat Tissue Aspiration for Detecting Systemic Amyloidosis and Its Utility in Clinical Practice.</a> Arthritis Rheum. , 54-546 (2006).</li><li>Guy, C. D., Jones, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abdominal+fat+pad+aspiration+biopsy+for+tissue+confirmation+of+systemic+amyloidosis:+specificity,+positive+predictive+value,+and+diagnostic+pitfalls.">Abdominal fat pad aspiration biopsy for tissue confirmation of systemic amyloidosis: specificity, positive predictive value, and diagnostic pitfalls.</a> Diagn Cytopathol. 24, 181-185 (2001).</li><li>Westermark, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosing+Amyloidosis.">Diagnosing Amyloidosis.</a> Scand J Rheumatol Suppl. 24, 327-329 (1995).</li><li>Linke, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+Sensitive+Diagnosis+of+Amyloid+and+Various+Amyloid+Syndromes+Using+Congo+Red+Fluorescence.">Highly Sensitive Diagnosis of Amyloid and Various Amyloid Syndromes Using Congo Red Fluorescence.</a> Virchow Arch. 436, 439-448 (2000).</li><li>Giorgadze, T. A., Shiina, N., Baloch, Z. W., Tomaszewski, J. E., Gupta, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+detection+of+amyloid+in+fat+pad+aspiration:+an+evaluation+of+Congo+red+stain+by+fluorescent+microscopy.">Improved detection of amyloid in fat pad aspiration: an evaluation of Congo red stain by fluorescent microscopy.</a> Diagn Cytopathol. 31, 300-306 (2004).</li><li>DeMay, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fine+Needle+Aspiration+Biopsy.">Fine Needle Aspiration Biopsy.</a> The Art &#38; Science of Cytopathology. , 465-46 (1996).</li><li>Arbustini, E., Vrga, L., Concardi, M., Pallandini, G., Obici, L., Merlini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+and+Immuno-electron+Microscopy+of+Abdominal+Fat+Identifies+and+Characterizes+Amyloid+Fibrils+in+Suspected+Cardiac+Amyloidosis.">Electron and Immuno-electron Microscopy of Abdominal Fat Identifies and Characterizes Amyloid Fibrils in Suspected Cardiac Amyloidosis.</a> Amyloid. 9, 108-114 (2002).</li></ol>

אבחון של עמילואידוזיס מושגת בדרך כלל עם רקמה ביופסיה של איברים מושפעים כמו הכליות, הכבד, ו / או הלב. גישה זו תשואה אבחון גבוהה, לעומת זאת, הוא פולשני עשוי להיות קשור לסיבוכים כולל דימום 2. פי הטבעת, חניכיים, ביופסיות מח עצם הועדפו לאבחון כגישה יחסית פחות פולשנית ב -1960 6,7,8. כרית בטן השאיפה שומן דווחה בשנת 1973 כמו הליך בטוח, פולשנית פשוטה, ופחות יקר לאבחון רקמות של עמילואידוזיס מערכתית 1. עם זאת, הפרטים של ההליך ואת הגישה לעיבוד של הדגימה לאחזר לא דיווחו באופן עקבי. זה וידאו המאמר מתאר את הליך צעד אחר צעד. הגישה לגילוי עמילואיד השאיפה כרית שומן, באופן דומה, גם לא טופל היטב עם כמה מחקרים להשוות ולהעריך גישות שונות 1,5,6,7,8. הערכת הקדמי aspirates כרית שומן עם כתמים אדומים קונגו הוא פחות רגיש עם reproducibility interobserver נמוך במיוחד במקרים הראשונים של עמילואידוזיס עם מרבצי העמילואיד דלים 5. אימונוהיסטוכימיה מבוצעת על פורמלין פרפין, מוטבע לחסום תא סעיפים קבועים קונגו אדום הקרינה שבוצעו על מריחות ציטולוגיה דווחו לשפר את רגישות האבחון 9,10. במיקרוסקופ אלקטרונים משפרת את איתור וזיהוי של סיבי עמילואיד דלים של קירות כלי הדם הקטנים בתוך רקמת שומן fibroadipose כרית aspirates 4, 5. על סמך מידע זה, מאמר זה מתאר עיבוד של הדגימה להכין בלוקים תא (הערכה של קונגו אדום מוכתם לחסום חלקים התא מתחת למיקרוסקופ מקטב עבור birefringence אבחון תפוח ירוק וכן אימונוהיסטוכימיה כמצוין) וכן במיקרוסקופ אלקטרונים. עם זאת, בהתאם לגישה שנבחרה לצורך הערכה של הדגימה עבור עמילואיד, זה עשוי להיות נתון הכנה למרוח ציטולוגיה, לחסום הכנה התא עיבוד במיקרוסקופ אלקטרונים. במעבדות יש לבצע את הבדיקות על מריחות מוכן מחלקיהם רקמות aspirated fibroadipose ומוכתמת עם קונגו אדום ללמוד את 10 פלואורסצנטי. בדרך כלל עמילואידוזיס מאוחר, מיקרוסקופ אור עם מיקרוסקופיה אדום קונגו מקטב עשוי להיות מספיק, עם זאת, בשלבים המוקדמים של המחלה מכתים אדום קונגו עם מקטב במיקרוסקופ על סעיפים לחסום התא פחות רגיש ואמין שומן כרית aspirates 4,5,11 . כתמים מיוחדים נוספים כולל Thioflavin T ניתן להשתמש עם מגבלות דומות. גישות אחרות כדי לזהות עמילואיד לכלול הערכה של מריחות לשאוב עבור עמילואיד עם מיקרוסקופיה אדום קונגו הקיטוב ואת הקרינה 10. מניסיוננו שיטה זו פחות לשחזור. הערכה של כלי הדם כרית שומן עמילואיד באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים מתגבר על המגבלות האלה 4,11. אפיון נוסף של עמילואיד דווחה על ידי מיקרוסקופיה immunoelectron 12, אולם שיטות אלו לא יהיו זמינים באופן נרחב בקביעת אי - טיפול שלישוני. מחטים המשמשים לביצוע הליכים השאיפה עשוי להיות מסווג לפי גדלים מד שלהם מצוין (21, 25 גרם), בינוני (18, 20 גרם), גדול (לדוגמא-14G) 11. Anterior השאיפות כרית שומן דווחו להתבצע באמצעות מודד משתנה החל הביניים (18 עד 20 גרם) קנס (21 עד 22g) 2,10. רוב הנגעים המונית הם aspirated עם מד מחטים עדינה (כגון 25 גרם) כדי לקבל מריחות ציטולוגיה טוב יחד עם עובר נוסף עם מחט מד רחב יותר (כגון 18G) כדי לאחזר מדגם נוסף בלוקים התא. במהלך השאיפה הקדמי כרית שומן, רקמת fibroadipose מלוכדת לא לשאוב היטב עם מחטים עדינה. לחסום תא הכנה במיקרוסקופ אלקטרונים חשובים להערכת קטן דפנות כלי הדם ברקמת שברי fibroadipose ב aspirates שומן. מחטים מד רחבים יותר (כגון 18G) מומלץ תשואה נאותה חומר אבחון 2,10. כאשר ההליך הוא דומה FNAB המקובל, השאיפה כרית השומן נקרא FNAB למרות מחטים מד רחב עשוי לשמש לביצוע זה 5.

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/index/details.stp?id=1747">Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid</a>. There was an error with an author's name. The author's last name had a typo and was corrected to:
Safwan S. Jaradeh
instead of:
Safwan S. Jardeh

Erratum: Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid

מטליות אלכוהול, פדי גזה, עט סימון, 10 מ&quot;ל מזרקים x2, 1% לידוקאין (חומר להרדמה מקומית לידוקאין, אם משמש לבד, זה גורם צריבה ראשונית לאחר החדרה. זה ניתן למנוע באמצעות תערובת 01:01 של 1% לידוקאין ו -1% נתרן דו פחמתי), 18 מד (G) ½ 1 מחטים אינץ x2 (לביצוע FNAB), 25 גרם ½ 1 מחט אינץ&#39; (עבור הזרקת הרדמה מקומית), מחזיק מזרק FNA (&quot;אקדח&quot;), תחבושת, בקבוקון של glutaraldehyde (עבור במיקרוסקופ אלקטרונים), וכן מיכל ביופסיה של 10% פורמלין.

performing and processing fna of anterior fat pad for amyloid

מבחינה היסטורית, ביופסיות הלב, הכבד והכליות בוצעו להפגין פיקדונות עמילואיד עמילואידוזיס. מאז המצגת הקליני של המחלה משתנה כל כך לא ספציפי, את הסיכונים הכרוכים ביופסיות של אלה גדול מדי עבור התשואה אבחון. אתרים אחרים כי יש סיכון נמוך יותר ביופסיה, כגון עור או חניכיים, גם פולשנית יחסית יקר. בנוסף, ביופסיות אלה לא תמיד יש מרבצי העמילואיד מספיק כדי לקבוע אבחנה. השאיפה כרית שומן הוכיח קורלציה קלינית טובה עם עלות נמוכה תחלואה מינימלית. עם זאת, אין פרוטוקולים סטנדרטיים לביצוע הליך זה או עיבוד הדגימה aspirated, אשר מוביל לתוצאות משתנה nonreproducible. שיטת מנוצל לרוב לאיתור עמילואיד ברקמות הוא birefringence בצבע ירוק תפוח על סעיפים קונגו אדום מוכתם באמצעות מיקרוסקופ מקטב. טכניקה זו דורשת לחסום תא הכנת חומר aspirated. למרבה הצער, החולים מציגים בשלב מוקדם של עמילואידוזיס יש כמות מינימלית של עמילואיד אשר מקטינה באופן משמעותי את הרגישות של קונגו אדום מוכתם לחסום חלקים לתא של aspirates כרית שומן. לפיכך, ההערכה של ultrastructural aspirates כרית השומן על ידי מיקרוסקופית אלקטרונים צריך להיות מנוצל, בהתחשב ברגישות מוגברת שלה לגילוי עמילואיד. מאמר זה מדגים תהליך פשוט לשעתקו לביצוע כרית קדמית השאיפה שומן לצורך זיהוי של עמילואיד ניצול שניהם אדום מכתים קונגו סעיפים לחסום התא במיקרוסקופ אלקטרונים לצורך זיהוי ultrastructural.

Watch this Scientific Journal Video about Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid at JoVE.com

Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid

השאיפה כרית שומן היא גישה מועדפת, עלות פולשנית, נמוכה בהשוואה לשיטות אחרות כדי לזהות עמילואיד לאבחון עמילואידוזיס מערכתית. מאמר זה מדגים וידאו המתאר פרוצדורליים לביצוע השאיפה כרית שומן עם עיבוד מתאים של הדגימה לתוצאות אבחון אופטימלי.

ביצוע ועיבוד FNA של Pad שומן Anterior עבור עמילואיד

Historically, heart, liver, and kidney biopsies were performed to demonstrate amyloid deposits in amyloidosis.  Since the clinical presentation of this ...

performing-and-processing-fna-of-anterior-fat-pad-for-amyloid

Research

JoVE Journal

Medicine

Purification and Aggregation of the Amyloid Precursor Protein Intracellular Domain

Amyloid precursor protein (APP) is a type I transmembrane protein associated with the pathogenesis of Alzheimer's disease (AD). APP is characterized by a large extracellular domain and a short cytosolic domain termed the APP intracellular domain (AICD). During maturation through the secretory pathway, APP can be cleaved by proteases termed &alpha;, &beta;, and &gamma;-secretases1. Sequential proteolytic cleavage of APP with &beta; and &gamma;-secretases leads to the production of a small proteolytic peptide, termed A&beta;, which is amyloidogenic and the core constituent of senile plaques. The AICD is also liberated from the membrane after secretase processing, and through interactions with Fe65 and Tip60, can translocate to the nucleus to participate in transcription regulation of multiple target genes2,3. Protein-protein interactions involving the AICD may affect trafficking, processing, and cellular functions of holo-APP and its C-terminal fragments. We have recently shown that AICD can aggregate in vitro, and this process is inhibited by the AD-implicated molecular chaperone ubiquilin-14. Consistent with these findings, the AICD has exposed hydrophobic domains and is intrinsically disordered in vitro5,6, however it obtains stable secondary structure when bound to Fe657. We have proposed that ubiquilin-1 prevents inappropriate inter- and intramolecular interactions of AICD, preventing aggregation in vitro and in intact cells4. While most studies focus on the role of APP in the pathogenesis of AD, the role of AICD in this process is not clear. Expression of AICD has been shown to induce apoptosis8, to modulate signaling pathways9, and to regulate calcium signaling10. Over-expression of AICD and Fe65 in a transgenic mouse model induces Alzheimer's like pathology11, and recently AICD has been detected in brain lysates by western blotting when using appropriate antigen retrieval techniques12. To facilitate structural, biochemical, and biophysical studies of the AICD, we have developed a procedure to produce recombinantly large amounts of highly pure AICD protein. We further describe a method for inducing the in vitro thermal aggregation of AICD and analysis by atomic force microscopy. The methods described are useful for biochemical, biophysical, and structural characterization of the AICD and the effects of molecular chaperones on AICD aggregation.

A method for large-scale purification of the APP intracellular domain (AICD) is described. We also describe methodology to induce in vitro AICD aggregation and visualization by atomic force microscopy. The methods described are useful for biochemical/structural characterization of the AICD and the effects of molecular chaperones on its aggregation.

טיהור וצבירה של תחום החלבון המבשר עמילואיד התאי

Amyloid precursor protein (APP) is a type I transmembrane protein associated with the pathogenesis of Alzheimer's disease (AD). APP is characterized by a ...

Processing of Human Reduction Mammoplasty and Mastectomy Tissues for Cell Culture

Experimental examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated by in vitro culture systems that more accurately model in vivo biology. The use of human derived material for studying cellular differentiation, aging, senescence, and immortalization is particularly advantageous given the many significant molecular differences in these properties between human and commonly utilized rodent cells1-2. Mammary cells present a convenient model system because large quantities of normal and abnormal tissues are available due to the frequency of reduction mammoplasty and mastectomy surgeries.
The mammary gland consists of a complex admixture of many distinct cell types, e.g., epithelial, adipose, mesenchymal, endothelial. The epithelial cells are responsible for the differentiated mammary function of lactation, and are also the origin of the vast majority of human breast cancers. We have developed methods to process mammary gland surgical discard tissues into pure epithelial components as well as mesenchymal cells3. The processed material can be stored frozen indefinitely, or initiated into primary culture. Surgical discard material is transported to the laboratory and manually dissected to enrich for epithelial containing tissue. Subsequent digestion of the dissected tissue using collagenase and hyaluronidase strips stromal material from the epithelia at the basement membrane. The resulting small pieces of the epithelial tree (organoids) can be separated from the digested stroma by sequential filtration on membranes of fixed pore size. Depending upon pore size, fractions can be obtained consisting of larger ductal/alveolar pieces, smaller alveolar clusters, or stromal cells. We have observed superior growth when cultures are initiated as organoids rather than as dissociated single cells. Placement of organoids in culture using low-stress inducing media supports long-term growth of normal HMEC with markers of multiple lineage types (myoepithelial, luminal, progenitor)4-5. Sufficient numbers of cells can be obtained from one individual's tissue to allow extensive experimental examination using standardized cell batches, as well as interrogation using high throughput modalities.
Cultured HMEC have been employed in a wide variety of studies examining the normal processes governing growth, differentiation, aging, and senescence, and how these normal processes are altered during immortal and malignant transformation4-15,16. The effects of growth in the presence of extracellular matrix material, other cell types, and/or 3D culture can be compared with growth on plastic5,15. Cultured HMEC, starting with normal cells, provide an experimentally tractable system to examine factors that may propel or prevent human aging and carcinogenesis.

A method to process human mammary surgical discard material is described. Processed tissue, in the form of organoids, can be stored frozen indefinitely or placed in culture for long-term growth. This method enables experimental examination of normal human epithelial cell biology, and the effects of exogenous perturbations.

עיבוד של הפחתה מאמופלסטית אדם ורקמות כריתה לתא תרבות

Experimental  examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how  normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the functions of proteins involved in oncogenic progression or help to discover new tumor suppressors. In addition, injecting cancer cells into mice with different genotypes might provide a better understanding of the importance of the stromal compartment. Many models may be useful to investigate certain aspects of disease progression but do not recapitulate the entire cancerous process. In contrast, breast cancer cells engraftment to the mammary fat pad of mice better recapitulates the location of the disease and presence of the proper stromal compartment and therefore better mimics human cancerous disease. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into mice orthotopically and explain how to collect tissues to analyse the tumor milieu and metastasis to distant organs. Using this model, many aspects (growth, angiogenesis, and metastasis) of cancer can be investigated simply by providing a proper environment for tumor cells to grow.

Cancer is a complex disease that is influenced by the tissue surrounding the tumor as well as local pro- and anti-inflammatory mediators. Therefore, orthotropic injection models, rather than subcutaneous models may be useful to study cancer progression in a manner that better mimics human pathology.

הזרקת orthotopic של תאי סרטן השד לחלב שומן Pad של עכברים לחקר התפתחות גידול.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft tissue filler as it is readily available, easily obtained, inexpensive, and inherently biocompatible.1 However, despite its burgeoning popularity, fat grafting is hampered by unpredictable results and variable graft survival, with published retention rates ranging anywhere from 10-80%. 1-3
To facilitate investigations on fat grafting, we have therefore developed an animal model that allows for real-time analysis of injected fat volume retention. Briefly, a small cut is made in the scalp of a CD-1 nude mouse and 200-400 &#181;l&#160;of processed lipoaspirate is placed over the skull. The scalp is chosen as the recipient site because of its absence of native subcutaneous fat, and because of the excellent background contrast provided by the calvarium, which aids in the analysis process. Micro-computed tomography (micro-CT) is used to scan the graft at baseline and every two weeks thereafter. The CT images are reconstructed, and an imaging software is used to quantify graft volumes.
Traditionally, techniques to assess fat graft volume have necessitated euthanizing the study animal to provide just a single assessment of graft weight and volume by physical measurement ex vivo. Biochemical and histological comparisons have likewise required the study animal to be euthanized. This described imaging technique offers the advantage of visualizing and objectively quantifying volume at multiple time points after initial grafting without having to sacrifice the study animal. The technique is limited by the size of the graft able to be injected as larger grafts risk skin and fat necrosis. This method has utility for all studies evaluating fat graft viability and volume retention. It is particularly well-suited to providing a visual representation of fat grafts and following changes in volume over time.

Fat grafting is an essential technique for reconstructing soft tissue deficits. However, it remains an unpredictable procedure characterized by variable graft survival. Our goal was to devise a mouse model that utilizes a novel imaging method to compare volume retention between differing techniques of fat graft preparation and delivery.

הערכה של יכולת הקיום של הזרקת שומן האנושי בעכברי עירום עם מיקרו-טומוגרפיה ממוחשבת

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic transplantation of ovarian surface and tubal epithelia include intraperitoneal and intrabursal administration of cells. The respective limitations of these methods include poorly defined location of injected cells and limited space volume. Furthermore, they are poorly suited for long-term structural preservation of transplanted organs. To address these challenges, we have developed an alternative approach, which is based on the introduction of cells and tissue fragments into the mouse fat pad. The mouse ovarian fat pad is located in the immediate vicinity of the ovary and uterine tube (aka oviduct, fallopian tube), and provides a familiar microenvironment for cells and tissues of these organs. In our approach fluorescence-labeled mouse and human cells, and fragments of the uterine tube are engrafted by using minimally traumatic dorsal incision surgery. Transplanted cells and their outgrowths are easily located in the ovarian fat pad for over 40 days. Long-term transplantation of the entire uterine tube allows correct preservation of all principle tissue components, and does not result in adverse side effects, such as fibrosis and inflammation. Our approach should be uniquely applicable for answering important biological questions such as differentiation, regenerative and neoplastic potential of specific cell populations. Furthermore, it should be suitable for studies of microenvironmental factors in normal development and cancer.

We describe an ovarian fad pad transplantation assay suitable for studies of normal and transformed epithelia of the female reproductive tract. The mouse fat pad allows transplantation of large tissue fragments, is easily accessible for surgery and imaging, and provides the most favorable native environment for tissues of M&#252;llerian origin.

השתלת לתוך כרית עכבר השחלות שומן

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

Confirmation of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury in Mice Using Surface Pad Electrocardiography

Many animal models have been established for the study of myocardial remodeling and heart failure due to its status as the number one cause of mortality worldwide. In humans, a pathologic occlusion forms in a coronary artery and reperfusion of that occluded artery is considered essential to maintain viability of the myocardium at risk. Although essential for myocardial recovery, reperfusion of the ischemic myocardium creates its own tissue injury. The physiologic response and healing of an ischemia/reperfusion injury is different from a chronic occlusion injury. Myocardial ischemia/reperfusion injury is gaining recognition as a clinically relevant model for myocardial infarction studies. For this reason, parallel animal models of ischemia/reperfusion are vital in advancing the knowledge base regarding myocardial injury. Typically, ischemia of the mouse heart after left anterior descending (LAD) coronary artery occlusion is confirmed by visible pallor of the myocardium below the occlusion (ligature). However, this offers only a subjective way of confirming correct or consistent ligature placement, as there are multiple major arteries that could cause pallor in different myocardial regions. A method of recording electrocardiographic changes to assess correct ligature placement and resultant ischemia as well as reperfusion, to supplement observed myocardial pallor, would help yield consistent infarct sizes in mouse models. In turn, this would help decrease the number of mice used. Additionally, electrocardiographic changes can continue to be recorded non-invasively in a time-dependent fashion after the surgery. This article will demonstrate a method of electrocardiographically confirming myocardial ischemia and reperfusion in real time.

During murine myocardial ischemia/reperfusion surgery, correct placement of the occluding ligature is typically confirmed by visible observation of myocardial pallor. Herein, a method of electrocardiographically confirming ischemia and reperfusion, to supplement observed myocardial pallor, is demonstrated in male C57Bl/6 mice.

אישור של שריר לב איסכמיה ופציעת reperfusion בעכברים באמצעות אלקטרוקרדיוגרפיה Pad Surface

Many animal models have been established for the study of myocardial remodeling and heart failure due to its status as the number one cause of mortality ...

Stromal Vascular Fraction-enriched Fat Grafting for the Treatment of Symptomatic End-neuromata

The purpose of this study was to methodically illustrate and highlight the crucial steps of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a novel treatment of symptomatic end-neuromata of peripheral sensory nerves, and in this study, specifically of the superficial branch of the radial nerve (SBRN). Despite a multitude of existing treatments, persistent postoperative pain and common pain relapse are still very common, independent of the procedure assessed. The neuroma is microsurgically excised accordingly to standardized protocol. Instead of the relocation of the regenerating nerve stump in neighboring anatomical structures, such as muscle or bone, a fat graft is applied perifocally and acts as a mechanical barrier. In order to reduce the fat resorption rate and boost the regenerative potential of the graft, the highly concentrated SVF is integrated in the grafting. The SVF is isolated from subcutaneous fat by enzymatic and mechanic separation of the lipoaspirate by a specific commercial isolation system. The SVF-enriched fat graft provides both a mechanical barrier and various biological effects at the cellular level, including improving angiogenesis, inflammation, and fibrosis. Both mechanical and biologic effects help to reduce the disorganized axonal outgrowth of the nerve stump during nerve regeneration and hence prevent the recurrence of painful end-neuromata.

The purpose of the study is to illustrate the technical procedure of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a novel treatment of symptomatic end-neuromata. This technique provides advantages of both the mechanical barrier and the biological action at the cellular level by the processed and concentrated SVF.

סטרומה כלי דם מועשר שבר השמן הרכבה לטיפול סימפטומטי סוף-neuromata

The purpose of this study was to methodically illustrate and highlight the crucial steps of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a ...

Methodology for Sputum Induction and Laboratory Processing

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which is interesting in various respiratory diseases like asthma, chronic obstructive pulmonary disease (COPD), chronic cough, or idiopathic pulmonary fibrosis. This technique is well tolerated, safe and non-invasive, but is currently limited to research services and specialized centers in clinical practice because it is technically demanding, time-consuming, and requires trained staff. The success rate of sputum induction and analysis is about 80%.
Here, we describe the induction and laboratory processing of sputum samples. Sputum is induced by inhalation of hypertonic or isotonic saline with salbutamol. For the processing, we use the whole sputum technique. Dithiothreitol (DTT) is used to allow mucolysis of sputum samples. The primary aim of sputum processing is to obtain a differential cell count to study the cell types present in the airway lumen. Additional analyses may also be performed on sputum supernatant and sputum cells, which may allow further investigation into inflammatory processes and immune mechanisms. Examples include studying mediators in sputum supernatant and performing a large spectrum of analysis on sputum cells such as flow cytometry, genomics, or proteomics.
Finally, representative results of sputum analysis in healthy controls, asthmatics, and COPD patients are presented.

Here we describe the technique of sputum induction. This protocol also explains the sputum processing to perform a differential cell count and to collect sputum supernatant and cells for further analysis.

מתודולוגיה Sputum אינדוקציה ועיבוד מעבדה

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which ...

Sampling Strategies and Processing of Biobank Tissue Samples from Porcine Biomedical Models

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of genetically modified pig models, and the often-limited number of available animals of these models, establishment of (biobank) collections of adequately processed tissue samples suited for a broad spectrum of subsequent analyses methods, including analyses not specified at the time point of sampling, represent meaningful approaches to take full advantage of the translational value of the model. With respect to the peculiarities of porcine anatomy, comprehensive guidelines have recently been established for standardized generation of representative, high-quality samples from different porcine organs and tissues. These guidelines are essential prerequisites for the reproducibility of results and their comparability between different studies and investigators. The recording of basic data, such as organ weights and volumes, the determination of the sampling locations and of the numbers of tissue samples to be generated, as well as their orientation, size, processing and trimming directions, are relevant factors determining the generalizability and usability of the specimen for molecular, qualitative, and quantitative morphological analyses. Here, an illustrative, practical, step-by-step demonstration of the most important techniques for generation of representative, multi-purpose biobank specimen from porcine tissues is presented. The methods described here include determination of organ/tissue volumes and densities, the application of a volume-weighted systematic random sampling procedure for parenchymal organs by point-counting, determination of the extent of tissue shrinkage related to histological embedding of samples, and generation of randomly oriented samples for quantitative stereological analyses, such as isotropic uniform random (IUR) sections generated by the &#34;Orientator&#34; and &#34;Isector&#34; methods, and vertical uniform random (VUR) sections.

The practical application and performance of methods for generation of representative tissue samples of porcine animal models for a broad spectrum of downstream analyses in biobank projects are demonstrated, including volumetry, systematic random sampling, and differential processing of tissue samples for qualitative and quantitative morphologic and molecular analyses types.

אסטרטגיות דגימה ועיבוד של דגימות רקמה Biobank של מודלים ביו חזירי

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of ...

A Training and Testing System for Performing Vascular Reconstruction In Vitro

Manual vascular reconstruction training is essential for a beginner surgeon. However, an optimal training system for vascular reconstruction in vitro has yet to be developed. In this study, we introduce an in vitro training and testing system using a magnetic anchoring technique with which a trainee can practice manual vascular reconstruction individually. Additionally, this system can also be used to test the quality of the reconstruction. The described system includes a vascular reconstruction training machine, magnetic tractors, and a magnetic suture puller. In this manuscript, we detail an end-to-end vein anastomosis using porcine right and left iliac veins. To identify the potential damage caused by a magnetic suture puller on the suture, we created three groups with six segments of 4-0 polypropylene sutures each: a control group with no intervention on the polypropylene suture, a group in which the polypropylene suture is manually pulled with sterile gloves 20x, and a magnetic puller group in which the magnetic puller pulled the polypropylene suture 20x. These groups were tested by light microscopy and breaking strength tests, and the effect of reconstruction was assessed. In the light microscopy test, the control group was less likely to be damaged (p &#60; 0.05) and the number of damaged points of the manual group and magnetic puller group were similar (p &#62; 0.05). The results of the breaking strength test were compared across groups and no significant difference was observed (p &#62; 0.05). The end-to-end anastomosis of the porcine iliac veins was successfully performed using this training system, and the reconstructed veins could undergo 2.0 kPa perfusion pressure. Using this training and testing system the trainee can practice manual vascular reconstruction in vitro individually with the aid of magnetic tractors and a magnetic suture puller, and the quality of the reconstruction can be tested.

Here we present a training and testing system where a trainee can complete manual vascular reconstruction in vitro individually using a magnetic anchoring technique. The system can also be used to test the quality of reconstruction.

מערכת הדרכה ובדיקה לביצוע שחזור כלי דם במערכת החוץ

Manual vascular reconstruction training is essential for a beginner surgeon. However, an optimal training system for vascular reconstruction in vitro has ...