Name: performing and processing fna of anterior fat pad for amyloid
Uploaded: 2010-10-30T17:00:00
Duration: 9 min 41 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid at JoVE.com

हम सुश्री बोनी Phetteplace, आर.एन. वीडियो FNAB प्रक्रिया प्रदर्शन रेखांकन के दौरान सहायता के लिए धन्यवाद.

परिचय प्रणालीगत amyloidosis एक उच्च चर रोग है कि विभिन्न प्रोटीन है कि सामूहिक amyloid रूप में संदर्भित कर रहे हैं की कोशिकी बयान को संदर्भित करता है है. बीटा pleated विन्यास के साथ इन amyloid तंतु के बयान शामिल अंगों के आधार पर विभिन्न नैदानिक ​​प्रस्तुतियों के लिए होता है. प्रणालीगत amyloidosis के सबसे नैदानिक ​​प्रासंगिक अभिव्यक्तियों में नोट कर रहे हैं जब दिल, जिगर, और / या गुर्दे जैसे महत्वपूर्ण अंगों की भागीदारी है. ऐतिहासिक, इन शामिल अंगों को amyloid की उपस्थिति का प्रदर्शन biopsied होगा. ये मामूली आक्रामक प्रक्रियाओं नकसीर सहित एक महत्वपूर्ण जोखिम ले. फैट पैड आकांक्षा के बाद से प्रणालीगत amyloidosis 1 में amyloid का पता लगाने के लिए एक विश्वसनीय और noninvasive विधि प्रदान दिखाया गया है. इस प्रक्रिया को अनिवार्य रूप से छोटे रक्त वाहिका 2 दीवारों में अल्प amyloid जमा मूल्यांकन के लिए fibroadipose ऊतक पुनः प्राप्त करने के लिए स्थानीय संज्ञाहरण के तहत पूर्वकाल पेट की दीवार में वसा के liposuction के लिए तुलनीय है. ऊतकों में amyloid पहचान के लिए सबसे अधिक बार उपयोग विधि विशेषता सेब हरे birefringence पैटर्न देखा है जब कांगो लाल दाग वर्गों एक polarized प्रकाश 3 खुर्दबीन के नीचे कल्पना कर रहे हैं रहता है. जब वसा पैड आकांक्षा किया जाता है, कांगो लाल दाग या तो सीधे लिप्त स्लाइड्स या aspirated वसा ऊतकों के सेल ब्लॉक तैयारी पर किया जा सकता है. हालांकि, amyloidosis के प्रारंभिक चरणों में रोगियों अल्प amyloid जमा है, जो बहुत कांगो लाल दाग सेल ब्लॉक 4,5 वर्गों की संवेदनशीलता को कम कर देता है. इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा वसा पैड रेस्पायरेट्रस के Ultrastructural मूल्यांकन बेहतर reproducibility और बेहतर 4 संवेदनशीलता है. इसलिए, यह एक सेल ब्लॉक के दोनों तैयार करने के लिए और प्रदर्शन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी 2 के लिए सभी वसा पैड रेस्पायरेट्रस प्रस्तुत करने की सिफारिश की है. फैट पैड आकांक्षा एक अपेक्षाकृत कम लागत और ऊतक प्राप्त करने के लिए प्रणालीगत amyloidosis निदान के लिए noninvasive विधि है. यह आलेख नमूना प्रसंस्करण के बारे में जानकारी के साथ साथ वसा पैड आकांक्षा प्रक्रिया का वर्णन करने के लिए दोनों कांगो लाल धुंधला हो जाना और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा ultrastructural मूल्यांकन के लिए नमूना प्रस्तुत है. इस वीडियो में, हम यह प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और सरल प्रक्रिया का प्रदर्शन करने के लिए इष्टतम नैदानिक ​​सामग्री निकालते हैं. 1. पूर्वकाल फैट पैड के FNA प्रदर्शन स्थानीय क्षेत्र के ए Anesthetization (चित्रा 1 &amp; 2) <ol><li> शराब swabs या त्वचा की सफाई एक विशेष संस्था द्वारा पसंद एजेंट का प्रयोग, पेट के निचले हिस्से के वृत्त का चतुर्थ भाग क्षेत्र midline के लिए पार्श्व पर और नाभि (चित्रा 1) के नीचे त्वचा को साफ. </li><li> मार्क 2 x 2 इंच के बारे में एक तिर्यग्वर्ग आकार क्षेत्र के रूप में एक अंकन कलम के साथ चित्र 1 में दिखाया गया है. </li><li> Aspirate 1% के लगभग 10 एमएल एक 18G सुई के साथ lidocaine. संलग्न एक 25g 1 आधा इंच सिरिंज के लिए सुई. जबकि सवार दबाने जब तक तरल तिरस्कृत है और कोई हवाई बुलबुले मौजूद हैं ईमानदार सिरिंज दोहन द्वारा किसी भी फंस हवा निकालें. </li><li> विषमकोण पहले से ही चिह्नित क्षेत्र के रूप में चित्रा 2 में दिखाया गया है की सीमाओं के साथ anesthetize. एक बिंदु पर त्वचा के नीचे सिर्फ 25g सुई डालने से शुरू करें और ध्यान से सुई subcutaneously पुश करने के लिए बिंदु एक्स सिरिंज सवार पर वापस खींचो करने के लिए सुनिश्चित करें कि आप एक पोत के भीतर नहीं हैं. फिर धीरे धीरे सवार धक्का lidocaine के 2.5 एमएल (lidocaine ¼ 10 एमएल सिरिंज के बारे में) करने के लिए घुसपैठ जबकि सुई दे सुई त्वचा से बाहर (2a3 चित्रा) के एक बिंदु पर आते हैं बिना बात करने के लिए वापस ले लिया. सुई के साथ अभी भी त्वचा के नीचे बिंदु वाई (2A4 चित्रा) की ओर दिशा बदलने और सुई बिंदु वाई (2b1 चित्रा) subcutaneously धक्का. पहले के रूप में की पुष्टि, कि सुई एक बर्तन में नहीं है और लगभग 2.5 एमएल lidocaine के बग़ैर जबकि धीरे बिंदु के माध्यम से सुई को वापस लेने के लिए एक (चित्रा 2b4 माध्यम 2B3). समान अंक बी से बिंदु बी और वितरण lidocaine के चमड़े के नीचे से एक्स और बी वाई (चित्रा 2d4 के माध्यम से 2c1) शुरू चरणों को दोहराएँ. चुभन से खून बह रहा रोकें और बाँझ गेज टुकड़ा की फर्म आवेदन द्वारा बी. </li><li> अब आप जाँच करें कि क्षेत्र हल्के anesthetized विषमकोण भीतर आसन्न unanesthetized त्वचा के साथ तुलना करके टिप / कपास धुंध टुकड़ा के कोने से त्वचा को छू द्वारा anesthetized है हो सकता है. </li></ol> बी वसा पैड आकांक्षा (चित्रा 3) प्रदर्शन (वसा पैड आकांक्षा के प्रदर्शन से पहले आवेदन स्थानीय संज्ञाहरण के नजरअंदाज हो सकता है, क्षेत्रीय और व्यक्तिगत वरीयताओं के आधार पर हो सकता है पूर्वकाल वसा पैड आकांक्षा के लिए ठीक से प्रदर्शन FNAB प्रक्रिया एक चुभन में पूरा किया जा सकता है है. लेकिन व्यक्तिगत रोगी की दर्द दहलीज पर निर्भर करता है, 18G सुई की उपचर्म वसा ऊतकों में maneuvering के आगे और पीछे अपेक्षाकृत distres हैगाते हैं. anesthetization विधि का वर्णन यहाँ केवल 25g सुई के साथ दो चुभन में प्रभाव प्राप्त होता है और प्रक्रिया में सुधार सहिष्णुता के साथ दर्द averts.) <ol><li> 10 एमएल सिरिंज पर 18G 1 आधा इंच सुई इकट्ठे. उचित आवेदन और वैक्यूम की रिहाई के लिए सिरिंज पकड़ (&quot;FNAB पकड़ / बंदूक&quot;) में सिरिंज सुई विधानसभा माउंट. </li><li> शुद्ध और anesthetized विषमकोण क्षेत्र (चित्र 3a) के भीतर वसा में सुई की नोक डालें. </li><li> पूरी तरह से उपचर्म ऊतक में सम्मिलित करने के लिए वैक्यूम (चित्रा 3b) उत्पन्न सुई के साथ सिरिंज सवार वापस लेना. </li><li> वैक्यूम बनाए रखें और सुई उपचर्म वसा (चित्रा -3 सी के माध्यम से 3i) में विभिन्न दिशाओं में पीछे और आगे पैंतरेबाज़ी. प्रत्येक स्ट्रोक के रूप में संभव के रूप में लंबे समय दे सुई त्वचा के बाहर आ बिना चयनित सुई की लंबाई के साथ किया जाना चाहिए. अधिकतम नमूने प्रत्येक स्ट्रोक (3i चित्रा) के साथ दिशा बदलने के द्वारा हासिल की है. यह serosa के लिए स्पर्शरेखा है और त्वचा की सतह के समानांतर peritoneal गुहा के puncturing से बचने सुई की दिशा रखना महत्वपूर्ण है. </li><li> fibroadipose ऊतक सिरिंज में जम जाता है. एक बार पर्याप्त fibroadipose ऊतक टुकड़े (टुकड़े युक्त रक्त मिश्रित नमूना के लिए 1 एमएल) प्राप्त की, निर्वात पूरी तरह से जारी है और सुई (चित्रा 3k) निकालने. </li><li> रोगी है या सहायक प्रक्रिया के क्षेत्र पर धुंध के एक पैड के लिए खून की extravasation को रोकने के साथ फर्म दबाव लागू. </li></ol> 2. नमूना प्रसंस्करण <ol><li> इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (4B चित्रा) के लिए glutaraldehyde समाधान में fibroadipose ऊतक के कम से कम 5-6 टुकड़े रखें. </li><li> संस्थागत प्रोटोकॉल पर निर्भर करता है, fibroadipose ऊतक के टुकड़े के कुछ स्मीयरों उन्हें दो स्लाइड्स (चित्रा -4 ए) के बीच फैल द्वारा तैयार किया जा सकता है. </li><li> शेष सामग्री सिरिंज में थक्का (यह 5-7 मिनट ले, थक्के समय के आधार पर हो सकता है) (चित्रा 4C) करने की अनुमति दी है. </li><li> 10 formalin% सिरिंज ताकि पका हुआ fibroadipose ऊतक सामग्री सिरिंज और मुक्त फ्लोटिंग (4C2 चित्रा) की दीवार से उखाड़ फेंकना है Aspirate. सिरिंज (चित्रा 4C3) से सवार निकालें और नोजल अंत (चित्रा 4C4) के विपरीत सिरिंज के खुले अंत से 10% formalin कंटेनर में पका हुआ fibroadipose ऊतक हस्तांतरण. </li><li> कंटेनर उचित लेबल और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए glutaraldehyde और एच एंड ई अनुभाग और कांगो माइक्रोस्कोपी ध्रुवीकरण के तहत मूल्यांकन के लिए दाग लाल के लिए formalin submit. यदि स्मीयरों तैयार हैं, वे व्यक्तिगत प्रयोगशाला के प्रोटोकॉल के अनुसार संसाधित किया जा सकता है. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig1.jpg" alt="चित्रा 1" /> चित्रा 1. पूर्वकाल वसा पैड के FNAB लिए anesthetized क्षेत्र. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig2.jpg" alt="चित्रा 2" /> चित्रा 2. स्थानीय क्षेत्र के Anesthetization. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig3.jpg" alt="चित्रा 3" /> चित्रा 3. पूर्वकाल वसा पैड के FNAB प्रदर्शन. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig4.jpg" alt="चित्रा 4" /> चित्रा 4. पूर्वकाल वसा पैड के प्रसंस्करण amyloid जमा का पता लगाने के लिए प्रयोगशाला में प्रस्तुत किया जा aspirate. 3. प्रतिनिधि परिणाम <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig5.jpg" alt="चित्रा 5" /> चित्रा 5. Fibroadipose ऊतक टुकड़े में छोटे रक्त वाहिकाओं की दीवार में amyloid Fibroadipose ऊतक formalin संसाधित, आयल, एम्बेडेड था कांगो लाल के साथ दाग, और प्रकाश माइक्रोस्कोपी ध्रुवीकरण द्वारा जांच की. छोटे से रक्त वाहिकाओं की दीवार में amyloid सेब हरे birefringence (सफेद तीर) दिखाता है. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig6.jpg" alt="चित्रा 6" /> चित्रा 6. ऊतक amyloidosis सेब हरे birefringence कमी. Amyloidosis बिना अनुपस्थित है एक अलग मरीज ​​के ऊतकों में. ब्लू कोलेजन फाइबर की birefringence (सफेद तीर), आमतौर पर लगभग सभी नमूनों में मौजूद हैं. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig7.jpg" alt="7 चित्रा" /> 7 चित्रा. रक्त वाहिका दीवार में amyloid के साथ संगत सीधे, गैर - शाखाओं में बंटी के इलेक्ट्रॉन माइक्रोग्राफ तंतुओं बेतरतीब ढंग से बिखरे हुए 8-10 एनएम व्यास रक्त वाहिका दीवार में amyloid द्वारा गठित तंतुओं, .

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ब्याज की कोई संघर्ष है.

Amyloidosis का निदान आमतौर पर प्रभावित अंगों जैसे गुर्दे, जिगर, और / या दिल की एक ऊतक बायोप्सी के साथ हासिल की है. इस दृष्टिकोण उच्च नैदानिक ​​उपज है, तथापि, आक्रामक है और दो ​​नकसीर सहित जटिलताओं के साथ जुड़ा हो सकता है है . गुदा, मसूड़ों, और अस्थि मज्जा बायोप्सी निदान के लिए 6,7,8 1960 के दशक में अपेक्षाकृत कम आक्रामक दृष्टिकोण के रूप में पसंद किया गया . पेट वसा पैड आकांक्षा 1973 में एक सुरक्षित, न्यूनतम इनवेसिव, प्रणालीगत एक amyloidosis के ऊतक निदान के लिए सरल है, और कम खर्चीला प्रक्रिया के रूप में रिपोर्ट किया गया था. हालांकि, प्रक्रिया और पुनर्प्राप्त नमूना के प्रसंस्करण के लिए दृष्टिकोण का ब्यौरा coherently सूचना नहीं है. यह वीडियो और लेख के कदम से कदम प्रक्रिया का वर्णन. वसा पैड आकांक्षा में amyloid का पता लगाने के लिए दृष्टिकोण, इसी तरह, यह भी कुछ अध्ययनों की तुलना करने और विभिन्न दृष्टिकोणों 1,5,6,7,8 मूल्यांकन के साथ अच्छी तरह से मानकीकृत नहीं है. पूर्वकाल कांगो लाल धुंधला के साथ वसा पैड रेस्पायरेट्रस का मूल्यांकन कम अल्प amyloid 5 जमा के साथ amyloidosis के प्रारंभिक मामलों में विशेष रूप से कम interobserver reproducibility के साथ संवेदनशील है. Immunohistochemistry formalin तय आयल - एम्बेडेड सेल ब्लॉक अनुभागों पर प्रदर्शन किया और कांगो लाल कोशिका विज्ञान स्मीयरों पर प्रदर्शन प्रतिदीप्ति नैदानिक ​​9,10 संवेदनशीलता में सुधार करने के लिए सूचित किया गया है. इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का पता लगाने और अल्प amyloid तंतु की पहचान fibroadipose ऊतकों में वसा पैड रेस्पायरेट्रस 4, 5 में छोटे रक्त वाहिनियों की दीवारों में सुधार. इस जानकारी के आधार पर, इस अनुच्छेद सेल ब्लॉक (कांगो लाल दाग नैदानिक ​​सेब हरे birefringence के लिए ध्रुवीकरण खुर्दबीन के नीचे सेल ब्लॉक वर्गों के मूल्यांकन के लिए और भी immunohistochemistry के रूप में संकेत दिया) और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए तैयार करने के लिए नमूना के प्रसंस्करण का वर्णन करता है. हालांकि, amyloid के लिए नमूना के मूल्यांकन के लिए चयनित दृष्टिकोण पर निर्भर करता है, यह कोशिका विज्ञान स्मियर तैयारी, सेल ब्लॉक तैयारी, और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए प्रसंस्करण के अधीन किया जा सकता है. कुछ प्रयोगशालाओं से aspirated fibroadipose ऊतक टुकड़े से तैयार है और कांगो लाल के साथ दाग प्रतिदीप्ति 10 अध्ययन स्मीयरों पर परीक्षण प्रदर्शन करते हैं . आम तौर पर एक देर amyloidosis में, कांगो लाल ध्रुवीकरण माइक्रोस्कोपी के साथ प्रकाश माइक्रोस्कोपी के लिए पर्याप्त हो सकता है, लेकिन, सेल ब्लॉक खंडों पर माइक्रोस्कोपी ध्रुवीकरण के साथ रोग कांगो लाल धुंधला के प्रारंभिक चरणों में कम संवेदनशील और वसा पैड रेस्पायरेट्रस 4,5,11 के लिए विश्वसनीय है . Thioflavin टी सहित अन्य विशेष दाग इसी तरह की सीमाओं के साथ इस्तेमाल किया जा सकता है. अन्य amyloid का पता लगाने के दृष्टिकोण कांगो लाल ध्रुवीकरण माइक्रोस्कोपी और प्रतिदीप्ति 10 के साथ amyloid के लिए aspirate स्मीयरों के मूल्यांकन शामिल हैं. हमारे अनुभव में इस विधि का कम प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है. इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा amyloid के लिए वसा पैड में रक्त वाहिकाओं का मूल्यांकन इन सीमाओं 4,11 पर काबू. Amyloid के आगे लक्षण वर्णन immunoelectron 12 माइक्रोस्कोपी द्वारा सूचित किया गया है, तथापि, इन तरीकों गैर तृतीयक देखभाल सेटिंग में व्यापक रूप से उपलब्ध नहीं हो सकता है. सुई आकांक्षा प्रक्रियाओं के प्रदर्शन के लिए इस्तेमाल किया उनके गेज आकार ठीक में (21-25g), मध्यवर्ती (18 20G), और बड़े (जैसे - 14G) 11 के अनुसार वर्गीकृत किया जा सकता है. पूर्वकाल वसा पैड आकांक्षाओं 2,10 ठीक (21 करने के लिए 22G) मध्यवर्ती (18 के लिए 20G) से लेकर चर गेज का उपयोग करके प्रदर्शन किया जा सूचित किया गया है. बड़े पैमाने पर घावों के अधिकांश बेहतर गेज सुई (जैसे 25g के रूप में) के साथ से aspirated व्यापक गेज सुई (जैसे 18G) सेल ब्लॉकों के लिए अतिरिक्त नमूना प्राप्त करने के साथ अतिरिक्त गुजरता के साथ अच्छा कोशिका विज्ञान स्मीयरों प्राप्त है. पूर्वकाल वसा पैड आकांक्षा के दौरान एकजुट fibroadipose ऊतक महीन सुई के साथ अच्छी तरह से नहीं aspirate करता है. सेल ब्लॉक तैयारी और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी fibroadipose वसा रेस्पायरेट्रस में ऊतक टुकड़े में छोटी रक्त वाहिनियों की दीवारों के मूल्यांकन के लिए महत्वपूर्ण हैं. व्यापक गेज सुई (जैसे 18G के रूप में) नैदानिक ​​पर्याप्त सामग्री 2,10 उपज के लिए सिफारिश कर रहे हैं. के रूप में प्रक्रिया पारंपरिक FNAB करने के लिए तुलनीय है, वसा पैड आकांक्षा FNAB के रूप में जाना जाता है भले ही व्यापक गेज सुई यह 5 प्रदर्शन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

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Safwan S. Jardeh

Erratum: Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid

शराब swabs, धुंध पैड, कलम अंकन, 10 एमएल सीरिंज x2, 1% lidocaine (स्थानीय संवेदनाहारी यदि lidocaine अकेले इस्तेमाल किया है, यह टपकाना के बाद एक प्रारंभिक जलन का कारण बनता है यह 1% की एक 1:1 मिश्रण का उपयोग करके रोका जा सकता है है. lidocaine और 1% सोडियम द्वि - कार्बोनेट), 18 (G) गेज 1 आधा इंच x2 सुइयों (FNAB प्रदर्शन के लिए), 25g 1 आधा इंच (स्थानीय चतनाशून्य करनेवाली औषधि इंजेक्शन लगाने के लिए) सुई, सिरिंज FNA धारक (&quot;बंदूक&quot;), पट्टी, glutaraldehyde की शीशी (इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए), और 10 formalin% की बायोप्सी कंटेनर.

performing and processing fna of anterior fat pad for amyloid

ऐतिहासिक, दिल, जिगर और गुर्दे की बायोप्सी amyloidosis में amyloid जमा प्रदर्शित करने के लिए प्रदर्शन किया गया. चूंकि इस रोग के नैदानिक ​​प्रस्तुति तो चर और गैर विशिष्ट है, इन बायोप्सी के जुड़े जोखिम भी निदान उपज के लिए महान हैं. अन्य साइटों है कि त्वचा या मसूड़ों जैसे एक कम बायोप्सी जोखिम, है, भी कर रहे हैं अपेक्षाकृत इनवेसिव और महंगी है. इसके अलावा, इन बायोप्सी हमेशा पर्याप्त amyloid जमा नहीं है के लिए एक निदान की स्थापना कर सकते हैं. फैट पैड आकांक्षा कम लागत और न्यूनतम रुग्णता के साथ अच्छा नैदानिक ​​सहसंबंध का प्रदर्शन किया है. हालांकि, वहाँ इस प्रक्रिया के प्रदर्शन या aspirated नमूना है, जो चर और nonreproducible परिणाम की ओर जाता है प्रसंस्करण के लिए कोई मानकीकृत प्रोटोकॉल रहे हैं. ऊतकों में amyloid का पता लगाने के लिए सबसे अधिक बार उपयोग साधन कांगो लाल दाग एक polarizing खुर्दबीन का उपयोग वर्गों पर एक सेब हरे birefringence है. इस तकनीक को सेल से aspirated सामग्री के ब्लॉक तैयारी की आवश्यकता है. दुर्भाग्य से, amyloidosis के प्रारंभिक चरण में पेश रोगियों amyloid जो बहुत कांगो लाल दाग वसा पैड रेस्पायरेट्रस के सेल ब्लॉक वर्गों की संवेदनशीलता को कम कर देता है की न्यूनतम मात्रा है. इसलिए, इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा वसा पैड रेस्पायरेट्रस ultrastructural मूल्यांकन का उपयोग किया जा चाहिए amyloid पता लगाने के लिए वृद्धि की संवेदनशीलता को देखते हुए. इस लेख सेल ब्लॉक वर्गों के दोनों कांगो लाल धुंधला हो जाना और ultrastructural पहचान के लिए इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी उपयोग amyloid का पता लगाने के के लिए पूर्वकाल वसा पैड आकांक्षा प्रदर्शन के लिए एक सरल और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य प्रक्रिया को दर्शाता है.

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Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid

फैट पैड आकांक्षा एक पसंदीदा, कम आक्रामक और कम लागत के रूप में अन्य विधियों की तुलना में प्रणालीगत amyloidosis के निदान के लिए amyloid का पता लगाने के दृष्टिकोण है. यह वीडियो लेख इष्टतम नैदानिक ​​परिणाम के लिए नमूने के उचित प्रसंस्करण के साथ वसा पैड आकांक्षा प्रदर्शन के लिए प्रक्रियात्मक रूपरेखा को दर्शाता है.

प्रदर्शन और प्रसंस्करण Amyloid के लिए पूर्वकाल फैट पैड के FNA

Historically, heart, liver, and kidney biopsies were performed to demonstrate amyloid deposits in amyloidosis.  Since the clinical presentation of this ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

Purification and Aggregation of the Amyloid Precursor Protein Intracellular Domain

Amyloid precursor protein (APP) is a type I transmembrane protein associated with the pathogenesis of Alzheimer's disease (AD). APP is characterized by a large extracellular domain and a short cytosolic domain termed the APP intracellular domain (AICD). During maturation through the secretory pathway, APP can be cleaved by proteases termed &alpha;, &beta;, and &gamma;-secretases1. Sequential proteolytic cleavage of APP with &beta; and &gamma;-secretases leads to the production of a small proteolytic peptide, termed A&beta;, which is amyloidogenic and the core constituent of senile plaques. The AICD is also liberated from the membrane after secretase processing, and through interactions with Fe65 and Tip60, can translocate to the nucleus to participate in transcription regulation of multiple target genes2,3. Protein-protein interactions involving the AICD may affect trafficking, processing, and cellular functions of holo-APP and its C-terminal fragments. We have recently shown that AICD can aggregate in vitro, and this process is inhibited by the AD-implicated molecular chaperone ubiquilin-14. Consistent with these findings, the AICD has exposed hydrophobic domains and is intrinsically disordered in vitro5,6, however it obtains stable secondary structure when bound to Fe657. We have proposed that ubiquilin-1 prevents inappropriate inter- and intramolecular interactions of AICD, preventing aggregation in vitro and in intact cells4. While most studies focus on the role of APP in the pathogenesis of AD, the role of AICD in this process is not clear. Expression of AICD has been shown to induce apoptosis8, to modulate signaling pathways9, and to regulate calcium signaling10. Over-expression of AICD and Fe65 in a transgenic mouse model induces Alzheimer's like pathology11, and recently AICD has been detected in brain lysates by western blotting when using appropriate antigen retrieval techniques12. To facilitate structural, biochemical, and biophysical studies of the AICD, we have developed a procedure to produce recombinantly large amounts of highly pure AICD protein. We further describe a method for inducing the in vitro thermal aggregation of AICD and analysis by atomic force microscopy. The methods described are useful for biochemical, biophysical, and structural characterization of the AICD and the effects of molecular chaperones on AICD aggregation.

A method for large-scale purification of the APP intracellular domain (AICD) is described. We also describe methodology to induce in vitro AICD aggregation and visualization by atomic force microscopy. The methods described are useful for biochemical/structural characterization of the AICD and the effects of molecular chaperones on its aggregation.

शोधन और amyloid प्रोटीन अग्रदूत intracellular डोमेन के एकत्रीकरण

Amyloid precursor protein (APP) is a type I transmembrane protein associated with the pathogenesis of Alzheimer's disease (AD). APP is characterized by a ...

Processing of Human Reduction Mammoplasty and Mastectomy Tissues for Cell Culture

Experimental examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated by in vitro culture systems that more accurately model in vivo biology. The use of human derived material for studying cellular differentiation, aging, senescence, and immortalization is particularly advantageous given the many significant molecular differences in these properties between human and commonly utilized rodent cells1-2. Mammary cells present a convenient model system because large quantities of normal and abnormal tissues are available due to the frequency of reduction mammoplasty and mastectomy surgeries.
The mammary gland consists of a complex admixture of many distinct cell types, e.g., epithelial, adipose, mesenchymal, endothelial. The epithelial cells are responsible for the differentiated mammary function of lactation, and are also the origin of the vast majority of human breast cancers. We have developed methods to process mammary gland surgical discard tissues into pure epithelial components as well as mesenchymal cells3. The processed material can be stored frozen indefinitely, or initiated into primary culture. Surgical discard material is transported to the laboratory and manually dissected to enrich for epithelial containing tissue. Subsequent digestion of the dissected tissue using collagenase and hyaluronidase strips stromal material from the epithelia at the basement membrane. The resulting small pieces of the epithelial tree (organoids) can be separated from the digested stroma by sequential filtration on membranes of fixed pore size. Depending upon pore size, fractions can be obtained consisting of larger ductal/alveolar pieces, smaller alveolar clusters, or stromal cells. We have observed superior growth when cultures are initiated as organoids rather than as dissociated single cells. Placement of organoids in culture using low-stress inducing media supports long-term growth of normal HMEC with markers of multiple lineage types (myoepithelial, luminal, progenitor)4-5. Sufficient numbers of cells can be obtained from one individual's tissue to allow extensive experimental examination using standardized cell batches, as well as interrogation using high throughput modalities.
Cultured HMEC have been employed in a wide variety of studies examining the normal processes governing growth, differentiation, aging, and senescence, and how these normal processes are altered during immortal and malignant transformation4-15,16. The effects of growth in the presence of extracellular matrix material, other cell types, and/or 3D culture can be compared with growth on plastic5,15. Cultured HMEC, starting with normal cells, provide an experimentally tractable system to examine factors that may propel or prevent human aging and carcinogenesis.

A method to process human mammary surgical discard material is described. Processed tissue, in the form of organoids, can be stored frozen indefinitely or placed in culture for long-term growth. This method enables experimental examination of normal human epithelial cell biology, and the effects of exogenous perturbations.

मानव कमी mammoplasty और स्तन के ऊतकों के सेल संस्कृति के लिए प्रसंस्करण

Experimental  examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how  normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the functions of proteins involved in oncogenic progression or help to discover new tumor suppressors. In addition, injecting cancer cells into mice with different genotypes might provide a better understanding of the importance of the stromal compartment. Many models may be useful to investigate certain aspects of disease progression but do not recapitulate the entire cancerous process. In contrast, breast cancer cells engraftment to the mammary fat pad of mice better recapitulates the location of the disease and presence of the proper stromal compartment and therefore better mimics human cancerous disease. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into mice orthotopically and explain how to collect tissues to analyse the tumor milieu and metastasis to distant organs. Using this model, many aspects (growth, angiogenesis, and metastasis) of cancer can be investigated simply by providing a proper environment for tumor cells to grow.

Cancer is a complex disease that is influenced by the tissue surrounding the tumor as well as local pro- and anti-inflammatory mediators. Therefore, orthotropic injection models, rather than subcutaneous models may be useful to study cancer progression in a manner that better mimics human pathology.

चूहे के स्तन वसा पैड में स्तन कैंसर की कोशिकाओं की orthotopic इंजेक्शन ट्यूमर के विकास का अध्ययन करने के लिए।

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft tissue filler as it is readily available, easily obtained, inexpensive, and inherently biocompatible.1 However, despite its burgeoning popularity, fat grafting is hampered by unpredictable results and variable graft survival, with published retention rates ranging anywhere from 10-80%. 1-3
To facilitate investigations on fat grafting, we have therefore developed an animal model that allows for real-time analysis of injected fat volume retention. Briefly, a small cut is made in the scalp of a CD-1 nude mouse and 200-400 &#181;l&#160;of processed lipoaspirate is placed over the skull. The scalp is chosen as the recipient site because of its absence of native subcutaneous fat, and because of the excellent background contrast provided by the calvarium, which aids in the analysis process. Micro-computed tomography (micro-CT) is used to scan the graft at baseline and every two weeks thereafter. The CT images are reconstructed, and an imaging software is used to quantify graft volumes.
Traditionally, techniques to assess fat graft volume have necessitated euthanizing the study animal to provide just a single assessment of graft weight and volume by physical measurement ex vivo. Biochemical and histological comparisons have likewise required the study animal to be euthanized. This described imaging technique offers the advantage of visualizing and objectively quantifying volume at multiple time points after initial grafting without having to sacrifice the study animal. The technique is limited by the size of the graft able to be injected as larger grafts risk skin and fat necrosis. This method has utility for all studies evaluating fat graft viability and volume retention. It is particularly well-suited to providing a visual representation of fat grafts and following changes in volume over time.

Fat grafting is an essential technique for reconstructing soft tissue deficits. However, it remains an unpredictable procedure characterized by variable graft survival. Our goal was to devise a mouse model that utilizes a novel imaging method to compare volume retention between differing techniques of fat graft preparation and delivery.

माइक्रो-गणना टोमोग्राफी के साथ नग्न चूहों में मानव फैट इंजेक्शन की व्यवहार्यता का आकलन

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic transplantation of ovarian surface and tubal epithelia include intraperitoneal and intrabursal administration of cells. The respective limitations of these methods include poorly defined location of injected cells and limited space volume. Furthermore, they are poorly suited for long-term structural preservation of transplanted organs. To address these challenges, we have developed an alternative approach, which is based on the introduction of cells and tissue fragments into the mouse fat pad. The mouse ovarian fat pad is located in the immediate vicinity of the ovary and uterine tube (aka oviduct, fallopian tube), and provides a familiar microenvironment for cells and tissues of these organs. In our approach fluorescence-labeled mouse and human cells, and fragments of the uterine tube are engrafted by using minimally traumatic dorsal incision surgery. Transplanted cells and their outgrowths are easily located in the ovarian fat pad for over 40 days. Long-term transplantation of the entire uterine tube allows correct preservation of all principle tissue components, and does not result in adverse side effects, such as fibrosis and inflammation. Our approach should be uniquely applicable for answering important biological questions such as differentiation, regenerative and neoplastic potential of specific cell populations. Furthermore, it should be suitable for studies of microenvironmental factors in normal development and cancer.

We describe an ovarian fad pad transplantation assay suitable for studies of normal and transformed epithelia of the female reproductive tract. The mouse fat pad allows transplantation of large tissue fragments, is easily accessible for surgery and imaging, and provides the most favorable native environment for tissues of M&#252;llerian origin.

माउस डिम्बग्रंथि वसा पैड में प्रत्यारोपण

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

Confirmation of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury in Mice Using Surface Pad Electrocardiography

Many animal models have been established for the study of myocardial remodeling and heart failure due to its status as the number one cause of mortality worldwide. In humans, a pathologic occlusion forms in a coronary artery and reperfusion of that occluded artery is considered essential to maintain viability of the myocardium at risk. Although essential for myocardial recovery, reperfusion of the ischemic myocardium creates its own tissue injury. The physiologic response and healing of an ischemia/reperfusion injury is different from a chronic occlusion injury. Myocardial ischemia/reperfusion injury is gaining recognition as a clinically relevant model for myocardial infarction studies. For this reason, parallel animal models of ischemia/reperfusion are vital in advancing the knowledge base regarding myocardial injury. Typically, ischemia of the mouse heart after left anterior descending (LAD) coronary artery occlusion is confirmed by visible pallor of the myocardium below the occlusion (ligature). However, this offers only a subjective way of confirming correct or consistent ligature placement, as there are multiple major arteries that could cause pallor in different myocardial regions. A method of recording electrocardiographic changes to assess correct ligature placement and resultant ischemia as well as reperfusion, to supplement observed myocardial pallor, would help yield consistent infarct sizes in mouse models. In turn, this would help decrease the number of mice used. Additionally, electrocardiographic changes can continue to be recorded non-invasively in a time-dependent fashion after the surgery. This article will demonstrate a method of electrocardiographically confirming myocardial ischemia and reperfusion in real time.

During murine myocardial ischemia/reperfusion surgery, correct placement of the occluding ligature is typically confirmed by visible observation of myocardial pallor. Herein, a method of electrocardiographically confirming ischemia and reperfusion, to supplement observed myocardial pallor, is demonstrated in male C57Bl/6 mice.

भूतल पैड Electrocardiography का प्रयोग चूहों में myocardial ischemia और reperfusion की चोट की पुष्टि

Many animal models have been established for the study of myocardial remodeling and heart failure due to its status as the number one cause of mortality ...

Stromal Vascular Fraction-enriched Fat Grafting for the Treatment of Symptomatic End-neuromata

The purpose of this study was to methodically illustrate and highlight the crucial steps of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a novel treatment of symptomatic end-neuromata of peripheral sensory nerves, and in this study, specifically of the superficial branch of the radial nerve (SBRN). Despite a multitude of existing treatments, persistent postoperative pain and common pain relapse are still very common, independent of the procedure assessed. The neuroma is microsurgically excised accordingly to standardized protocol. Instead of the relocation of the regenerating nerve stump in neighboring anatomical structures, such as muscle or bone, a fat graft is applied perifocally and acts as a mechanical barrier. In order to reduce the fat resorption rate and boost the regenerative potential of the graft, the highly concentrated SVF is integrated in the grafting. The SVF is isolated from subcutaneous fat by enzymatic and mechanic separation of the lipoaspirate by a specific commercial isolation system. The SVF-enriched fat graft provides both a mechanical barrier and various biological effects at the cellular level, including improving angiogenesis, inflammation, and fibrosis. Both mechanical and biologic effects help to reduce the disorganized axonal outgrowth of the nerve stump during nerve regeneration and hence prevent the recurrence of painful end-neuromata.

The purpose of the study is to illustrate the technical procedure of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a novel treatment of symptomatic end-neuromata. This technique provides advantages of both the mechanical barrier and the biological action at the cellular level by the processed and concentrated SVF.

रोगसूचक अंत-neuromata के उपचार के लिए Stromal संवहनी अंश-समृद्ध वसा भ्रष्टाचार

The purpose of this study was to methodically illustrate and highlight the crucial steps of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a ...

Methodology for Sputum Induction and Laboratory Processing

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which is interesting in various respiratory diseases like asthma, chronic obstructive pulmonary disease (COPD), chronic cough, or idiopathic pulmonary fibrosis. This technique is well tolerated, safe and non-invasive, but is currently limited to research services and specialized centers in clinical practice because it is technically demanding, time-consuming, and requires trained staff. The success rate of sputum induction and analysis is about 80%.
Here, we describe the induction and laboratory processing of sputum samples. Sputum is induced by inhalation of hypertonic or isotonic saline with salbutamol. For the processing, we use the whole sputum technique. Dithiothreitol (DTT) is used to allow mucolysis of sputum samples. The primary aim of sputum processing is to obtain a differential cell count to study the cell types present in the airway lumen. Additional analyses may also be performed on sputum supernatant and sputum cells, which may allow further investigation into inflammatory processes and immune mechanisms. Examples include studying mediators in sputum supernatant and performing a large spectrum of analysis on sputum cells such as flow cytometry, genomics, or proteomics.
Finally, representative results of sputum analysis in healthy controls, asthmatics, and COPD patients are presented.

Here we describe the technique of sputum induction. This protocol also explains the sputum processing to perform a differential cell count and to collect sputum supernatant and cells for further analysis.

थूक प्रेरण और प्रयोगशाला प्रसंस्करण के लिए क्रियाविधि

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which ...

Sampling Strategies and Processing of Biobank Tissue Samples from Porcine Biomedical Models

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of genetically modified pig models, and the often-limited number of available animals of these models, establishment of (biobank) collections of adequately processed tissue samples suited for a broad spectrum of subsequent analyses methods, including analyses not specified at the time point of sampling, represent meaningful approaches to take full advantage of the translational value of the model. With respect to the peculiarities of porcine anatomy, comprehensive guidelines have recently been established for standardized generation of representative, high-quality samples from different porcine organs and tissues. These guidelines are essential prerequisites for the reproducibility of results and their comparability between different studies and investigators. The recording of basic data, such as organ weights and volumes, the determination of the sampling locations and of the numbers of tissue samples to be generated, as well as their orientation, size, processing and trimming directions, are relevant factors determining the generalizability and usability of the specimen for molecular, qualitative, and quantitative morphological analyses. Here, an illustrative, practical, step-by-step demonstration of the most important techniques for generation of representative, multi-purpose biobank specimen from porcine tissues is presented. The methods described here include determination of organ/tissue volumes and densities, the application of a volume-weighted systematic random sampling procedure for parenchymal organs by point-counting, determination of the extent of tissue shrinkage related to histological embedding of samples, and generation of randomly oriented samples for quantitative stereological analyses, such as isotropic uniform random (IUR) sections generated by the &#34;Orientator&#34; and &#34;Isector&#34; methods, and vertical uniform random (VUR) sections.

The practical application and performance of methods for generation of representative tissue samples of porcine animal models for a broad spectrum of downstream analyses in biobank projects are demonstrated, including volumetry, systematic random sampling, and differential processing of tissue samples for qualitative and quantitative morphologic and molecular analyses types.

नमूना रणनीतियों और सुअर का बायोमेडिकल मॉडल से जैव बैंक ऊतक नमूनों की प्रोसेसिंग

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of ...

A Training and Testing System for Performing Vascular Reconstruction In Vitro

Manual vascular reconstruction training is essential for a beginner surgeon. However, an optimal training system for vascular reconstruction in vitro has yet to be developed. In this study, we introduce an in vitro training and testing system using a magnetic anchoring technique with which a trainee can practice manual vascular reconstruction individually. Additionally, this system can also be used to test the quality of the reconstruction. The described system includes a vascular reconstruction training machine, magnetic tractors, and a magnetic suture puller. In this manuscript, we detail an end-to-end vein anastomosis using porcine right and left iliac veins. To identify the potential damage caused by a magnetic suture puller on the suture, we created three groups with six segments of 4-0 polypropylene sutures each: a control group with no intervention on the polypropylene suture, a group in which the polypropylene suture is manually pulled with sterile gloves 20x, and a magnetic puller group in which the magnetic puller pulled the polypropylene suture 20x. These groups were tested by light microscopy and breaking strength tests, and the effect of reconstruction was assessed. In the light microscopy test, the control group was less likely to be damaged (p &#60; 0.05) and the number of damaged points of the manual group and magnetic puller group were similar (p &#62; 0.05). The results of the breaking strength test were compared across groups and no significant difference was observed (p &#62; 0.05). The end-to-end anastomosis of the porcine iliac veins was successfully performed using this training system, and the reconstructed veins could undergo 2.0 kPa perfusion pressure. Using this training and testing system the trainee can practice manual vascular reconstruction in vitro individually with the aid of magnetic tractors and a magnetic suture puller, and the quality of the reconstruction can be tested.

Here we present a training and testing system where a trainee can complete manual vascular reconstruction in vitro individually using a magnetic anchoring technique. The system can also be used to test the quality of reconstruction.

विट्रो में संवहनी पुनर्निर्माण के प्रदर्शन के लिए एक प्रशिक्षण और परीक्षण प्रणाली

Manual vascular reconstruction training is essential for a beginner surgeon. However, an optimal training system for vascular reconstruction in vitro has ...