Name: performing and processing fna of anterior fat pad for amyloid
Uploaded: 2010-10-30T17:00:00
Duration: 9 min 41 s
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우리는 FNAB 절차 데모를 그래프 비디오 중에 도움을 양 보니 Phetteplace, RN 감사합니다.

소개 전신 아밀로이드증는 총칭 아밀로이드로 불리는 각종 단백질의 세포외 증착을 말합니다 높은 변수 질병입니다. 베타 내기 구성이 아밀로이드 원섬유의 증착은 관련 기관에 따라 다양한 임상 프레 젠 테이션에 연결됩니다. 같은 심장, 간, 및 / 또는 신장 등 중요 장기의 참여가있을 때 체계 아밀로이드증의 가장 임상적으로 관련성이 높은 발현이 설명되어 있습니다. 역사적으로, 이러한 참여 기관은 아밀로이드의 존재를 설명하기 biopsied 것입니다. 이 적당히 침입 절차는 출혈을 포함하여 상당한 위험을 실시. 지방 패드의 열망 그 이후 전신 아밀로이드증 1 아밀로이드의 검출에 대한 신뢰성 및 비침 투 방법을 제공하기 위해 표시되었습니다. 이 절차는 작은 혈관 벽 2 부족한 아밀로이드 예금을 평가하기위한 fibroadipose 조직을 검색할 국소 마취하에 앞쪽에 복벽에 피하 지방의 지방 흡입에 근본적으로 비교할 수 있습니다. 조직에서 아밀로이드 식별에 가장 자주 활용 방법은 콩고 레드 스테인드 섹션 편광 현미경 세 이하 시각 때 본 특성 사과 녹색 복굴절 패턴 남아 있습니다. 지방 패드의 열망이 수행되는 경우, 콩고 레드 얼룩이 직접 발랐습 슬라이드 또는 aspirated 지방 조직의 세포 블록 준비 중에서 할 수 있습니다. 그러나, 아밀로이드증의 초기 단계에서 환자는 크게 4,5 콩고 레드 스테인드 셀 블록 섹션의 감도를 감소 부족한 아밀로이드 예금을 보유하고 있습니다. 전자 현미경에 의해 지방 패드 aspirates의 Ultrastructural 평가 나은 재현성 향상 감도 4했습니다. 따라서, 그것은 셀 블록 모두 준비 및 전자 현미경 2 수행하기위한 모든 지방 패드 aspirates를 제출하는 것이 좋습니다. 지방 패드의 열망이 상대적으로 낮은 비용과 체계적 아밀로이드증를 진단하기 위해 조직을 얻기위한 비침 투 방법입니다. 이 문서는 전자 현미경에 의해 콩고 붉은 얼룩과 ultrastructural 평가 모두에 대한 표본을 제출하는 샘플 처리에 대한 자세한 내용과 함께 지방 패드 열망 절차를 설명합니다. 이 비디오에서는, 우리는 최적의 진단 자료를 검색하려면이 재현성 및 간단한 절차를 보여줍니다. 1. 앞쪽에 지방 패드의 FNA 공연 지역의 A.의 Anesthetization (그림 1 &amp; 2) <ol><li> 알코올 면봉이나 특정 기관에서 선호하는 피부 클렌징 에이전트를 사용하여 정중선에 측면 복부 하단 사분면 지역과 배꼽 (그림 1) 아래의 피부를 청소하십시오. </li><li> 로 표시 펜으로 그림 1에 표시된 2 X 2인치에 대한 편능형 모양의 영역을 표시합니다. </li><li> 1 % 대기음 약 10 ML은 18G 바늘로 lidocaine. 25G 1 ½ 첨부 주사기에 바늘 인치합니다. 액체가 적절하고 기포가 존재하지 않습니다 때까지 플런저를 누르면서 똑바로 주사기를 감청하여 갇혀 공기를 제거합니다. </li><li> 그림 2에 표시된 이미 표시된 편능형 지역의 국경을 따라 마취. 단지 지점에서 피부 아래의 25G 바늘을 삽입하여 시작하고 신중하게 X. 당​​신이 선박 내에되지 않도록하기 위해 주사기의 플런저에 다시 세워 지점 subcutaneously 바늘을 밀어. 그런 다음 천천히 바늘이 바늘이 지점 (그림 2a3)에서 피부의 나와 아무말도없이 A를 가리 키도록 철수하면서 lidocaine 2.5 ML (10 ML의 주사기에서 lidocaine의 ¼ 정도)까지 침투하는 플런저를 밀어. 바늘로 여전히 피부 밑에 지점 Y (그림 2a4)쪽으로 방향을 변경하고 지점 Y (그림 2b1)에 subcutaneously 바늘을 밀어. 이전처럼 천천히 포인트를 통해 바늘을 철수하면서 바늘이 선박에 아니라는 것을 확인하고 lidocaine의 약 2.5 ML 하는걸 (2b4 통해 그림 2b3). Y에 X와 B (2d4을 통해 그림 2c1)를 가리키는 B 지점에서 B와 분배 lidocaine 피하부터 유사한 단계를 반복합니다. 모여서에서 출혈을 방지하고 살균 게이지의 한 조각이 회사 응용 프로그램에 의해 B. </li><li> 이제 지역이 인접 unanesthetized 가볍게 피부와 비교하여, 팁 / 면화 거즈 조각의 모서리로 anesthetized 편능형 이내에 피부를 만져 anesthetized 있는지 확인합니다. </li></ol> B. 지방 흡인 패드 (그림 3) 공연 (이전 지방 패드 열망의 성능에 국소 마취의 응용 프로그램은 지역 및 개인 환경 설정에 따라 우회 수 있습니다. 앞쪽에 지방 패드 열망에 대해 올바르게 수행 FNAB 절차가 한 미친놈에 완료할 수 있습니다.하지만, 개별 환자의 고통 임계값에 따라 , 피하 지방 조직에 앞뒤로 18G 바늘의 작전을하는 것은 상대적으로 distres입니다노래. anesthetization 방법은 여기 25G 바늘로 두 거시기의 효과를 달성하고 절차를 개선 인내와 고통을 averts 설명.) <ol><li> 10 ML의 주사기에 18G 1 ½ 인치 바늘을 조립. 적절한 응용 프로그램 및 진공의 릴리스에 대한 주사기 그립 ( &quot;FNAB 그립 / 총&quot;)에 주사 바늘 - 어셈블리를 마운트합니다. </li><li> 정화 및 anesthetized 편능형 영역 (그림 3A) 이내에 피하 지방에 주사 바늘의 끝부분을 삽입합니다. </li><li> 완전 진공 (그림 3B)를 생성하는 피하 조직에 삽입된 바늘과 주사기의 플런저를 철회. </li><li> 진공을 유지하고 피하 지방 (3i를 통해 그림 3C)에 다양한 방향으로 앞뒤로 바늘을 기동. 각 스트로크는 바늘이 피부 밖으로 나와 아무말도없이 선택된 바늘의 길이와 최대한 오래해야합니다. 최대 샘플링하는 것은 각 뇌졸중 (그림 3i)와 방향을 변경하여 이루어진다. serosa에 접선과 복막 캐비티의 펑쳐링 피하기 위해 피부 표면에 평행하게 바늘의 방향을 유지하는 것이 중요합니다. </li><li> fibroadipose 조직은 주사기에 축적되어. 일단 충분한 fibroadipose 조직 파편이 (조각 풍부한 혈액 혼합 시료 최대 1 ML) 검색되며, 완전히 진공을 해제하고 바늘을 (그림 3K)를 제거하십시오. </li><li> 환자를 받거나 조수는 혈액의 넘쳐 흐름을 방지하기 위해 거즈의 패드와 프로 시저의 지역에서 확고한 압력을 적용합니다. </li></ol> 2. 스피스먼 처리 <ol><li> 전자 현미경 (그림 4B)에 대한 글루 타 알데히드 용액에 fibroadipose 조직 최소한 5-6 조각을 놓으십시오. </li><li> 기관 프로토콜에 따라 fibroadipose 조직 조각 몇 얼룩은 두 개의 슬라이드 (그림 4A) 사이를 확산하여 준비 수 있습니다. </li><li> 나머지 자료는 주사기 응고 (이것은 응고 시간에 따라 5-7 분 정도 걸릴 수 있습니다) (그림 4C)에 허용됩니다. </li><li> 응고된 fibroadipose 조직 재료는 주사기와 부유 (그림 4C2)의 벽에서 dislodged되도록 주사기에 포르말린 10 % 대기음. 주사기 (그림 4C3)에서 플런저를 제거하고 노즐 끝 (그림 4C4) 반대 주사기의 열린 월말부터 10 % 포르말린 용기에 응고된 fibroadipose 조직을 전송할 수 있습니다. </li><li> 적절하게 컨테이너를 라벨 및 전자 현미경을위한 글루 타 알데히드와 H &amp; E 섹션 콩고 레드 현미경을 편광에 따라 평가를 위해 얼룩을 위해 포르말린을 제출해주십시오. 얼룩이 준비가되어있다면, 그들은 개별 연구소의 프로토콜에 따라 처리될 수 있습니다. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1. 앞쪽에 지방 패드의 FNAB 위해 anesthetized 수 영역입니다. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2. 지역의 Anesthetization. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig3.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3. 앞쪽에 지방 패드의 FNAB 공연. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig4.jpg" alt="그림 4" /> 그림 4. 앞쪽에 지방 패드 처리하면 아밀로이드 예금을 검출 실험에 제출하는 대기음. 3. 대표 결과 <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig5.jpg" alt="그림 5" /> 그림 5. fibroadipose 조직 조각의 작은 혈관의 벽에 아밀로이드. Fibroadipose 조직은 포르말린 - 처리, 파라핀 콩고 레드 물들일, 임베디드, 가벼운 현미경을 편광으로 조사되었다. 작은 혈관의 벽에 아밀로이드는 애플 그린 복굴절 (흰색 화살표)를 보여줍니다. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig6.jpg" alt="그림 6" /> 그림 6. 조직 아밀로이드증이 부족해. 애플 그린의 복굴절은 결석 다른 환자의 조직에서 아밀로이드증없이. 콜라겐 섬유의 블루 복굴절은 (흰색 화살표), 거의 모든 표본에 일반적으로 존재한다. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig7.jpg" alt="그림 7" /> 그림 7. 혈관 벽에 아밀로이드와 일치 원섬유. 직선이 아닌 분기의 전자 현미경, 혈관 벽에 아밀로이드의 형성 8-10 나노미터 직경 원섬유을 무작위로 - 흩어져.

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아밀로이드증의 진단은 보통 같은 신장, 간, 및 / 또는 마음으로 영향을받는 장기의 조직 생검과 함께 이루어진다. 이러한 접근 방식은 높은 진단 수확량 그러나, 침략이다 있으며, 출혈이 포함하는 합병증에 연결되어있을 수 있습니다. 직장, gingival 및 골수 biopsies는 1960 6,7,8 상대적으로 덜 침략적 접근과 같은 진단을 선호했다. 복부 지방 패드의 열망은 체계 아밀로이드증 1의 조직 진단을위한 안전 법으로서, 단순하고 저렴 절차로 1973 년에보고되었다. 그러나, 검색된 시료의 처리 절차와 방법의 자세한 사항은 coherently보고되지 않습니다. 이 동영상과 기사는 단계로 절차 단계를 설명합니다. 지방 패드의 열망에서 아밀로이드를 검출 방법은, 마찬가지로, 또한 몇 가지 연구는 비교하고 1,5,6,7,8 다양한 접근 방식을 평가 잘 표준화되지 않습니다. 콩고 레드 얼룩과 앞쪽에 지방 패드 aspirates 평가 특히 부족한 아밀로이드 예금 5 아밀로이드증의 조기 경우에 낮은 interobserver의 재현성과 덜 민감합니다. Immunohistochemistry은 포르말린 고정 파라핀 - 임베디드 셀 블록 섹션에서 수행하고 세포학 얼룩에서 수행 콩고 빨간색 형광은 진단 민감도 9,10을 향상시키기 위해보고되었습니다. 전자 현미경은 지방 패드 aspirates 4, 5에서 fibroadipose 조직의 작은 혈관 벽에 부족한 아밀로이드 원섬유의 탐지 및 식별을 향상시킵니다. 이 정보를 기반으로,이 문서에서는 셀 블록 (진단 애플 그린의 복굴절을위한 편광 현미경 콩고 레드 스테인드 셀 블록 섹션의 평가 또한 표시된 immunohistochemistry 등) 및 전자 현미경을 위해 준비하는 시편 처리 설명합니다. 그러나 아밀로이드에 대한 표본 평가하기 위해 선택한 방법에 따라, 그것은 세포학의 비방 준비, 셀 블록 준비하고, 전자 현미경에 대한 처리를 받게 될 수도 있습니다. 일부 실험실은 aspirated fibroadipose 조직 조각에서 준비하고 형광 10 연구 콩고 레드 물들일 뭉개진에서 테스트를 수행합니다. 일반적으로 늦은 아밀로이드증에서 콩고 레드 편광 현미경으로 빛이 현미경 충분한 수 있지만, 셀 블록 섹션에 현미경을 편광과 질병 콩고 빨간 얼룩의 초기 단계에 지방 패드 aspirates 4,5,11에 대해 덜 민감하고 안정적인 것입니다 . Thioflavin T를 포함한 기타 특수 얼룩이 유사한 제한 사항과 함께 사용할 수 있습니다. 아밀로이드를 감지하는 다른 방법은 콩고 레드 편광 현미경과 형광 10과 아밀로이드에 대한 대기음 뭉개진의 평가를 포함합니다. 우리의 경험에서이 방법은 덜 재현할 수 있습니다. 전자 현미경에 의해 아밀로이드에 대한 지방 패드에있는 혈관의 평가는 이러한 한계를 극복에게 4,11. 아밀로이드의 자세한 특성은 immunoelectron 현미경 12보고되었습니다 있지만, 이러한 방법이 아닌 차 치료 환경에서 널리 사용할 수 없습니다. 열망의 절차를 수행하기위한 사용되는 바늘들은 게이지 벌금에 크기 (21 - 25G), 중급 (18 - 20G), 대형 (예 : - 14G) 11에 따라 분류있을 수 있습니다. 앞쪽에 지방 패드의 열망은 중급 (18 20G)에서 고급 (21 22G) 2,10에 이르기까지 변수 게이지를 사용하여 수행할 수로보고되었습니다. 대량 병변의 대부분은 세포 블록에 대한 추가 예제를 검색하는 광범위한 게이지 바늘 (예 : 18G 등)과 함께 추가적인 전달과 함께 좋은 세포학 얼룩을 얻기 위해 미세한 게이지 바늘 (예 : 25G 등) aspirated 있습니다. 앞쪽에 지방 패드 열망 동안 응집 fibroadipose 조직은 미세한 바늘 잘 대기음하지 않습니다. 셀 블록 준비와 전자 현미경은 지방 aspirates에 fibroadipose 조직 조각의 작은 혈관 벽의 평가를 위해 중요합니다. 넓은 게이지 바늘은 (예 : 18G 등) 진단 충분한 자료 2,10를 얻을 것을 권장하고 있습니다. 절차는 기존 FNAB 비교이므로, 지방 패드 열망은 넓은 게이지 바늘이 그것을 수행하기위한 5 사용될 수있다하더라도 FNAB이라고합니다.

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Safwan S. Jaradeh
instead of:
Safwan S. Jardeh

Erratum: Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid

알코올 면봉, 거즈 패드, 마킹 펜, 10 ML 주사기 X2, 1 % lidocaine (국소 마취제 - 만약 lidocaine이 단독으로 사용, 그것은 떨어뜨림 후에 초기 굽기 감각을 발생합니다. 이것은 1 % 1:1 혼합물을 사용하여 막을 수있다 lidocaine, 1 % 나트륨 - 이중 탄산), 18 게이지 (G) 1 ½ 인치 바늘 X2 (FNAB를 수행하기위한), 25G 1 ½ 인치 바늘 (국소 마취제를 주사 용), FNA의 주사기 홀더 ( &quot;총&quot;), 붕대, 글루 타 알데히드의 유리병 (전자 현미경) 및 포르말린 10 % 생검 컨테이너.

performing and processing fna of anterior fat pad for amyloid

역사적으로, 심장, 간, 그리고 신장 biopsies는 아밀로이드증에서 아밀로이드 예금을 증명하기 위해 수행되었다. 이 질병의 임상 프레 젠 테이션 이렇게 변수가 아닌 구체적인 것이므로, 이러한 biopsies의 관련 위험 진단 생산량에 비해 너무 큰 있습니다. 이러한 피부 gingival 같은 낮은 생검 위험을 가지고 다른 사이트도 비교적 침략과 비용입니다. 또한, 이러한 biopsies 항상 진단을 수립하기 위해 충분한 아밀로이드 침전물이 없을 수 있습니다. 지방 패드의 열망은 낮은 비용과 최소한의 병적 상태와 좋은 상관 관계 임상을 보여주었다. 그러나,이 절차를 수행하거나 변수와 nonreproducible 결과에 이르게 aspirated 표본을 처리위한 표준 프로토콜이 없습니다. 조직에서 아밀로이드를 검출 가장 자주 이용 양상은 편광 현미경을 사용하여 콩고 레드 스테인드 섹션에 사과 녹색 복굴절입니다. 이 기술은 aspirated 재료의 셀 블록 준비가 필요합니다. 불행히도, 아밀로이드증의 초기 단계에서 제시 환자는 크게 지방 패드 aspirates 콩고 레드 스테인드 셀 블록 섹션의 감도를 감소 아밀로이드의 최소한의 금액을했습니다. 따라서, 전자 현미경에 의해 지방 패드 aspirates의 ultrastructural 평가 아밀로이드 감지에 대한 향상된 감도 제공, 활용하여야한다. 이 문서는 콩고 레드 셀 블록 섹션의 얼룩과 ultrastructural 식별을위한 전자 현미경을 모두 이용 아밀로이드의 검출을위한 앞쪽에 지방 패드 열망을 수행하기위한 간단하고 재현성 절차를 보여줍니다.

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Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid

지방 패드의 열망은 조직의 아밀로이드증 진단 아밀로이드를 감지하는 다른 방법에 비해 선호, 법으로서, 낮은 비용 접근 방식입니다. 이 동영상이 문서에서는 최적의 진단 결과에 대한 표본의 적절한 처리와 함께 지방 패드 열망을 수행하기위한 절차 개요를 보여줍니다.

아밀로이드에 대한 앞쪽에 지방 패드의 FNA 공연 및 처리

Historically, heart, liver, and kidney biopsies were performed to demonstrate amyloid deposits in amyloidosis.  Since the clinical presentation of this ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

Purification and Aggregation of the Amyloid Precursor Protein Intracellular Domain

Amyloid precursor protein (APP) is a type I transmembrane protein associated with the pathogenesis of Alzheimer's disease (AD). APP is characterized by a large extracellular domain and a short cytosolic domain termed the APP intracellular domain (AICD). During maturation through the secretory pathway, APP can be cleaved by proteases termed &alpha;, &beta;, and &gamma;-secretases1. Sequential proteolytic cleavage of APP with &beta; and &gamma;-secretases leads to the production of a small proteolytic peptide, termed A&beta;, which is amyloidogenic and the core constituent of senile plaques. The AICD is also liberated from the membrane after secretase processing, and through interactions with Fe65 and Tip60, can translocate to the nucleus to participate in transcription regulation of multiple target genes2,3. Protein-protein interactions involving the AICD may affect trafficking, processing, and cellular functions of holo-APP and its C-terminal fragments. We have recently shown that AICD can aggregate in vitro, and this process is inhibited by the AD-implicated molecular chaperone ubiquilin-14. Consistent with these findings, the AICD has exposed hydrophobic domains and is intrinsically disordered in vitro5,6, however it obtains stable secondary structure when bound to Fe657. We have proposed that ubiquilin-1 prevents inappropriate inter- and intramolecular interactions of AICD, preventing aggregation in vitro and in intact cells4. While most studies focus on the role of APP in the pathogenesis of AD, the role of AICD in this process is not clear. Expression of AICD has been shown to induce apoptosis8, to modulate signaling pathways9, and to regulate calcium signaling10. Over-expression of AICD and Fe65 in a transgenic mouse model induces Alzheimer's like pathology11, and recently AICD has been detected in brain lysates by western blotting when using appropriate antigen retrieval techniques12. To facilitate structural, biochemical, and biophysical studies of the AICD, we have developed a procedure to produce recombinantly large amounts of highly pure AICD protein. We further describe a method for inducing the in vitro thermal aggregation of AICD and analysis by atomic force microscopy. The methods described are useful for biochemical, biophysical, and structural characterization of the AICD and the effects of molecular chaperones on AICD aggregation.

A method for large-scale purification of the APP intracellular domain (AICD) is described. We also describe methodology to induce in vitro AICD aggregation and visualization by atomic force microscopy. The methods described are useful for biochemical/structural characterization of the AICD and the effects of molecular chaperones on its aggregation.

아밀로이드 전구체 단백질 세포 내 도메인의 정화 및 집계

Amyloid precursor protein (APP) is a type I transmembrane protein associated with the pathogenesis of Alzheimer's disease (AD). APP is characterized by a ...

연구

의학

Processing of Human Reduction Mammoplasty and Mastectomy Tissues for Cell Culture

Experimental examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated by in vitro culture systems that more accurately model in vivo biology. The use of human derived material for studying cellular differentiation, aging, senescence, and immortalization is particularly advantageous given the many significant molecular differences in these properties between human and commonly utilized rodent cells1-2. Mammary cells present a convenient model system because large quantities of normal and abnormal tissues are available due to the frequency of reduction mammoplasty and mastectomy surgeries.
The mammary gland consists of a complex admixture of many distinct cell types, e.g., epithelial, adipose, mesenchymal, endothelial. The epithelial cells are responsible for the differentiated mammary function of lactation, and are also the origin of the vast majority of human breast cancers. We have developed methods to process mammary gland surgical discard tissues into pure epithelial components as well as mesenchymal cells3. The processed material can be stored frozen indefinitely, or initiated into primary culture. Surgical discard material is transported to the laboratory and manually dissected to enrich for epithelial containing tissue. Subsequent digestion of the dissected tissue using collagenase and hyaluronidase strips stromal material from the epithelia at the basement membrane. The resulting small pieces of the epithelial tree (organoids) can be separated from the digested stroma by sequential filtration on membranes of fixed pore size. Depending upon pore size, fractions can be obtained consisting of larger ductal/alveolar pieces, smaller alveolar clusters, or stromal cells. We have observed superior growth when cultures are initiated as organoids rather than as dissociated single cells. Placement of organoids in culture using low-stress inducing media supports long-term growth of normal HMEC with markers of multiple lineage types (myoepithelial, luminal, progenitor)4-5. Sufficient numbers of cells can be obtained from one individual's tissue to allow extensive experimental examination using standardized cell batches, as well as interrogation using high throughput modalities.
Cultured HMEC have been employed in a wide variety of studies examining the normal processes governing growth, differentiation, aging, and senescence, and how these normal processes are altered during immortal and malignant transformation4-15,16. The effects of growth in the presence of extracellular matrix material, other cell types, and/or 3D culture can be compared with growth on plastic5,15. Cultured HMEC, starting with normal cells, provide an experimentally tractable system to examine factors that may propel or prevent human aging and carcinogenesis.

A method to process human mammary surgical discard material is described. Processed tissue, in the form of organoids, can be stored frozen indefinitely or placed in culture for long-term growth. This method enables experimental examination of normal human epithelial cell biology, and the effects of exogenous perturbations.

세포 배양을위한 인간 감소 Mammoplasty과 유방 절제술의 조직의 처리

Experimental  examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how  normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the functions of proteins involved in oncogenic progression or help to discover new tumor suppressors. In addition, injecting cancer cells into mice with different genotypes might provide a better understanding of the importance of the stromal compartment. Many models may be useful to investigate certain aspects of disease progression but do not recapitulate the entire cancerous process. In contrast, breast cancer cells engraftment to the mammary fat pad of mice better recapitulates the location of the disease and presence of the proper stromal compartment and therefore better mimics human cancerous disease. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into mice orthotopically and explain how to collect tissues to analyse the tumor milieu and metastasis to distant organs. Using this model, many aspects (growth, angiogenesis, and metastasis) of cancer can be investigated simply by providing a proper environment for tumor cells to grow.

Cancer is a complex disease that is influenced by the tissue surrounding the tumor as well as local pro- and anti-inflammatory mediators. Therefore, orthotropic injection models, rather than subcutaneous models may be useful to study cancer progression in a manner that better mimics human pathology.

마우스의 유방 지방 패드에 유방암 세포의 소성 주입은 종양의 성장을 연구한다.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft tissue filler as it is readily available, easily obtained, inexpensive, and inherently biocompatible.1 However, despite its burgeoning popularity, fat grafting is hampered by unpredictable results and variable graft survival, with published retention rates ranging anywhere from 10-80%. 1-3
To facilitate investigations on fat grafting, we have therefore developed an animal model that allows for real-time analysis of injected fat volume retention. Briefly, a small cut is made in the scalp of a CD-1 nude mouse and 200-400 &#181;l&#160;of processed lipoaspirate is placed over the skull. The scalp is chosen as the recipient site because of its absence of native subcutaneous fat, and because of the excellent background contrast provided by the calvarium, which aids in the analysis process. Micro-computed tomography (micro-CT) is used to scan the graft at baseline and every two weeks thereafter. The CT images are reconstructed, and an imaging software is used to quantify graft volumes.
Traditionally, techniques to assess fat graft volume have necessitated euthanizing the study animal to provide just a single assessment of graft weight and volume by physical measurement ex vivo. Biochemical and histological comparisons have likewise required the study animal to be euthanized. This described imaging technique offers the advantage of visualizing and objectively quantifying volume at multiple time points after initial grafting without having to sacrifice the study animal. The technique is limited by the size of the graft able to be injected as larger grafts risk skin and fat necrosis. This method has utility for all studies evaluating fat graft viability and volume retention. It is particularly well-suited to providing a visual representation of fat grafts and following changes in volume over time.

Fat grafting is an essential technique for reconstructing soft tissue deficits. However, it remains an unpredictable procedure characterized by variable graft survival. Our goal was to devise a mouse model that utilizes a novel imaging method to compare volume retention between differing techniques of fat graft preparation and delivery.

마이크로 컴퓨터 단층 촬영과 누드 마우스에 인간의 지방 주입의 생존 능력의 평가

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic transplantation of ovarian surface and tubal epithelia include intraperitoneal and intrabursal administration of cells. The respective limitations of these methods include poorly defined location of injected cells and limited space volume. Furthermore, they are poorly suited for long-term structural preservation of transplanted organs. To address these challenges, we have developed an alternative approach, which is based on the introduction of cells and tissue fragments into the mouse fat pad. The mouse ovarian fat pad is located in the immediate vicinity of the ovary and uterine tube (aka oviduct, fallopian tube), and provides a familiar microenvironment for cells and tissues of these organs. In our approach fluorescence-labeled mouse and human cells, and fragments of the uterine tube are engrafted by using minimally traumatic dorsal incision surgery. Transplanted cells and their outgrowths are easily located in the ovarian fat pad for over 40 days. Long-term transplantation of the entire uterine tube allows correct preservation of all principle tissue components, and does not result in adverse side effects, such as fibrosis and inflammation. Our approach should be uniquely applicable for answering important biological questions such as differentiation, regenerative and neoplastic potential of specific cell populations. Furthermore, it should be suitable for studies of microenvironmental factors in normal development and cancer.

We describe an ovarian fad pad transplantation assay suitable for studies of normal and transformed epithelia of the female reproductive tract. The mouse fat pad allows transplantation of large tissue fragments, is easily accessible for surgery and imaging, and provides the most favorable native environment for tissues of M&#252;llerian origin.

마우스 난소 지방 패드 속으로 이식

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

Confirmation of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury in Mice Using Surface Pad Electrocardiography

Many animal models have been established for the study of myocardial remodeling and heart failure due to its status as the number one cause of mortality worldwide. In humans, a pathologic occlusion forms in a coronary artery and reperfusion of that occluded artery is considered essential to maintain viability of the myocardium at risk. Although essential for myocardial recovery, reperfusion of the ischemic myocardium creates its own tissue injury. The physiologic response and healing of an ischemia/reperfusion injury is different from a chronic occlusion injury. Myocardial ischemia/reperfusion injury is gaining recognition as a clinically relevant model for myocardial infarction studies. For this reason, parallel animal models of ischemia/reperfusion are vital in advancing the knowledge base regarding myocardial injury. Typically, ischemia of the mouse heart after left anterior descending (LAD) coronary artery occlusion is confirmed by visible pallor of the myocardium below the occlusion (ligature). However, this offers only a subjective way of confirming correct or consistent ligature placement, as there are multiple major arteries that could cause pallor in different myocardial regions. A method of recording electrocardiographic changes to assess correct ligature placement and resultant ischemia as well as reperfusion, to supplement observed myocardial pallor, would help yield consistent infarct sizes in mouse models. In turn, this would help decrease the number of mice used. Additionally, electrocardiographic changes can continue to be recorded non-invasively in a time-dependent fashion after the surgery. This article will demonstrate a method of electrocardiographically confirming myocardial ischemia and reperfusion in real time.

During murine myocardial ischemia/reperfusion surgery, correct placement of the occluding ligature is typically confirmed by visible observation of myocardial pallor. Herein, a method of electrocardiographically confirming ischemia and reperfusion, to supplement observed myocardial pallor, is demonstrated in male C57Bl/6 mice.

표면 패드 심전도를 사용하여 마우스의 심근 허혈 및 재관류 손상의 확인

Many animal models have been established for the study of myocardial remodeling and heart failure due to its status as the number one cause of mortality ...

Stromal Vascular Fraction-enriched Fat Grafting for the Treatment of Symptomatic End-neuromata

The purpose of this study was to methodically illustrate and highlight the crucial steps of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a novel treatment of symptomatic end-neuromata of peripheral sensory nerves, and in this study, specifically of the superficial branch of the radial nerve (SBRN). Despite a multitude of existing treatments, persistent postoperative pain and common pain relapse are still very common, independent of the procedure assessed. The neuroma is microsurgically excised accordingly to standardized protocol. Instead of the relocation of the regenerating nerve stump in neighboring anatomical structures, such as muscle or bone, a fat graft is applied perifocally and acts as a mechanical barrier. In order to reduce the fat resorption rate and boost the regenerative potential of the graft, the highly concentrated SVF is integrated in the grafting. The SVF is isolated from subcutaneous fat by enzymatic and mechanic separation of the lipoaspirate by a specific commercial isolation system. The SVF-enriched fat graft provides both a mechanical barrier and various biological effects at the cellular level, including improving angiogenesis, inflammation, and fibrosis. Both mechanical and biologic effects help to reduce the disorganized axonal outgrowth of the nerve stump during nerve regeneration and hence prevent the recurrence of painful end-neuromata.

The purpose of the study is to illustrate the technical procedure of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a novel treatment of symptomatic end-neuromata. This technique provides advantages of both the mechanical barrier and the biological action at the cellular level by the processed and concentrated SVF.

Stromal 혈관 분수 농축 지방 이식 증상 끝-neuromata의 치료에 대 한

The purpose of this study was to methodically illustrate and highlight the crucial steps of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a ...

Methodology for Sputum Induction and Laboratory Processing

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which is interesting in various respiratory diseases like asthma, chronic obstructive pulmonary disease (COPD), chronic cough, or idiopathic pulmonary fibrosis. This technique is well tolerated, safe and non-invasive, but is currently limited to research services and specialized centers in clinical practice because it is technically demanding, time-consuming, and requires trained staff. The success rate of sputum induction and analysis is about 80%.
Here, we describe the induction and laboratory processing of sputum samples. Sputum is induced by inhalation of hypertonic or isotonic saline with salbutamol. For the processing, we use the whole sputum technique. Dithiothreitol (DTT) is used to allow mucolysis of sputum samples. The primary aim of sputum processing is to obtain a differential cell count to study the cell types present in the airway lumen. Additional analyses may also be performed on sputum supernatant and sputum cells, which may allow further investigation into inflammatory processes and immune mechanisms. Examples include studying mediators in sputum supernatant and performing a large spectrum of analysis on sputum cells such as flow cytometry, genomics, or proteomics.
Finally, representative results of sputum analysis in healthy controls, asthmatics, and COPD patients are presented.

Here we describe the technique of sputum induction. This protocol also explains the sputum processing to perform a differential cell count and to collect sputum supernatant and cells for further analysis.

선 유도 및 실험실 방법론

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which ...

Sampling Strategies and Processing of Biobank Tissue Samples from Porcine Biomedical Models

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of genetically modified pig models, and the often-limited number of available animals of these models, establishment of (biobank) collections of adequately processed tissue samples suited for a broad spectrum of subsequent analyses methods, including analyses not specified at the time point of sampling, represent meaningful approaches to take full advantage of the translational value of the model. With respect to the peculiarities of porcine anatomy, comprehensive guidelines have recently been established for standardized generation of representative, high-quality samples from different porcine organs and tissues. These guidelines are essential prerequisites for the reproducibility of results and their comparability between different studies and investigators. The recording of basic data, such as organ weights and volumes, the determination of the sampling locations and of the numbers of tissue samples to be generated, as well as their orientation, size, processing and trimming directions, are relevant factors determining the generalizability and usability of the specimen for molecular, qualitative, and quantitative morphological analyses. Here, an illustrative, practical, step-by-step demonstration of the most important techniques for generation of representative, multi-purpose biobank specimen from porcine tissues is presented. The methods described here include determination of organ/tissue volumes and densities, the application of a volume-weighted systematic random sampling procedure for parenchymal organs by point-counting, determination of the extent of tissue shrinkage related to histological embedding of samples, and generation of randomly oriented samples for quantitative stereological analyses, such as isotropic uniform random (IUR) sections generated by the &#34;Orientator&#34; and &#34;Isector&#34; methods, and vertical uniform random (VUR) sections.

The practical application and performance of methods for generation of representative tissue samples of porcine animal models for a broad spectrum of downstream analyses in biobank projects are demonstrated, including volumetry, systematic random sampling, and differential processing of tissue samples for qualitative and quantitative morphologic and molecular analyses types.

샘플링 전략 및 돼지 생물 의학 모델에서 Biobank 조직 샘플의 처리

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of ...

A Training and Testing System for Performing Vascular Reconstruction In Vitro

Manual vascular reconstruction training is essential for a beginner surgeon. However, an optimal training system for vascular reconstruction in vitro has yet to be developed. In this study, we introduce an in vitro training and testing system using a magnetic anchoring technique with which a trainee can practice manual vascular reconstruction individually. Additionally, this system can also be used to test the quality of the reconstruction. The described system includes a vascular reconstruction training machine, magnetic tractors, and a magnetic suture puller. In this manuscript, we detail an end-to-end vein anastomosis using porcine right and left iliac veins. To identify the potential damage caused by a magnetic suture puller on the suture, we created three groups with six segments of 4-0 polypropylene sutures each: a control group with no intervention on the polypropylene suture, a group in which the polypropylene suture is manually pulled with sterile gloves 20x, and a magnetic puller group in which the magnetic puller pulled the polypropylene suture 20x. These groups were tested by light microscopy and breaking strength tests, and the effect of reconstruction was assessed. In the light microscopy test, the control group was less likely to be damaged (p &#60; 0.05) and the number of damaged points of the manual group and magnetic puller group were similar (p &#62; 0.05). The results of the breaking strength test were compared across groups and no significant difference was observed (p &#62; 0.05). The end-to-end anastomosis of the porcine iliac veins was successfully performed using this training system, and the reconstructed veins could undergo 2.0 kPa perfusion pressure. Using this training and testing system the trainee can practice manual vascular reconstruction in vitro individually with the aid of magnetic tractors and a magnetic suture puller, and the quality of the reconstruction can be tested.

Here we present a training and testing system where a trainee can complete manual vascular reconstruction in vitro individually using a magnetic anchoring technique. The system can also be used to test the quality of reconstruction.

체외에서 혈관 재건을 수행하기 위한 교육 및 테스트 시스템

Manual vascular reconstruction training is essential for a beginner surgeon. However, an optimal training system for vascular reconstruction in vitro has ...