Name: performing and processing fna of anterior fat pad for amyloid
Uploaded: 2010-10-30T17:00:00
Duration: 9 min 41 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid at JoVE.com

Мы благодарим г-жа Бонни Phetteplace, Р. Н. за помощь во время видео-графические демонстрации FNAB процедуры.

Введение Системный амилоидоз сильно варьирует заболевание, которое относится к внеклеточным отложением различных белков, которые все вместе называются амилоида. Осаждение этих амилоидные фибриллы с бета плиссированные конфигурация приводит к различным клинические проявления в зависимости от органов, участвующих. Наиболее клинически значимых проявлений системного амилоидоза отмечаются, когда есть участие критических органов, таких как сердце, печень, и / или почек. Исторически эти участвуют органы были бы биопсию, чтобы продемонстрировать наличие амилоида. Эти умеренно инвазивных процедур, проводимых в том числе значительный риск кровотечения. Жир стремление площадку тех пор было показано, чтобы обеспечить надежную и неинвазивный метод для выявления амилоида в системный амилоидоз 1. Эта процедура существенно схожей с липосакцией подкожно-жировой клетчатки в передней брюшной стенке под местной анестезией для получения фиброзно-жировой ткани для оценки скудные депозитов амилоида в малой кровью стенок сосудов 2. Наиболее часто используемые методы идентификации амилоида в ткани остается характерным яблочно-зеленый двулучепреломления картины видно, когда Конго красный окрашенных срезах визуализируются под микроскопом поляризованный свет 3. Когда жир стремление площадку осуществляется, Конго красные пятна может быть сделано либо на прямую смазывают слайдов или клеточных препаратов блок атмосферный жировой ткани. Однако у пациентов на ранних стадиях амилоидоза имеют скудную депозиты амилоида, что значительно снижает чувствительность Конго красный окрашенных ячейки блока разделы 4,5. Ультраструктурные оценка жира аспиратов площадку с помощью электронной микроскопии имеет лучшую воспроизводимость и улучшенной чувствительностью 4. Поэтому, рекомендуется представить весь жир аспиратов площадкой для подготовки ячейки блока и для выполнения электронной микроскопии 2. Жир стремление площадкой является относительно низкая стоимость и неинвазивный метод для получения тканей для диагностики системного амилоидоза. В этой статье описывается процедура жира стремление площадку вместе с подробными сведениями об обработке образцов представить образец для окрашивания Конго красным и ультраструктурные оценки с помощью электронной микроскопии. В этом видео, мы демонстрируем это воспроизводимая и простая процедура для получения оптимального диагностического материала. 1. Выполнение FNA Передней жировой ткани А. обезболивания в данной местности (рис. 1 и 2) <ol><li> Прием алкоголя тампоны или агента очищения кожи предпочитают конкретного учреждения, чистая кожа на нижнем квадранте области живота сбоку от средней линии и ниже пупка (рис. 1). </li><li> Марк ромбовидной формы площадью около 2 х 2 дюйма, как показано на рисунке 1 с маркером. </li><li> Аспирируйте примерно 10 мл 1% лидокаина с 18G иглу. Прикрепить 25G 1 ½ дюйма иглы шприца. Удалите пузырьки воздуха, нажав вертикально шприц, одновременно нажимая на поршень пока жидкость не обойтись и без воздушных пузырьков присутствуют. </li><li> Обезболить вдоль границ ромбовидной области уже отмечены, как показано на рисунке 2. Начните с вставкой 25G иглу под кожу в точке и осторожно толкать иглу подкожно в точке X. Отойдите на поршень шприца, чтобы убедиться, что вы не в сосуде. Затем медленно толкать поршень проникнуть до 2,5 мл лидокаина (около ¼ от лидокаина в 10 мл шприц) при выводе иглу в точку, не давая игла вышла из кожи в точке А (рис. 2a3). С иглой по-прежнему под кожей изменить направление к точке Y (рис. 2A4) и нажмите иглой подкожно точки Y (рис. 2b1). Как и прежде, убедитесь, что игла не находится в сосуде и обойтись примерно в 2,5 мл лидокаина, медленно снять иглу через точку (рис. 2B3 через 2В4). Повторите аналогичные шаги, начиная с точки В и отпуск лидокаина подкожной от точки В к Х и В к Y (рис. 2c1 через 2d4). Предотвращение кровотечения из уколов и B фирмой применения стерильных кусок колеи. </li><li> Теперь можно проверить, что этот район под наркозом, слегка касаясь кожи в течение анестезии ромбовидной кончиком / углу кусок марли хлопка, по сравнению с соседними ненаркотизированных кожи. </li></ol> Б. Выполнение жира стремление площадки (рис. 3) (Применение местной анестезии до выступления жира стремление площадки могут быть обойдены, в зависимости от региональных и индивидуальных предпочтений. Правильно выполнены FNAB процедуры для передних жира стремление площадки может быть завершена в одном укол. Однако в зависимости от болевого порога индивидуального пациента , маневрирования 18G иглу взад и вперед, чтобы ткань подкожно-жировой клетчатки относительно distresпеть. Обезболивания метод, описанный здесь достигается эффект только в двух уколов иглой с 25G и предотвращает боли с улучшением толерантности к процедуре.) <ol><li> Соберите 18G 1 ½ дюйма иглы на 10 мл шприца. Горы шприц иглой сборки в шприц сцепление (&quot;FNAB сцепление / пистолет&quot;) для надлежащего применения и выпуска вакуума. </li><li> Вставьте кончик иглы в подкожно-жировой клетчатки в очищены и анестезия ромбовидной области (рис. 3а). </li><li> Полностью отказаться поршень шприца с иглой в подкожную ткань для создания вакуума (рис. 3б). </li><li> Поддерживать вакуум и маневра иглы вперед и назад в различных направлениях в подкожно-жировой клетчатки (рис. 3в через 3i). Каждый удар должен быть как можно дольше с длиной иглы выбраны не давая игла вышла из кожи. Максимальная частота дискретизации достигается за счет изменения направления с каждым ударом (рис. 3i). Важно сохранить направление иглы касательной к серозной и параллельно поверхности кожи, чтобы избежать проколов брюшной полости. </li><li> Фиброзно-жировой ткани накапливается в шприц. После достаточно фиброзно-жировой ткани фрагментов (до 1 мл фрагменты богатых кровь, смешанную образца) извлекаются, выпуск вакуумного полностью и удалить иглы (рис. 3 Кб). </li><li> У пациента или помощник Приложите усилие на площади процедуру с площадки марли, чтобы предотвратить кровоизлияние крови. </li></ol> 2. Обработки образцов <ol><li> Место не менее 5-6 фрагменты фиброзно-жировой ткани в глутаральдегида решение для электронной микроскопии (рис. 4В). </li><li> В зависимости от институциональных протокол, несколько мазков фрагменты фиброзно-жировой ткани может быть получен за счет распределения их между двумя предметными стеклами (рис. 4А). </li><li> Оставшийся материал разрешается сгусток в шприц (это может занять 5-7 минут, в зависимости от времени свертывания) (рис. 4С). </li><li> Аспирируйте 10% формалина в шприце, так что сгустки материала ткани фиброзно-жировой смещается от стены шприц и свободного плавания (рис. 4С2). Удалите поршень из шприца (рис. 4C3) и передачи сгустками ткани в фиброзно-жировой 10% формалина контейнер с открытым концом шприц противоположном конце сопла (рис. 4С4). </li><li> Этикетка контейнеры надлежащим образом и представить глутаральдегида для электронной микроскопии и формалина для H &amp; E раздел и Конго красное пятно для оценки под поляризационным микроскопом. Если мазки готовы, они могут быть обработаны в соответствии с протоколом отдельные лаборатории. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig1.jpg" alt="Рисунок 1" /> Рисунок 1. Площадь для анестезии для FNAB передней жировой ткани. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig2.jpg" alt="Рисунок 2" /> Рисунок 2. Обезболивания в регионе. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig3.jpg" alt="Рисунок 3" /> Рисунок 3. Выполнение FNAB передней жировой ткани. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig4.jpg" alt="Рисунок 4" /> Рисунок 4. Обработка передней жировой ткани аспирата, которые будут представлены в лабораторию для выявления амилоидных отложений. 3. Представитель Результаты <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig5.jpg" alt="Рисунок 5" /> Рисунок 5. Амилоида в стенках мелких кровеносных сосудов фрагменты фиброзно-жировой ткани. Фиброзно-жировой ткани в формалине обработаны, парафин, окрашивали Конго красный, и рассмотрены поляризационные световой микроскопии. Амилоида в стенках мелких кровеносных сосудов показывает, зеленого яблока двулучепреломления (белая стрелка). <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig6.jpg" alt="Рисунок 6" /> Рисунок 6. Ткань не хватает амилоидоза. Двулучепреломления зеленого яблока отсутствует в тканях различных пациентов без амилоидоза. Синий двулучепреломления (белая стрелка) коллагеновых волокон, как правило, присутствуют почти во всех образцах. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig7.jpg" alt="Рисунок 7" /> Рисунок 7. Фибриллы в соответствии с амилоида в стенки кровеносного сосуда. Электронная микрофотография прямые, неветвящиеся, случайно рассеянные 8-10 нм в диаметре волокон образована амилоида в стенки кровеносного сосуда.

<ol>
	<li>Westermark, P., Stenkvist, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+the+diagnosis+of+systemic+amyloidosis.">A new method for the diagnosis of systemic amyloidosis.</a> Arch Intern Med. 132, 522-523 (1973).</li><li>Devata, S., Hari, P., Markelova, N., Li, R., Shidham, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detecting+AL+Amyloid+in+Abdominal+fat+pad+aspirates:+Is+Congo+red+sufficient?.">Detecting AL Amyloid in Abdominal fat pad aspirates: Is Congo red sufficient?.</a> Amyloid. , .</li><li>Merlini, G., Bellotti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Mechanisms+of+Amyloidosis.">Molecular Mechanisms of Amyloidosis.</a> New Engl J Med. 349 (6), 583-596 (2003).</li><li>Shidham, V. B., Kumar, N., Cihlar, K., Varsegi, G., Markelova, N., Li, R., Hari, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fine+needle+aspiration+of+abdominal+fat+pad+for+diagnosis+of+early+amyloidosis:+How+can+the+clinical+role+of+the+test+be+improved?.">Fine needle aspiration of abdominal fat pad for diagnosis of early amyloidosis: How can the clinical role of the test be improved?.</a> Mod Pathol. 20, 1A-380A (2007).</li><li>Halloush, R., Lavrovskaya, E., Mody, D., Lager, D., Truong, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+typing+of+systemic+amyloidosis:+The+role+of+abdominal+fat+pad+fine+needle+aspiration.">Diagnosis and typing of systemic amyloidosis: The role of abdominal fat pad fine needle aspiration.</a> Cytojournal. 6, 24-24 (2010).</li><li>Hazenberg, I. I., Rijswijk, C. V. a. n., H, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+Accuracy+of+Subcutaneous+Abdominal+Fat+Tissue+Aspiration+for+Detecting+Systemic+Amyloidosis+and+Its+Utility+in+Clinical+Practice.">Diagnostic Accuracy of Subcutaneous Abdominal Fat Tissue Aspiration for Detecting Systemic Amyloidosis and Its Utility in Clinical Practice.</a> Arthritis Rheum. , 54-546 (2006).</li><li>Guy, C. D., Jones, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abdominal+fat+pad+aspiration+biopsy+for+tissue+confirmation+of+systemic+amyloidosis:+specificity,+positive+predictive+value,+and+diagnostic+pitfalls.">Abdominal fat pad aspiration biopsy for tissue confirmation of systemic amyloidosis: specificity, positive predictive value, and diagnostic pitfalls.</a> Diagn Cytopathol. 24, 181-185 (2001).</li><li>Westermark, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosing+Amyloidosis.">Diagnosing Amyloidosis.</a> Scand J Rheumatol Suppl. 24, 327-329 (1995).</li><li>Linke, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+Sensitive+Diagnosis+of+Amyloid+and+Various+Amyloid+Syndromes+Using+Congo+Red+Fluorescence.">Highly Sensitive Diagnosis of Amyloid and Various Amyloid Syndromes Using Congo Red Fluorescence.</a> Virchow Arch. 436, 439-448 (2000).</li><li>Giorgadze, T. A., Shiina, N., Baloch, Z. W., Tomaszewski, J. E., Gupta, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+detection+of+amyloid+in+fat+pad+aspiration:+an+evaluation+of+Congo+red+stain+by+fluorescent+microscopy.">Improved detection of amyloid in fat pad aspiration: an evaluation of Congo red stain by fluorescent microscopy.</a> Diagn Cytopathol. 31, 300-306 (2004).</li><li>DeMay, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fine+Needle+Aspiration+Biopsy.">Fine Needle Aspiration Biopsy.</a> The Art &#38; Science of Cytopathology. , 465-46 (1996).</li><li>Arbustini, E., Vrga, L., Concardi, M., Pallandini, G., Obici, L., Merlini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+and+Immuno-electron+Microscopy+of+Abdominal+Fat+Identifies+and+Characterizes+Amyloid+Fibrils+in+Suspected+Cardiac+Amyloidosis.">Electron and Immuno-electron Microscopy of Abdominal Fat Identifies and Characterizes Amyloid Fibrils in Suspected Cardiac Amyloidosis.</a> Amyloid. 9, 108-114 (2002).</li></ol>

Нет конфликта интересов.

Диагностика амилоидоза, как правило, достигается при биопсии пораженных органов, таких как почки, печень и / или сердца. Такой подход имеет высокую диагностическую ценность, однако, является инвазивным и могут быть связаны с осложнениями, включая кровоизлияние 2. Ректально, десны, и биопсия костного мозга предпочтительным для диагностики как относительно менее инвазивных подход в 1960-х годов 6,7,8. Брюшной жир стремление площадке был зарегистрирован в 1973 году как безопасные, минимально инвазивных, простой и менее дорогостоящей процедурой для ткани диагноз системного амилоидоза 1. Тем не менее, детали процедуры и подход к обработке полученного образца не когерентно сообщается. Это видео и статье описывается процедура шаг за шагом. Подход для выявления амилоида в жире стремление площадку, похоже, также не очень хорошо стандартизованный несколько исследований, сравнения и оценки различных подходов 1,5,6,7,8. Оценка передней жира аспиратов площадку с окрашивания Конго красным менее чувствительна с более низкими interobserver воспроизводимость особенно в ранние случаи амилоидоза со скудной депозиты амилоида 5. Immunohistochemistry осуществляется на фиксированных формалином и залитых парафином ячейке блока секций и Конго красной флуоресценции осуществляется на цитологию мазков были зарегистрированы для улучшения диагностической чувствительностью 9,10. Электронная микроскопия улучшает обнаружение и идентификация скудные фибрилл амилоида в небольших стен кровеносного сосуда в фиброзно-жировой ткани в жировой ткани аспиратов 4, 5. Основываясь на этой информации, в данной статье описывается обработка образца подготовить ячейки блоков (для оценки Конго красный окрашенных ячейки блока секции под поляризационный микроскоп для диагностики двулучепреломления зеленого яблока, а также для иммуногистохимии, как это указано) и электронной микроскопии. Однако в зависимости от выбранного подхода для оценки образцов для амилоида, он может быть подвергнут цитология мазков подготовка, подготовка ячейки блока и обработки данных для электронной микроскопии. Некоторые лаборатории проводить испытания на мазки готовят из атмосферный фрагментов ткани фиброзно-жировой и окрашивают конго для изучения флуоресценции 10. Как правило, в конце амилоидоз, световой микроскопии с Конго красным поляризационной микроскопии может быть достаточно, однако на ранних стадиях заболевания конго окрашивания поляризационной микроскопии по разделам ячейки блока менее чувствительным и надежным для жировая ткань всасывает 4,5,11 . Другие специальные пятна в том числе тиофлавина T могут быть использованы с подобными ограничениями. Другие подходы для выявления амилоида включать оценку аспирата мазков для амилоида с Конго красным поляризационной микроскопии и флуоресценции 10. По нашему опыту этот метод менее воспроизводимым. Оценка кровеносных сосудов в жировой ткани для амилоида с помощью электронной микроскопии позволяет преодолеть эти ограничения 4,11. Дальнейшая характеристика амилоида была сообщает иммуноэлектронной микроскопии 12, однако эти методы не могут быть доступны широко невысшее профилактического учреждения. Иглы, используемые для выполнения стремление процедуры могут быть классифицированы в зависимости от их размеров калибр на мелкие (21-25G), промежуточные (18-20G) и большой (например,-14G) 11. Передняя жира устремления площадки, как сообщается, проводится с помощью переменной датчиков от промежуточных (от 18 до 20G) до штрафа (от 21 до 22G) 2,10. Большая часть массы поражения атмосферным с тонкой иглы (например, 25G), чтобы получить хорошие мазки цитологии вместе с дополнительными проходит с более широкой иглой (например, 18G), чтобы получить дополнительный образец для сотовых блоков. В передней жира стремление коврик, сплоченных ткани фиброзно-жировой не аспирата также с более тонкими иглами. Сотовые Блок подготовки и электронной микроскопии имеют важное значение для оценки малых стенки кровеносных сосудов в ткани фиброзно-жировой фрагментов в жир всасывает. Более широкие иглы (например, 18G) рекомендуются для получения диагностических адекватного материала 2,10. Так как процедура сравнима с обычными FNAB, жир стремление площадка называется FNAB хотя более широкий калибр иглы могут быть использованы для выполнения его 5.

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/index/details.stp?id=1747">Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid</a>. There was an error with an author's name. The author's last name had a typo and was corrected to:
Safwan S. Jaradeh
instead of:
Safwan S. Jardeh

Erratum: Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid

Алкоголь тампоны, марлевые прокладки, маркером, 10 мл шприцев х2, 1% лидокаина (местный анестетик лидокаин-Если используется отдельно, он вызывает начальное жжение после закапывания. Это можно предотвратить, используя смесь 1:1 1% лидокаина и 1% натрия-би-карбоната), 18 калибра (G) 1 ½ дюйма иглы x2 (для выполнения FNAB), 25G 1 ½ дюйма иглы (для введения местного анестетика), FNA шприц держатель (&quot;пушка&quot;), бинты, флакон глутаральдегида (для электронной микроскопии) и биопсии контейнера в размере 10% формалина.

performing and processing fna of anterior fat pad for amyloid

Исторически сложилось так, сердце, печень, почки и биопсии были выполнены, чтобы продемонстрировать амилоидных отложений в амилоидоза. Так как клинические проявления этого заболевания является так переменную и неспецифические, связанные с ними риски этих биопсий являются слишком большими для диагностической ценности. Другие сайты, которые имеют более низкий биопсии риска, таких как кожа или десен, также относительно инвазивных и дорогих. Кроме того, эти биопсии не всегда имеют достаточную депозиты амилоида установить диагноз. Жир стремление площадка продемонстрировала хорошие клинические корреляции с низкой стоимостью и минимальными заболеваемости. Тем не менее, Есть нет стандартных протоколов для выполнения данной процедуры или обработки атмосферный образца, что приводит к переменной и невоспроизводимых результатов. Наиболее часто используемые метода для выявления амилоида в ткани светло-зеленого двулучепреломления на конго окрашенные срезы использованием поляризационного микроскопа. Эта техника требует ячейки блока подготовки атмосферный материал. К сожалению, больных на ранней стадии амилоидоза имеют минимальное количество амилоидных что значительно снижает чувствительность Конго красный окрашенных ячейки блока разделы жира аспиратов площадку. Таким образом, ультраструктурным оценка жира аспиратов площадку с помощью электронной микроскопии следует использовать, учитывая его повышенную чувствительность для обнаружения амилоида. Эта статья демонстрирует простой и воспроизводимой процедуры для выполнения передней жира стремление площадкой для выявления амилоида использованием как окрашивания Конго красным разделов ячейки блока и электронной микроскопии для ультраструктурным идентификации.

Watch this Scientific Journal Video about Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid at JoVE.com

Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid

Жир стремление площадкой является предпочтительным, минимально-инвазивных и низкая стоимость подхода по сравнению с другими методами для выявления амилоида для диагностики системного амилоидоза. Это видео статье показано, процедурный план выполнения жира стремление площадки с соответствующей обработки образцов для оптимального диагностического результата.

Выполнение и обработка FNA Передней жировой ткани для амилоида

Historically, heart, liver, and kidney biopsies were performed to demonstrate amyloid deposits in amyloidosis.  Since the clinical presentation of this ...

performing-and-processing-fna-of-anterior-fat-pad-for-amyloid

Research

JoVE Journal

Medicine

Purification and Aggregation of the Amyloid Precursor Protein Intracellular Domain

Amyloid precursor protein (APP) is a type I transmembrane protein associated with the pathogenesis of Alzheimer's disease (AD). APP is characterized by a large extracellular domain and a short cytosolic domain termed the APP intracellular domain (AICD). During maturation through the secretory pathway, APP can be cleaved by proteases termed &alpha;, &beta;, and &gamma;-secretases1. Sequential proteolytic cleavage of APP with &beta; and &gamma;-secretases leads to the production of a small proteolytic peptide, termed A&beta;, which is amyloidogenic and the core constituent of senile plaques. The AICD is also liberated from the membrane after secretase processing, and through interactions with Fe65 and Tip60, can translocate to the nucleus to participate in transcription regulation of multiple target genes2,3. Protein-protein interactions involving the AICD may affect trafficking, processing, and cellular functions of holo-APP and its C-terminal fragments. We have recently shown that AICD can aggregate in vitro, and this process is inhibited by the AD-implicated molecular chaperone ubiquilin-14. Consistent with these findings, the AICD has exposed hydrophobic domains and is intrinsically disordered in vitro5,6, however it obtains stable secondary structure when bound to Fe657. We have proposed that ubiquilin-1 prevents inappropriate inter- and intramolecular interactions of AICD, preventing aggregation in vitro and in intact cells4. While most studies focus on the role of APP in the pathogenesis of AD, the role of AICD in this process is not clear. Expression of AICD has been shown to induce apoptosis8, to modulate signaling pathways9, and to regulate calcium signaling10. Over-expression of AICD and Fe65 in a transgenic mouse model induces Alzheimer's like pathology11, and recently AICD has been detected in brain lysates by western blotting when using appropriate antigen retrieval techniques12. To facilitate structural, biochemical, and biophysical studies of the AICD, we have developed a procedure to produce recombinantly large amounts of highly pure AICD protein. We further describe a method for inducing the in vitro thermal aggregation of AICD and analysis by atomic force microscopy. The methods described are useful for biochemical, biophysical, and structural characterization of the AICD and the effects of molecular chaperones on AICD aggregation.

A method for large-scale purification of the APP intracellular domain (AICD) is described. We also describe methodology to induce in vitro AICD aggregation and visualization by atomic force microscopy. The methods described are useful for biochemical/structural characterization of the AICD and the effects of molecular chaperones on its aggregation.

Очистка и агрегации белка-предшественника амилоида внутриклеточного домена

Amyloid precursor protein (APP) is a type I transmembrane protein associated with the pathogenesis of Alzheimer's disease (AD). APP is characterized by a ...

Processing of Human Reduction Mammoplasty and Mastectomy Tissues for Cell Culture

Experimental examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated by in vitro culture systems that more accurately model in vivo biology. The use of human derived material for studying cellular differentiation, aging, senescence, and immortalization is particularly advantageous given the many significant molecular differences in these properties between human and commonly utilized rodent cells1-2. Mammary cells present a convenient model system because large quantities of normal and abnormal tissues are available due to the frequency of reduction mammoplasty and mastectomy surgeries.
The mammary gland consists of a complex admixture of many distinct cell types, e.g., epithelial, adipose, mesenchymal, endothelial. The epithelial cells are responsible for the differentiated mammary function of lactation, and are also the origin of the vast majority of human breast cancers. We have developed methods to process mammary gland surgical discard tissues into pure epithelial components as well as mesenchymal cells3. The processed material can be stored frozen indefinitely, or initiated into primary culture. Surgical discard material is transported to the laboratory and manually dissected to enrich for epithelial containing tissue. Subsequent digestion of the dissected tissue using collagenase and hyaluronidase strips stromal material from the epithelia at the basement membrane. The resulting small pieces of the epithelial tree (organoids) can be separated from the digested stroma by sequential filtration on membranes of fixed pore size. Depending upon pore size, fractions can be obtained consisting of larger ductal/alveolar pieces, smaller alveolar clusters, or stromal cells. We have observed superior growth when cultures are initiated as organoids rather than as dissociated single cells. Placement of organoids in culture using low-stress inducing media supports long-term growth of normal HMEC with markers of multiple lineage types (myoepithelial, luminal, progenitor)4-5. Sufficient numbers of cells can be obtained from one individual's tissue to allow extensive experimental examination using standardized cell batches, as well as interrogation using high throughput modalities.
Cultured HMEC have been employed in a wide variety of studies examining the normal processes governing growth, differentiation, aging, and senescence, and how these normal processes are altered during immortal and malignant transformation4-15,16. The effects of growth in the presence of extracellular matrix material, other cell types, and/or 3D culture can be compared with growth on plastic5,15. Cultured HMEC, starting with normal cells, provide an experimentally tractable system to examine factors that may propel or prevent human aging and carcinogenesis.

A method to process human mammary surgical discard material is described. Processed tissue, in the form of organoids, can be stored frozen indefinitely or placed in culture for long-term growth. This method enables experimental examination of normal human epithelial cell biology, and the effects of exogenous perturbations.

Обработка по правам Маммопластика сокращении и Мастэктомия тканей для культуры клеток

Experimental  examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how  normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the functions of proteins involved in oncogenic progression or help to discover new tumor suppressors. In addition, injecting cancer cells into mice with different genotypes might provide a better understanding of the importance of the stromal compartment. Many models may be useful to investigate certain aspects of disease progression but do not recapitulate the entire cancerous process. In contrast, breast cancer cells engraftment to the mammary fat pad of mice better recapitulates the location of the disease and presence of the proper stromal compartment and therefore better mimics human cancerous disease. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into mice orthotopically and explain how to collect tissues to analyse the tumor milieu and metastasis to distant organs. Using this model, many aspects (growth, angiogenesis, and metastasis) of cancer can be investigated simply by providing a proper environment for tumor cells to grow.

Cancer is a complex disease that is influenced by the tissue surrounding the tumor as well as local pro- and anti-inflammatory mediators. Therefore, orthotropic injection models, rather than subcutaneous models may be useful to study cancer progression in a manner that better mimics human pathology.

Ортотопическая инъекции клеток рака молочной железы в молочной жировой ткани мышей для изучения роста опухоли.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft tissue filler as it is readily available, easily obtained, inexpensive, and inherently biocompatible.1 However, despite its burgeoning popularity, fat grafting is hampered by unpredictable results and variable graft survival, with published retention rates ranging anywhere from 10-80%. 1-3
To facilitate investigations on fat grafting, we have therefore developed an animal model that allows for real-time analysis of injected fat volume retention. Briefly, a small cut is made in the scalp of a CD-1 nude mouse and 200-400 &#181;l&#160;of processed lipoaspirate is placed over the skull. The scalp is chosen as the recipient site because of its absence of native subcutaneous fat, and because of the excellent background contrast provided by the calvarium, which aids in the analysis process. Micro-computed tomography (micro-CT) is used to scan the graft at baseline and every two weeks thereafter. The CT images are reconstructed, and an imaging software is used to quantify graft volumes.
Traditionally, techniques to assess fat graft volume have necessitated euthanizing the study animal to provide just a single assessment of graft weight and volume by physical measurement ex vivo. Biochemical and histological comparisons have likewise required the study animal to be euthanized. This described imaging technique offers the advantage of visualizing and objectively quantifying volume at multiple time points after initial grafting without having to sacrifice the study animal. The technique is limited by the size of the graft able to be injected as larger grafts risk skin and fat necrosis. This method has utility for all studies evaluating fat graft viability and volume retention. It is particularly well-suited to providing a visual representation of fat grafts and following changes in volume over time.

Fat grafting is an essential technique for reconstructing soft tissue deficits. However, it remains an unpredictable procedure characterized by variable graft survival. Our goal was to devise a mouse model that utilizes a novel imaging method to compare volume retention between differing techniques of fat graft preparation and delivery.

Оценка жизнеспособности человеческого жира инъекции голым мышам с Micro-компьютерной томографии

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic transplantation of ovarian surface and tubal epithelia include intraperitoneal and intrabursal administration of cells. The respective limitations of these methods include poorly defined location of injected cells and limited space volume. Furthermore, they are poorly suited for long-term structural preservation of transplanted organs. To address these challenges, we have developed an alternative approach, which is based on the introduction of cells and tissue fragments into the mouse fat pad. The mouse ovarian fat pad is located in the immediate vicinity of the ovary and uterine tube (aka oviduct, fallopian tube), and provides a familiar microenvironment for cells and tissues of these organs. In our approach fluorescence-labeled mouse and human cells, and fragments of the uterine tube are engrafted by using minimally traumatic dorsal incision surgery. Transplanted cells and their outgrowths are easily located in the ovarian fat pad for over 40 days. Long-term transplantation of the entire uterine tube allows correct preservation of all principle tissue components, and does not result in adverse side effects, such as fibrosis and inflammation. Our approach should be uniquely applicable for answering important biological questions such as differentiation, regenerative and neoplastic potential of specific cell populations. Furthermore, it should be suitable for studies of microenvironmental factors in normal development and cancer.

We describe an ovarian fad pad transplantation assay suitable for studies of normal and transformed epithelia of the female reproductive tract. The mouse fat pad allows transplantation of large tissue fragments, is easily accessible for surgery and imaging, and provides the most favorable native environment for tissues of M&#252;llerian origin.

Трансплантация в коврик для мыши Овариальное Fat

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

Confirmation of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury in Mice Using Surface Pad Electrocardiography

Many animal models have been established for the study of myocardial remodeling and heart failure due to its status as the number one cause of mortality worldwide. In humans, a pathologic occlusion forms in a coronary artery and reperfusion of that occluded artery is considered essential to maintain viability of the myocardium at risk. Although essential for myocardial recovery, reperfusion of the ischemic myocardium creates its own tissue injury. The physiologic response and healing of an ischemia/reperfusion injury is different from a chronic occlusion injury. Myocardial ischemia/reperfusion injury is gaining recognition as a clinically relevant model for myocardial infarction studies. For this reason, parallel animal models of ischemia/reperfusion are vital in advancing the knowledge base regarding myocardial injury. Typically, ischemia of the mouse heart after left anterior descending (LAD) coronary artery occlusion is confirmed by visible pallor of the myocardium below the occlusion (ligature). However, this offers only a subjective way of confirming correct or consistent ligature placement, as there are multiple major arteries that could cause pallor in different myocardial regions. A method of recording electrocardiographic changes to assess correct ligature placement and resultant ischemia as well as reperfusion, to supplement observed myocardial pallor, would help yield consistent infarct sizes in mouse models. In turn, this would help decrease the number of mice used. Additionally, electrocardiographic changes can continue to be recorded non-invasively in a time-dependent fashion after the surgery. This article will demonstrate a method of electrocardiographically confirming myocardial ischemia and reperfusion in real time.

During murine myocardial ischemia/reperfusion surgery, correct placement of the occluding ligature is typically confirmed by visible observation of myocardial pallor. Herein, a method of electrocardiographically confirming ischemia and reperfusion, to supplement observed myocardial pallor, is demonstrated in male C57Bl/6 mice.

Подтверждение инфарктом ишемией и реперфузии у мышей с использованием поверхности Pad электрокардиографии

Many animal models have been established for the study of myocardial remodeling and heart failure due to its status as the number one cause of mortality ...

Stromal Vascular Fraction-enriched Fat Grafting for the Treatment of Symptomatic End-neuromata

The purpose of this study was to methodically illustrate and highlight the crucial steps of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a novel treatment of symptomatic end-neuromata of peripheral sensory nerves, and in this study, specifically of the superficial branch of the radial nerve (SBRN). Despite a multitude of existing treatments, persistent postoperative pain and common pain relapse are still very common, independent of the procedure assessed. The neuroma is microsurgically excised accordingly to standardized protocol. Instead of the relocation of the regenerating nerve stump in neighboring anatomical structures, such as muscle or bone, a fat graft is applied perifocally and acts as a mechanical barrier. In order to reduce the fat resorption rate and boost the regenerative potential of the graft, the highly concentrated SVF is integrated in the grafting. The SVF is isolated from subcutaneous fat by enzymatic and mechanic separation of the lipoaspirate by a specific commercial isolation system. The SVF-enriched fat graft provides both a mechanical barrier and various biological effects at the cellular level, including improving angiogenesis, inflammation, and fibrosis. Both mechanical and biologic effects help to reduce the disorganized axonal outgrowth of the nerve stump during nerve regeneration and hence prevent the recurrence of painful end-neuromata.

The purpose of the study is to illustrate the technical procedure of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a novel treatment of symptomatic end-neuromata. This technique provides advantages of both the mechanical barrier and the biological action at the cellular level by the processed and concentrated SVF.

Стромальные сосудистой фракция обогащенный жира прививки для лечения симптоматических конец neuromata

The purpose of this study was to methodically illustrate and highlight the crucial steps of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a ...

Methodology for Sputum Induction and Laboratory Processing

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which is interesting in various respiratory diseases like asthma, chronic obstructive pulmonary disease (COPD), chronic cough, or idiopathic pulmonary fibrosis. This technique is well tolerated, safe and non-invasive, but is currently limited to research services and specialized centers in clinical practice because it is technically demanding, time-consuming, and requires trained staff. The success rate of sputum induction and analysis is about 80%.
Here, we describe the induction and laboratory processing of sputum samples. Sputum is induced by inhalation of hypertonic or isotonic saline with salbutamol. For the processing, we use the whole sputum technique. Dithiothreitol (DTT) is used to allow mucolysis of sputum samples. The primary aim of sputum processing is to obtain a differential cell count to study the cell types present in the airway lumen. Additional analyses may also be performed on sputum supernatant and sputum cells, which may allow further investigation into inflammatory processes and immune mechanisms. Examples include studying mediators in sputum supernatant and performing a large spectrum of analysis on sputum cells such as flow cytometry, genomics, or proteomics.
Finally, representative results of sputum analysis in healthy controls, asthmatics, and COPD patients are presented.

Here we describe the technique of sputum induction. This protocol also explains the sputum processing to perform a differential cell count and to collect sputum supernatant and cells for further analysis.

Методология для индукции мокроты и лаборатория обработки

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which ...

Sampling Strategies and Processing of Biobank Tissue Samples from Porcine Biomedical Models

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of genetically modified pig models, and the often-limited number of available animals of these models, establishment of (biobank) collections of adequately processed tissue samples suited for a broad spectrum of subsequent analyses methods, including analyses not specified at the time point of sampling, represent meaningful approaches to take full advantage of the translational value of the model. With respect to the peculiarities of porcine anatomy, comprehensive guidelines have recently been established for standardized generation of representative, high-quality samples from different porcine organs and tissues. These guidelines are essential prerequisites for the reproducibility of results and their comparability between different studies and investigators. The recording of basic data, such as organ weights and volumes, the determination of the sampling locations and of the numbers of tissue samples to be generated, as well as their orientation, size, processing and trimming directions, are relevant factors determining the generalizability and usability of the specimen for molecular, qualitative, and quantitative morphological analyses. Here, an illustrative, practical, step-by-step demonstration of the most important techniques for generation of representative, multi-purpose biobank specimen from porcine tissues is presented. The methods described here include determination of organ/tissue volumes and densities, the application of a volume-weighted systematic random sampling procedure for parenchymal organs by point-counting, determination of the extent of tissue shrinkage related to histological embedding of samples, and generation of randomly oriented samples for quantitative stereological analyses, such as isotropic uniform random (IUR) sections generated by the &#34;Orientator&#34; and &#34;Isector&#34; methods, and vertical uniform random (VUR) sections.

The practical application and performance of methods for generation of representative tissue samples of porcine animal models for a broad spectrum of downstream analyses in biobank projects are demonstrated, including volumetry, systematic random sampling, and differential processing of tissue samples for qualitative and quantitative morphologic and molecular analyses types.

Стратегий выборки и обработки образцов ткани биобанка из свинины биомедицинской модели

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of ...

A Training and Testing System for Performing Vascular Reconstruction In Vitro

Manual vascular reconstruction training is essential for a beginner surgeon. However, an optimal training system for vascular reconstruction in vitro has yet to be developed. In this study, we introduce an in vitro training and testing system using a magnetic anchoring technique with which a trainee can practice manual vascular reconstruction individually. Additionally, this system can also be used to test the quality of the reconstruction. The described system includes a vascular reconstruction training machine, magnetic tractors, and a magnetic suture puller. In this manuscript, we detail an end-to-end vein anastomosis using porcine right and left iliac veins. To identify the potential damage caused by a magnetic suture puller on the suture, we created three groups with six segments of 4-0 polypropylene sutures each: a control group with no intervention on the polypropylene suture, a group in which the polypropylene suture is manually pulled with sterile gloves 20x, and a magnetic puller group in which the magnetic puller pulled the polypropylene suture 20x. These groups were tested by light microscopy and breaking strength tests, and the effect of reconstruction was assessed. In the light microscopy test, the control group was less likely to be damaged (p &#60; 0.05) and the number of damaged points of the manual group and magnetic puller group were similar (p &#62; 0.05). The results of the breaking strength test were compared across groups and no significant difference was observed (p &#62; 0.05). The end-to-end anastomosis of the porcine iliac veins was successfully performed using this training system, and the reconstructed veins could undergo 2.0 kPa perfusion pressure. Using this training and testing system the trainee can practice manual vascular reconstruction in vitro individually with the aid of magnetic tractors and a magnetic suture puller, and the quality of the reconstruction can be tested.

Here we present a training and testing system where a trainee can complete manual vascular reconstruction in vitro individually using a magnetic anchoring technique. The system can also be used to test the quality of reconstruction.

Система обучения и тестирования для выполнения сосудистой реконструкции в Vitro

Manual vascular reconstruction training is essential for a beginner surgeon. However, an optimal training system for vascular reconstruction in vitro has ...