Name: optimized fibrin gel bead assay for the study of angiogenesis
Uploaded: 2007-04-29T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Optimized Fibrin Gel Bead Assay for the Study of Angiogenesis at JoVE.com

<p class="jove_step"> ПОДГОТОВКА КЛЕТОК </p><ol><li> Вызовите HUVEC и фибробластов в M199/10% FBS / Пен-Strep (1:100) за 1-2 дня до бисером. </li><li> Коммутатор средних EGM-2 (Clonetics) день до бисером для HUVEC и позавчера вложение для фибробластов. </li><li> Концентрация ~ 400 HUVEC в шарик не требуется. </li><li> 20000 фибробластов на лунку необходимо. </li></ol><...

<ol>
	<li>Nehls, V., Drenckhahn, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microcarrier-based+cocultivation+system+for+the+investigation+of+factors+and+cells+involved+in+angiogenesis+in+three-dimensional+fibrin+matrices+in+vitro.">A microcarrier-based cocultivation system for the investigation of factors and cells involved in angiogenesis in three-dimensional fibrin matrices in vitro.</a> <em style='font-style: italic'>Histochem Cell Biol</em>. <b>104</b>, 459-466 (1995).</li><li>Nehls, V., Drenckhahn, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel,+microcarrier-based+in+vitro+assay+for+rapid+and+reliable+quantification+of+three-dimensional+cell+migration+and+angiogenesis.">A novel, microcarrier-based in vitro assay for rapid and reliable quantification of three-dimensional cell migration and angiogenesis.</a> <em style='font-style: italic'>Microvasc Res</em>. <b>50</b>, 311-322 (1995).</li></ol>

<p> Существует растущий консенсус, что трехмерная (3D) в анализах пробирке ангиогенеза предлагаем модель, которая гораздо ближе к реальной среде, чем в естественных условиях можно добиться, используя 2D культур. Очевидно, что превосходное 3D-системы должны быть воспроизводимы, и будут способны имитиров?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Cytodex-3 Beads</td>
<td>Reagent</td>
<td>Amersham Pharmacia</td>
<td>17-0485-01</td>
<td>10 g/bottle. 
1.	0.5 g of dry beads are hydrated and swollen in 50 mL PBS (pH=7.4) for at least 3 hours at RT.
Use a 50 mL tube and place it on the rocker.
2.	Let the beads settle down (~ 15 min). Discard the supernatant and wash the beads for a few minutes in fresh PBS (50 mL).
3.	Discard the PBS and replace with fresh PBS:
25 mL -> 20 mg/mL => 60000 beads/mL or
50 mL -> 10 mg/mL => 30000 beads/ mL
4.	Place the bead suspension in a siliconized glass bottle (Windshield Wiper or Sigmacote).
5.	Sterilize the beads by autoclaving for 15 min at 115&#xF0B0;C.
6.	Store it at 4&#xF0B0;C.
</td>
</tr>
<tr>
<td>Aprotinin</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>A-1153</td>
<td>10mg/bottle. Reconstitute lyophilized aprotinin at 4 U/mL in DI water. Sterile filter. Make aliquots of 1 mL each. Store at -20C.
</td>
</tr>
<tr>
<td>Fibrinogen Type I</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>F-8630</td>
<td>1g. Dissolve 2 mg/mL fibrinogen in DPBS
Note clottable protein % and adjust accordingly 
Heat in a 37&#xF0B0;C-water bath to dissolve the fibrinogen. Mix by inverting the tube. Do not vortex.
Sterile filter through 0.22 um
</td>
</tr>
<tr>
<td>Thrombin</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>T-3399</td>
<td>22 mg=1000 units. Reconstitute in sterile water at 50 U/mL. Make aliquots of 0.5 mL each. Store at -20C.
</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

optimized fibrin gel bead assay for the study of angiogenesis

<p class="jove_content">Ангиогенез представляет собой сложный многоступенчатый процесс, в котором, в ответ на ангиогенных стимулы, новые суда создаются из существующих сосудов. Эти шаги включают в себя: деградации базальной мембраны, пролиферации и миграции (прорастание) эндотелиальных клеток (ЕК) в внеклеточного матрикса, выравнивания ЕС в шнуры, ветвящийся, просвет образования, анастомоза, и формирование новой базальной мембраны. Многие в пробирке тесты были разработаны для изучения этого процесса, но большинство лишь имитируют определенные этапы ангиогенеза, и морфологически судов в анализах часто не похожи на судах в естественных условиях. На основе более ранних работ Nehls и Drenckhahn, мы оптимизировали в пробирке ангиогенеза анализа, который использует пупочной вены человека ЕС и фибробластов. Эта модель повторяет все ключевые ранних стадий ангиогенеза и, что немаловажно, судов дисплей патент межклеточных люмен окруженной поляризованной ЕС. ЕС покрыты на микроносителях cytodex и встроенных в гель фибрина. Фибробласты слой поверх геля, где они обеспечивают необходимый растворимых факторов, которые способствуют прорастанию ЕС с поверхности бусины. После нескольких дней, многочисленные суда присутствуют, которые можно легко наблюдается при фазово-контрастной и покадровой микроскопии. Это видео демонстрирует основные этапы в создании этих культур.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Optimized Fibrin Gel Bead Assay for the Study of Angiogenesis at JoVE.com

Optimized Fibrin Gel Bead Assay for the Study of Angiogenesis

<p class="jove_content">Это видео демонстрирует протокол в анализе ангиогенеза пробирке, что повторяет несколько стадий ангиогенеза. Покадровый изображения прорастания, просвет образования, ветвление и анастомоза - ключевые особенности ангиогенез - это показано на рисунке.</p>

Оптимизированная фибринового геля из бисера тест для изучения ангиогенеза

Angiogenesis is a complex multi-step process, where, in response to angiogenic stimuli, new vessels are created from the existing vasculature.  These ...

Research

JoVE Journal

Biology

Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards

Тестирование зрительной чувствительности к скорости и направления движения в Ящерицы

Testing visual sensitivity in any species provides basic information regarding behaviour, evolution, and ecology. However, testing specific features of ...

Christopher Hughes:  An in vitro model for the Study of Angiogenesis (Interview)

Christopher Hughes:  An in vitro model for the Study of Angiogenesis Interview

Кристофер Хьюз: в пробирке модель для изучения ангиогенеза (Интервью)

Christopher C.W. Hughes describes the utility of his culture system for studying angiogenesis in vitro.  He explains the importance of fibroblasts that ...

Computer-Generated Animal Model Stimuli

Компьютерные Стимулы животной модели

Communication between animals is diverse and complex. Animals may communicate using auditory, seismic, chemosensory, electrical, or visual signals. In ...

Isolation and Purification of <em>Drosophila</em> Peripheral Neurons by Magnetic Bead Sorting

Isolation and Purification of Drosophila Peripheral Neurons by Magnetic Bead Sorting

Выделение и очистка<em> Drosophila</em> Периферийные Нейроны магнитными бисера Сортировка

The Drosophila peripheral nervous system (PNS) is a powerful model for investigating the complex processes of neuronal development and dendrite ...

Rat Mesentery Angiogenesis Assay

Крыса Брыжейка Ангиогенез Пробирной

The adult rat mesentery window angiogenesis assay is biologically appropriate and is exceptionally well suited to the 
study of sprouting angiogenesis in ...

Do-It-Yourself Device for Recovery of Cryopreserved Samples Accidentally Dropped into Cryogenic Storage Tanks

Do-It-Yourself Устройство для восстановления криоконсервированных образцов случайно уронил в криогенных резервуаров

Liquid nitrogen is colorless, odorless, extremely cold (-196 &deg;C) liquid kept under pressure. It is commonly used as a cryogenic fluid for long term ...

Agarose Gel Electrophoresis for the Separation of DNA Fragments

Агарозном геле для разделения фрагментов ДНК

Agarose gel electrophoresis is the most effective way of separating DNA fragments of varying sizes ranging from 100 bp to 25 kb1. Agarose is isolated from ...

Endothelial Cell Tube Formation Assay for the <em>In Vitro</em> Study of Angiogenesis

Endothelial Cell Tube Formation Assay for the In Vitro Study of Angiogenesis

Эндотелия Формирование Анализ сотового трубка для<em&gt; In Vitro</em&gt; Изучение ангиогенеза

Angiogenesis is a vital process for normal tissue development and wound healing, but is also associated with a variety of pathological conditions. Using ...

Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA) for the Study of RNA-Protein Interactions: The IRE/IRP Example

Electrophoretic Mobility Shift Assay EMSA for the Study of RNA-Protein Interactions: The IRE/IRP Example

Электрофоретической подвижности сдвига анализа (EMSA) по изучению РНК-белковых взаимодействий: ИРЭ / IRP примера

RNA/protein interactions are critical for post-transcriptional regulatory pathways. Among the best-characterized cytosolic RNA-binding proteins are iron ...

A Simple Bioassay for the Evaluation of Vascular Endothelial Growth Factors

Простой биопроб для оценки факторов роста эндотелия сосудов

The analysis of receptor tyrosine kinases and their interacting ligands involved in vascular biology is often challenging due to the constitutive ...