Name: tissue determination using the animal cap transplant (act) assay in xenopus laevis
Uploaded: 2010-05-16T17:00:00
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Ce travail a été soutenu par des subventions de recherche pour prévenir la cécité (Bourses de développement de carrière à MEZ et ASV et une subvention sans restriction à du Département d&#39;ophtalmologie), la Fondation E. Matilda Ziegler (MEZ et ASV) et le National Eye Institute / NIH (MEZ , les subventions et R01EY015748 R01EY017964).

Partie I. Mise en place pour le test ACT <ol><li> Générer ARN coiffé d&#39;injection tel que suggéré par le fabricant, en utilisant leur phénol: chloroforme méthode de purification (par exemple mMessage mMachine Kit; Applied Biosystems / Ambion, Austin, TX). ARN codant pour une protéine fluorescente est utilisée comme traceur. On supporte transcrire protéine fluorescente jaune (YFP) ou mCherry 5 ADNc, qui est dans un vecteur d&#39;expression pCS2 +. </li><li> Tirez tubes en verre borosilicate capi...

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	<li>Smith, W. C., Harland, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+cloning+of+noggin,+a+new+dorsalizing+factor+localized+to+the+Spemann+organizer+in+Xenopus+embryos.">Expression cloning of noggin, a new dorsalizing factor localized to the Spemann organizer in Xenopus embryos.</a> Cell. 70, 829-840 (1992).</li><li>Lamb, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+induction+by+the+secreted+polypeptide+noggin.">Neural induction by the secreted polypeptide noggin.</a> Science. 262, 713-718 (1993).</li><li>Green, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Methods+in+Developmental+Biology:+Xenopus+&#38;+Zebrafish.">Molecular Methods in Developmental Biology: Xenopus &#38; Zebrafish.</a> Methods in Developmental Biology. , (1999).</li><li>Viczian, A. S., Solessio, E. C., Lyou, Y., Zuber, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+functional+eyes+from+pluripotent+cells.">Generation of functional eyes from pluripotent cells.</a> PLoS Biol. 7, e1000174-e1000174 (2009).</li><li>Shaner, N. C., Steinbach, P. A., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+choosing+fluorescent+proteins.">A guide to choosing fluorescent proteins.</a> Nat Methods. 2, 905-909 (2005).</li><li>Brown, A. L., Johnson, B. E., Goodman, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+patch-pipettes+and+sharp+electrodes+with+a+programmable+puller.">Making patch-pipettes and sharp electrodes with a programmable puller.</a> J Vis Exp. , (2008).</li><li>Lan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noggin+Elicits+Retinal+Fate+in+Xenopus+Animal+Cap+Embryonic+Stem+Cells.">Noggin Elicits Retinal Fate in Xenopus Animal Cap Embryonic Stem Cells.</a> Stem Cells. , (2009).</li></ol>

Dans cette vidéo, nous avons démontré notre version de techniques classiques utilisées par les biologistes de Xenopus, qui nous réarrangés pour créer le test greffe animale bouchon. A température ambiante, les embryons de xénope se développer très rapidement à travers les étapes 9 et 15. En les plaçant à 14 ° C, le développement de l&#39;embryon est ralentie et beaucoup d&#39;autres greffes peuvent être effectuées en une seule expérience. S&#39;il est nécessaire d&#39;augmenter les...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd"><html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en"><div><table border="1"><thead><tr><th> Nom du produit </th><th> Type </th><th> Entreprise </th><th> Numéro de catalogue </th><th> Commenter </th></tr></thead><tbody><tr><td> mMessage mMachine SP6 Kit </td><td></td><td> Applied Biosystems / Ambion </td><td> AM1340 </td><td></td><tr><td> Tubes capillaires en borosilicate (1.0mm x 0.5mm OD ID) </td><td></td><td> FHC, Inc </td><td> 27-30-1 </td><td></td><tr><td> Sutter Micropipette Puller </td><td></td><td> Sutter Instruments, Inc </td><td> P-97 </td><td></td><tr><td> Sulfate de gentamicine [50 mg / ml] </td><td></td><td> Pêcheur </td><td> BW17-528Z </td><td></td><tr><td> Sylgard / Kit élastomère £ 1,1 </td><td></td><td> Pêcheur </td><td> NC9644388 </td><td></td><tr><td>60 x 15 mm boîte de Pétri en polystyrène </td><td></td><td> USA Scientific </td><td> 8609-0160 </td><td></td><tr><td> gonadotrophine chorionique humaine </td><td></td><td> Intervet </td><td> 22219 </td><td></td><tr><td> Pico-injecteur systèmes de microinjection </td><td></td><td> Harvard Apparatus </td><td> 650003 </td><td></td><tr><td> Torrey Pines Scientific Incubateur ECHOtherm </td><td></td><td> Pêcheur </td><td> 11-680-21 </td><td></td><tr><td> Transfert de pipette </td><td></td><td> Krackeler </td><td> 6290-20635A </td><td></td><tr><td> Dumostar ° 5 Pince </td><td></td><td> Pêcheur </td><td> 11295-10 </td><td></td></tbody></table></div>

tissue determination using the animal cap transplant (act) assay in xenopus laevis

De nombreuses protéines jouent un double rôle dans le développement embryonnaire. Celles qui régissent la détermination du destin cellulaire dans un tissu spécifique peut également affecter le développement d&#39;une grande région de l&#39;embryon. Cela rend la définition de son rôle dans un tissu particulier difficile à analyser. Par exemple,<em&gt; Caboche</em&gt; Surexpression dans<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embryons provoque la dilatation de l&#39;ensemble de la région antérieure, y compris l&#39;oeil<sup&gt; 1,2</sup&gt;. De ce fait, on ne sait pas si Noggin joue un rôle direct dans la détermination de l&#39;œil ou en provoquant une expansion du tissu neural, Noggin affecte indirectement la formation de l&#39;œil. Ayant ce phénotype complexe rend l&#39;étude de son œil le rôle spécifique dans la détermination du destin cellulaire difficiles à analyser. Nous avons développé un test qui permet de surmonter ce problème. Profitant du caractère pluripotent de l&#39;<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Animaux bouchon<sup&gt; 3</sup&gt;, Nous avons développé un test pour tester l&#39;aptitude du produit du gène (s), comme<em&gt; Caboche</em&gt; Ou les facteurs de transcription (oeil de champ EFTFs), pour transformer les bouchons dans un tissu particulier ou des types de cellules en transplantant ce tissu sur le côté de l&#39;embryon<sup&gt; 4</sup&gt;. Bien que nous ayons constaté qu&#39;il s&#39;agisse du traitement de protéine Noggin ou un ensemble de facteurs de transcription peuvent déterminer le destin des cellules rétiniennes dans les calottes animales, cette procédure pourrait être utilisée pour identifier le produit du gène (s) impliqué dans la spécification d&#39;autres tissus ainsi.

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Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant ACT Assay in Xenopus laevis

Animaux bouchons surexprimant le produit du gène (s) sont transplantées dans le flanc de développement<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embryons afin d&#39;établir si le tissu est déterminée.

Détermination des tissus Utilisation de la transplantation Cap animale (ACT) Dosage dans<em&gt; Xenopus laevis</em

Many proteins play a dual role in embryonic development. Those that regulate cell fate determination in a specific tissue can also affect the development ...

Research

JoVE Journal

Biology

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant (ACT) Assay in Xenopus laevis

Dissection of Organizer and Animal Pole Explants from Xenopus laevis Embryos and Assembly of a Cell Adhesion Assay

Dissection de l&#39;organisateur et explants pôle animal à partir d&#39;embryons de Xenopus laevis et de l&#39;Assemblée d&#39;un test d&#39;adhésion cellulaire

Recherche

Biologie

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The eggs of Xenopus laevis intact, lysed, and/or fractionated are useful for a wide variety of experiments. This protocol shows how to induce egg laying, ...

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Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic ...

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This article describes and compares the fat pad clearance procedure developed by DeOme KB et al.1 and the sparing procedure developed by Brill B et al.2, ...

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Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes ...

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Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

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Transplantations faciales<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embryons

Craniofacial birth defects occur in 1 out of every 700 live births, but etiology is rarely known due to limited understanding of craniofacial development. ...

Dissection of Xenopus laevis Neural Crest for in vitro Explant Culture or in vivo Transplantation

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Dissection de<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Crête neurale pour<em&gt; In vitro</em&gt; Culture explantation ou<em&gt; In vivo</em&gt; Transplantation

The neural crest (NC) is a transient dorsal neural tube cell population that undergoes an epithelium-to-mesenchyme transition (EMT) at the end of ...